植物病毒蛋白磷酸化的研究进展

磷酸化是真核细胞中常见的一种翻译后修饰方式,它对生物体内多种代谢活动和细胞信号转导过程起着调控作用。植物病毒蛋白通过磷酸化和去磷酸化修饰调节蛋白质的生物活性,从而影响细胞内的生物信号传递。磷酸化修饰的植物病毒蛋白参与调控病毒的侵染、病毒RNA的合成、病毒的RNA沉默以及调控宿主基因的表达。近年来,植物病毒蛋白磷酸化的分子机制得到了广泛和深入的研究。本文总结了植物病毒蛋白磷酸化修饰的位点、磷酸化鉴定方法及其生物学功能,为磷酸化在植物和病毒相互作用中的生物学功能提供了参考。

7种内共生病毒对柑橘木虱生殖力的影响

【目的】柑橘木虱吸食柑橘和九里香等芸香科植物,更是柑橘黄龙病的主要传播媒介。了解柑橘木虱共生微生物对虫体产卵量的影响,可为该虫的生态调控提供理论依据。【材料】应用Illumina HiSeq技术对柑橘木虱进行转录组和小RNA(siRNA)高通量测序,对拼接的序列进行功能注释。通过单雌单苗的饲养方法,分析通过测序揭晓的7种内共生病毒对柑橘木虱的影响,包括单雌总产卵量、单雌日产卵量和单雌寿命的变化。【结果】通过高通量测序共获得unigenes序列22429条,共有17673条unigenes注释至NR、NT、Pfam等数据库。根据siRNA分析数据,获得了多条柑橘木虱内共生病毒的序列。生物学验证试验发现,柑橘木虱呼肠孤病毒、Hubei tick virus 2、褐飞虱呼肠孤病毒、Mal de Rio Cuarto virus、Synechococcus phage S-RSM4、Tokyovirus A1 DNA和Diaphorina citri picorna-like virus isolate BR17种内共生病毒显著降低了雌虫群体总产卵量,但是对单雌日产卵量和单雌寿命无显著影响。【结论】研究结果为柑橘木虱的共生微生物多样性提供证据,也为进一步探索内共生病毒对宿主昆虫的意义提供了思路和理论基础,为后续柑橘木虱-内共生微生物的互作研究提供数据支持。

4种茉莉病毒一步法多重RT-PCR检测技术的建立

茉莉生长过程中普遍受到多种病毒的复合侵染。由于缺乏病毒与症状关系的系统研究,仅通过症状很难准确分辨茉莉被何种病毒侵染,所以建立快速精准诊断多种茉莉病毒病的检测技术具有重要应用价值。本研究建立了一种可同时检测4种茉莉病毒——茉莉T病毒(jasmine virus T,JaVT)、茉莉C病毒(jasmine virus C,JaVC)、茉莉H病毒(jasminevirus H,JaVH)和茉莉A病毒(jasmine virus A,JaVA)——的一步法多重逆转录PCR(one-step multiplex reverse transcription-PCR,RT-PCR)体系,其最优反应体系为:在总体系20.0μL中,JaVT、JaVC、JaVH和JaVA的上下游引物浓度分别为200、150、100和150nmol·L^(-1),One-step Enzyme Mix:0.2μL,2x反应缓冲液:10.0μL,模板量:1.0μg;多重RT-PCR参数设定为:RNA反转录50℃30min;预变性94℃2min;94℃变性30s;55℃退火30s;72℃延伸45s,30个循环;72℃整体延伸10 min。研究结果表明建立的一步法多重RT-PCR可同时高效精准地检测4种茉莉病毒,极大地提高了检测效率,可被广泛应用于实验室精准、高效检测和田间茉莉病毒病的检测。

茉莉H病毒外壳蛋白基因的克隆、原核表达及抗血清制备

茉莉H病毒(jasmine virus H,JaVH)是近年来引起茉莉病毒病的一种新病毒,Zhuo等[1]在我国福建黄化嵌纹的茉莉上首次发现并报道,随后Dey等[2]在美国夏威夷和华盛顿也发现了JaVH,并认为其是引起茉莉病症不可或缺的致病因子之一。

茉莉C病毒侵染性克隆的构建及CP基序分析

【目的】构建茉莉C病毒(JaVC)福建分离物基因组全长cDNA侵染性克隆,克隆9省JaVC分离物的CP基因并比较分析基序差异,调查JaVC在我国茉莉产区的分布和传播情况。【方法】提取JaVC检测呈阳性的茉莉叶片总RNA,以反转录后的cDNA为模板扩增获得JaVC基因组全长序列并构建全长cDNA克隆pXT-JaVC-FJ;同时构建了外壳蛋白(coat protein,CP)融合红色荧光蛋白mCherry的克隆(pXT-JaVC CP-mCherry)。利用农杆菌浸润法侵染本生烟,通过RT-PCR检测法和激光共聚焦扫描显微镜观察法验证JaVC侵染性。克隆其他8省JaVC分离物的3'末端包含CP的片段并测序分析CP基序差异。通过田间调查明确JaVC在茉莉上的发生情况和其传播介体。【结果】pXT-JaVC-FJ浸润本生烟可引起系统侵染,说明该克隆具有侵染活性。所有JaVC分离物的CP均编码296个氨基酸,JaVC中国台湾分离物的CP与各分离物核苷酸序列相似性为82.27%‒91.36%,与广东分离物相似性最高;氨基酸序列相似性为92.23%‒96.82%,与云南分离物相似性最高;各分离物CP的氨基酸序列在32‒35位点上差异显著,具有6种不同的氨基酸基序排列,分别为SEHA、GENA、REGT、SENA、GGDA和GGNA。田间调查显示,JaVC在中国茉莉植株上广泛分布且可在蓟马中检测到JaVC。【结论】成功构建了JaVC-FJ的侵染性克隆,这为该病毒的基因功能、致病机理等研究奠定了基础;通过我国茉莉产区JaVC的发生及变异情况分析,为JaVC引起的病毒病的防治提供了理论依据。