全自动高通量与半自动ELISA检测HBV血清标志物临床应用比较

目的比较全自动高通量ELISA(全自动法)和半自动ELISA检测系统(半自动法)对HBV血清标志物结果的差异,探讨全自动ELISA检测系统的临床应用价值。方法对自2011年6月至2013年4月用半自动和2013年6月至2015年4月用全自动法检测HBV 5项血清标志物的数据进行回顾性研究。统计日常应用室内定值弱阳性质控S/CO值的CV值、失控率、失控原因以及临床标本的复检率、复检样本的符合率,并进行统计学分析。结果全自动法检测HBV 5项血清标志物室内质控S/CO值的CV值(24.66%、25.44%、23.8%、49.64%、70.14%)均小于半自动法(27.67%、34.32%、29.21%、54.88%、90.6%)。失控率(0.99%、1.66%、1.32%、0.66%、0.5%)均小于半自动法(1.5%、1.82%、1.66%、1.0%、0.67%),但无明显差异(P>0.05)。日常标本的复检率(1.62%)明显小于半自动法(3.55%)(P<0.01)。复检样本的符合率(55.37%)明显大于半自动法(42.11%)(P<0.01),特别是HBV血清标志物少见模式和HBs Ag弱阳性样本的检测。结论全自动法检测HBV血清标志物的稳定性、重复性以及准确性均优于半自动法。

2型糖尿病患者血液指标变化及临床意义

目的探讨脂蛋白a(Lpa),同型半胱氨酸(Hcy),总胆红素(TBiL),胱抑素C(CysC),尿素氮(BUN),肌酐(Cr),超敏CRP(hs-CRP),白细胞(WBC),血小板(PLT),血小板平均体积(MPV),血小板平均分布宽度(PDW)在糖尿病患者不同血糖控制程度下的变化。方法采用深圳迈瑞全自动5分类的血细胞分析仪、日本ARKRAY全自动糖化血红蛋白仪及美国贝克曼DXC 800全自动生化分析仪对254例2型糖尿病患者和67例健康对照组进行WBC、PLT、MPV、PDW、hs-CRP、Lpa、Hcy、TBiL、CysC、BUN、Cr、糖化血红蛋白(GHbA1C)测定。结果在不同血糖控制程度下hs-CRP、Lpa、CysC的3项指标均高于健康对照组(P<0.05),而其他指标与健康对照组相比,差异无显著差异(P>0.05)。结论 2型糖尿病患者需要密切监测hs-CRP、Lpa、CysC的3项指标。

真核翻译起始因子4E在初治多发性骨髓瘤患者中的表达和临床意义

目的:探讨初治多发性骨髓瘤(NDMM)患者骨髓标本中真核翻译起始因子4E(eIF4E)的表达情况及其临床意义。方法:采用免疫组织化学染色方法分析75例NDMM患者和25例良性骨髓疾病ITP患者骨髓活检标本中eIF4E蛋白的表达情况。收集临床资料,分析NDMM患者骨髓标本中eIF4E蛋白表达与临床特征的相关性及其预后意义。结果:NDMM患者骨髓标本中eIF4E蛋白表达阳性率明显高于良性骨髓疾病患者(P<0.001)。eIF4E蛋白表达阳性与NDMM患者血清乳酸脱氢酶升高存在相关。单因素和多因素分析结果表明,eIF4E蛋白表达阳性与NDMM患者总生存期(OS)缩短显著相关,是影响NDMM患者OS的独立危险因素。结论:eIF4E蛋白表达阳性是NDMM患者OS的独立不良预后因素。

中性粒细胞源性外泌体促进肺腺癌细胞的迁移和侵袭

目的研究中性粒细胞源性外泌体对肺腺癌细胞迁移和侵袭的影响。方法采用1μmol/L全反式维甲酸(ATRA)诱导人早幼粒细胞白血病NB4细胞分化成中性粒细胞,MGG染色分析其形态学的改变,流式细胞技术检测其表面标志物CD11b及CD18的表达。采用总外泌体试剂盒分离提取NB4细胞和中性粒细胞来源的外泌体,利用透射电镜技术鉴定外泌体的形态与大小。通过细胞划痕和Transwell迁移实验分析NB4细胞和中性粒细胞来源的外泌体对A549细胞迁移能力的影响。采用Transwell侵袭实验研究NB4细胞和中性粒细胞来源的外泌体对A549细胞侵袭能力的影响。结果MGG染色结果显示NB4细胞经ATRA诱导后分化成中性粒细胞,且流式细胞检测结果表明中性粒细胞表面标志物CD11b及CD18表达明显升高。电镜下观察到NB4细胞和中性粒细胞来源的外泌体大小为40~100 nm,形态呈双层膜,中空,圆形或椭圆形。细胞划痕和Transwell实验证实,中性粒细胞源性外泌体比NB4细胞源性外泌体能更明显地增强肺腺癌细胞的迁移和侵袭能力。结论中性粒细胞源性外泌体能明显促进肺腺癌细胞的迁移和侵袭,参与肺腺癌的发生发展。

尿细胞角蛋白在上尿路移行细胞癌诊断中的作用

目的 评价尿细胞角蛋白(CK)8和CK18对上尿路移行细胞癌(TCC)的诊断价值。方法 采用 ELISA法检测 21 例上尿路TCC及51例非TCC的上尿路疾病患者尿液中CK8、CK18含量,并同时行尿脱落细胞学和影像学检查。结果 TCC患者尿CK8、CK18的中位质量浓度为17.3μg/L, 与非TCC患者的4.2μg/L比较, 差异有显著性意义(P<0.01)。尿CK诊断上尿路TCC的敏感性和特异性分别为81.0%和74.5%,与影像学的85.7%和70.6%比较,差异均无显著性意义(P>0.05) ;与尿细胞学的14.3%和100%比较,差异均有显著性意义(P<0.01)。结论 尿CK8、CK18检测对上尿路 TCC的诊断是一种较为敏感、特异且无创的方法,与影像学和尿细胞学相结合,可提高上尿路病变诊断的准确性。

福州地区儿童急性呼吸道人类偏肺病毒感染

目的探讨人类偏肺病毒（HMPV）在福州市冬春季儿童急性呼吸道感染（ARTI）中的流行情况及其临床意义。方法86例年龄8个月～14岁ARTI患儿的咽拭子，用巢式逆转录聚合酶反应（RT-PCR）的方法检测脱落细胞的HMPV的M基因、呼吸道合胞病毒（RSV）的N基因。结果HMPV阳性19例（22．1％），RSV阳性11例（12．8％）；其中3例HMPV与RSV均阳性。DNA测序显示，3份HMPVPCR产物核苷酸序列相同，与GenBank中的HMPVM基因片段核苷酸序列同源性88％～98％。结论HMPV是引起福州市儿童ARTI的常见病原之一。HMPV可与RSV合并引起ARTI。

血清五种肿瘤标志物检测对肺癌早期诊断的价值

目的探讨血清肿瘤标志物癌胚抗原(CEA)、细胞角蛋白19片段(CYFRA21-1)、鳞状细胞癌抗原(SCCAg)、神经元特异性烯醇化酶(NSE)、胃泌素释放肽前体(ProGRP)在肺癌早期诊断中的价值。方法收集94例肺鳞癌(SCC)、169例肺腺癌(AD)、74例小细胞肺癌(SCLC)患者与151例肺部良性疾病(LBL)患者,采用电化学发光法检测患者的血清CEA,CYFRA21-1,NSE及ProGRP水平,采用化学发光法检测SCCAg。结果CEA,CYFRA21-1,SCCAg,NSE及ProGRP对肺癌诊断的特异性分别88.1%,70.9%,84.1%,84.1%及94.7%。5种标志物在SCC组Ⅰ+Ⅱ期的阳性率分别为26.3%,57.9%,44.7%,15.8%及5.3%,其中CEA(P<0.05),CYFRA21-1及SCCAg(P<0.01)的阳性率明显高于LBL组;CYFRA21-1,SCCAg及NSE的阳性率明显低于Ⅲ+Ⅳ期(P<0.05)。5种标志物在AD组Ⅰ+Ⅱ期的阳性率分别为16.7%,27.8%,9.7%,11.1%及4.2%,与LBL组比较差别无统计学意义(P>0.05);CEA,CYFRA21-1及NSE阳性率明显低于Ⅲ+Ⅳ期(P<0.01)。5项标志物在SCLC组局限期的阳性率分别为41.7%,55.6%,19.4%,53.8%及75.0%,其中CEA,CYFRA21-1,NSE及ProGRP的阳性率明显高于LBL组(P<0.01);NSE阳性率明显低于广泛期(P<0.05)。在SCC组(Ⅰ+Ⅱ期)、AD组(Ⅰ+Ⅱ期)及SCLC组局限期中,约登指数最高的单项指标分别为CYFRA21-1/SCCAg(0.29),CEA(0.05),ProGRP(0.67);约登指数最高的联合检测组合分别为CEA+CYFRA21-1+SCCAg(0.32),CEA+CYFRA21-1(0.05),NSE+ProGRP(0.62)。结论5种肿瘤标志物中,以ProGRP对SCLC的早期诊断效能最高,NSE与SCLC病程的进展相关。SCCAg及CYFRA21-1对SCC早期诊断效能最高且与SCC病程的进展相关,其中CYFRA21-1虽敏感性最高(57.9%),但特异性不佳(70.9%)。5种标志物的检测对AD均不具早期诊断价值,肿瘤标志物的联合检测并不能明显提高对上述3种类型肺癌的早期诊断效能。

应用变性高效液相色谱法检测幽门螺杆菌对克拉霉素的耐药性

目的建立DHPLC快速检测Hp对克拉霉素耐药性的新方法。方法抽提56份经纸片琼脂扩散法鉴定为克拉霉素耐药的Hp菌株DNA及其对应的胃粘膜组织标本DNA,通过PCR技术扩增23SrRNA区187bp基因,运用DHPLC技术对PCR产物进行突变分析,并进行DNA测序。结果 56份克拉霉素耐药的Hp菌株DNA经DHPLC分析,有51份存在异源双链峰,测序证实均存在点突变,5份无异源双链峰,测序证实无点突变,故DHPLC对基因突变耐药菌株的敏感性和特异性为100%,而且56份组织标本DNA检测结果与菌株DNA检测结果一致。结论 DHPLC可应用于Hp对克拉霉素耐药性的快速检测,具有广阔的临床应用前景。

Marfan综合征FBN1基因新的剪接位点的置换突变

目的对Marfan综合征(MFS)患者的原纤维蛋白-1基因(FBN1)进行突变筛查,探讨MFS患者新的FBN1突变。方法应用聚合酶链反应(PCR)和变性高效液相色谱法(DHPLC)对1例MFS患者FBN1的65个外显子进行突变筛查,对DHPLC图形异常的PCR扩增片段用DNA测序鉴定突变位点及性质。用限制性片段长度多态性分析法(RFLP)进一步证实突变。结果发现1种新的FBN1剪接位点的置换突变(Intron29+4A>T)。结论FBN1的Intron29+4A>T可能为该MFS患者的发病原因。

人博卡病毒实时荧光定量PCR检测方法的建立

目的建立人博卡病毒(human Bocavirus,HBoV)的实时荧光定量PCR(real-time fluorescent quanti-tative PCR,FQ-PCR)检测方法,检测呼吸道感染患儿标本的HBoV。方法设计HBoV NP1基因的引物和Taqman探针,扩增NP1基因片段,并将其克隆到pGEM-T Easy载体上,构建质粒标准品,建立FQ-PCR检测方法,进行敏感性、特异性试验,检测195份临床标本。结果所建立的FQ-PCR方法对临床其他呼吸道病毒不出现特异性扩增曲线,特异性好,线性范围为10～108copies/μl。195份临床标本中HBoV阳性12份,阳性率为6.2%。结论成功建立了HBoV实时荧光定量PCR检测方法并检测临床标本,为人博卡病毒感染的临床治疗提供快速、可靠的诊断依据。

NGS和MLPA技术检测2例马凡综合征患者FBN1基因缺失突变

目的对2例马凡综合征(Marfan's syndrome,MFS)患者的原纤维蛋白-1基因(FBN1)进行突变检测。方法提取患者的外周血全基因组DNA,用第二代测序技术(NGS)和多重连接探针扩增技术(MLPA)对FBN1进行突变筛查,对这2种方法提示有拷贝数异常的外显子进行PCR和DNA Sanger测序以证实突变。结果 NGS和MLPA技术检测均显示1例患者有18号外显子缺失突变,另1例患者其56号外显子有缺失突变。经PCR和Sanger测序证实前者18号外显子及其两侧翼区有大片段缺失c.2114-2357_2167+747del3158bp,后者第56号外显子及其内含子有9 bp的缺失突变c.6864_c.6871+1del CTGTGTAGG。结论 NGS和MLPA技术有助于筛查基因组缺失突变,但仍需借助Sanger测序等方法验证。

中性粒细胞CD64定量检测在感染性疾病检测中的应用

目的探讨中性粒细胞CD64定量检测在感染性疾病检测中的应用。方法选取382例ICU住院患者,将其分为非细菌感染组、局部感染组和脓毒血症组,同期选取30例健康体检,应用流式细胞仪检测中性粒细胞CD64,同时检测外周血白细胞计数(WBC)及中性粒细胞比例(NE%)、C反应蛋白(CRP)和降钙素原(PCT)。结果局部感染组和脓毒血症组的中性粒细胞CD64、PCT、CRP、WBC、NE%均高于健康对照组及非细菌感染组(P<0.05),脓毒血症组的中性粒细胞CD64、PCT、CRP、WBC、NE%高于局部感染组(P<0.05),中性粒细胞CD64的ROC曲线下面积最大(0.903),当其临界值取1500 MESF时,敏感性为94.5%,特异性为90.6%。结论与PCT、CRP、WBC及NE%相比,中性粒细胞CD64可作为检测和监测感染性疾病的敏感指标。

3种稀释液对高值血清酶类稀释结果的影响

目的探讨3种常用稀释液对7种酶类的高值结果进行稀释后对测定结果的影响。方法对线性范围内的高值血清酶类:丙氨酸氨基转氨酶(ALT)、门冬氨酸氨基转氨酶(AST)、碱性磷酸酶(ALP)、γ-谷氨酰基转肽酶(GGT)、肌酸激酶(CK)、乳酸脱氢酶(LDH)、α-羟基丁酸脱氢酶(HBDH),用3种常见的稀释液(注射用水、生理盐水、低值血清)以不同稀释倍数(1∶2、1∶4、1∶8)进行稀释后检测。结果 CK测定时3种稀释液在1∶2的低稀释倍数,相关性及偏差分析均符合要求,用注射用水和生理盐水在更高倍稀释时不被允许,而用低值血清作为稀释液3种稀释系列均符合要求。其他酶类不论用哪种稀释液,3个稀释比例检测结果均符合要求。结论除CK外,在1∶8倍稀释范围内,注射用水、生理盐水、低值血清均可作为高值酶类ALT、AST、GGT、ALP、LDH、HBDH的稀释液。

四种组织工程瓣膜种子细胞功能的检测与分析

目的通过分析组织工程心脏瓣膜种子细胞的细胞功能指标,为种子细胞的临床筛选提供实验室依据。方法在体外分离、培养、扩增及传代hECs(人大隐静脉内皮细胞)、hMFbs(人大隐静脉壁肌成纤维细胞)、hMSCs(人骨髓间质干细胞)、hMSC-ECs(hMSCs体外向内皮细胞诱导分化细胞)四种种子细胞,按照试剂盒说明书分别测定其PGI2(前列环素2)、NO(一氧化氮)、ET-1(内皮素-1)及t-PA(组织纤溶酶原激活剂)等四个细胞功能指标的含量。结果hECs组的PGI2、ET-1指标明显高于其余三组(P<0.01);hECs组及hMSC-ECs组间的NO指标无差异(P>0.05),但均高于hMFbs组和hMSCs组(P<0.05);hECs组、hMSCs组及hMSC-ECs组的t-PA指标高于hMFbs组(P<0.05)。结论四种种子细胞各有其特点,但综合考虑,hMSC-ECs作为组织工程心脏瓣膜种子细胞更具优越性。

白介素检测在急性胰腺炎鉴别诊断中的应用

目的探讨白介素(IL)检测在急性胰腺炎鉴别诊断中的应用.方法选取急性胰腺炎患者30例,胰腺癌确诊患者30例,同时选取30例健康体检者为对照组,采用化学发光法分别检测IL-1β、IL-2R、IL-6、IL-8和IL-10.结果急性胰腺炎组的IL-1β、IL-6、IL-8和IL-10高于胰腺癌组和健康对照组(P<0􀆰05),急性胰腺炎组的IL-2R与胰腺癌组差异无统计学意义(P>0.05),但高于健康对照组(P<0.05),胰腺癌组的IL-1β、IL-2R、IL-6和IL-8高于健康对照组(P<0.05),而胰腺癌组的IL-10与健康对照组差异无统计学意义(P>0.05).结论IL-1β、IL-6、IL-8和IL-10检测可用于急性胰腺炎的鉴别诊断.

成人血清IL-1β、IL-2r、IL-6、IL-8和IL-10正常参考区间的建立

目的建立成人血清IL-1β、IL-2r、IL-6、IL-8和IL-10正常参考区间。方法收集健康体检者180例,利用Immulite 1000自动化学发光免疫分析仪检测血清IL-1β、IL-2r、IL-6、IL-8和IL-10的水平。结果成人血清IL-1β、IL-2r、IL-6、IL-8和IL-10的95%正常参考区间分别为:<5 pg/mL、<572 U/mL、<2 pg/mL、<70.5 pg/mL和<5 pg/mL。结论初步建立本实验室Immulite 1000自动化学发光免疫分析仪成人血清IL-1β、IL-2r、IL-6、IL-8和IL-10正常参考区间。

肺腺癌细胞源性外泌体活化的人THP-1巨噬细胞促进肺癌细胞的侵袭

目的研究肺腺癌细胞来源的外泌体对巨噬细胞极化的作用及受外泌体作用后的巨噬细胞对肺癌细胞生物学行为的影响。方法提取A549和H1299肺腺癌细胞外泌体,Western blot法检测其表面标志物CD9、CD63进行鉴定。100 ng/mL佛波酯(PMA)处理人THP-1细胞48 h,实时定量PCR检测细胞CD68的mRNA水平。200μg/mL外泌体处理贴壁巨噬细胞24 h后,实时定量PCR检测诱导型一氧化氮合酶(iNOS)、转化生长因子β(TGF-β)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)、CD163的mRNA水平,IMMULITE 1000化学发光免疫分析仪检测白细胞介素6(IL-6)、IL-8、IL-10的蛋白水平;将外泌体处理后的巨噬细胞分别与A549细胞和H1299细胞共培养,通过TranswellTM实验检测肺腺癌细胞侵袭能力,实时定量PCR检测基质金属蛋白酶2(MMP2)、MMP9的mRNA水平。结果CD9、CD63在外泌体高表达,PMA诱导后的巨噬细胞高表达CD68,外泌体处理后的巨噬细胞iNOS表达降低,CD163、TNF-α、IL-6、IL-8、IL-10表达水平均增加;外泌体处理后的巨噬细胞与肺腺癌细胞共培养,可增强肺腺癌细胞的侵袭能力并促进MMP2、MMP9的表达。结论肺腺癌细胞来源的外泌体可以诱导巨噬细胞极化,表现为M1/M2的混合表型,进而增强肺癌细胞的自身侵袭能力。

拉米夫定治疗慢性乙型肝炎患者乙型肝炎病毒YMDD变异的研究

目的探讨拉米夫定治疗1年后慢性乙型肝炎(CHB)患者发生YMDD基序变异的状况及其检测方法。方法采用荧光定量PCR法检测血清HBVDNA含量,荧光PCR法和变性高效液相色谱法检测HBVYMDD基序变异。结果61例CHB患者经过拉米夫定治疗1年后,40例(65.6%)HBVDNA阴转;在21例HBVDNA阳性患者中,10例为YMDD野生型,11例出现YMDD基序变异,变异率达18.0%(11/61)。在11例基序变异中,完全变异7例(63.6%),部分变异4例(36.4%)。在完全变异型中,YIDD变异型5例,YVDD变异型2例;在部分变异型中,YIDD变异型3例,YVDD变异型1例。结论CHB患者拉米夫定治疗1年后,出现较高的YMDD基序变异率。利用荧光PCR法结合变性高效液相色谱法检测基序变异,经济便捷,可作为CHB患者YMDD基序变异的常规监测。

福州地区急性呼吸道感染儿童人冠状病毒NL63、229E、HKU1和OC43的检测与分析

目的建立人冠状病毒（HCoV）-NL63、HCoV—HKU1、HCoV—OC43、HCoV-229E的实时荧光定量PCR法（FQ-PCR），调查Hc0V在福州地区急性呼吸道感染（ARTI）儿童中的流行情况。方法收集2006年10月～2007年4月、2007年10月-2。08年4月、2008年10月-2009年4月连续3个冬春季ARTI儿童鼻咽标本共538份。其中急性上呼吸道感染（AuRTI）289例，急性下呼吸道感染（ALRTI）249例。建立分别对HCoV-NL63、HCov-HKU1、HCoV—OC43、HCoV229E特异的FQ-PCR法。计数资料采用x2检验。结果建立了检测HCoV—NL63、HCoV-HKU1、HCoV—OC43、HCoV229E特异的FQ-PCR法，批内变异系数（CV）值与批间CV值均≤1．6V0。538份标本中，共检出冠状病毒阳性41份，占7．6％。其中HCoV—NL63阳性8份，占1．5％，含AURTI1例，ALRTI7例；HCoV-229E阳性5份，占0．9％，含AURTI1例，ALRTI4例；HCoV-HKU1阳性6份，占1．1％，含AURTI1例，ALRTI5例；HCoV—OC43阳性22份，占4．1％，含AuRTI13例，ALRTI9例。各型HCoV在各年份间的阳性率差异无统计学意义（P〉0．05）。HCoV—OC43阳性率显著高于HCoV—NL63、HCoV-229E和HCoV—HKU1（x2=6．721，10．979，9．387；均P〈0．01）。4种HCoV在连续3个冬春季节均有检出。结论HCoV-NL63、HCoV-HKU1、HCoV—OC43和HCoV-229E可能是冬春季福州地区ARTI患儿的病毒病原，对其进行临床检测有利于ARTI的病原学诊断与流行病学研究。

一个脊髓性肌萎缩伴呼吸窘迫1型家系IGHMBP2基因的突变分析

目的对1例脊髓性肌萎缩伴呼吸窘迫1型（spinal muscular atrophy with respiratory distress type1，SMARDl）患儿进行免疫球蛋白弘结合蛋白2（immunoglobulin μ-binding protein2，IGHMBP2）基因检测，为家系遗传咨询和产前诊断提供依据。方法提取患儿及其父母外周血基因组DNA，孕妇（患儿母亲）脐血细胞DNA。Sanger测序检测IGHMBP2基因编码区突变。结果患儿IGHMBP2基因检测到c．1060G〉A（p．Gly354Ser）杂合错义突变与c．2356delG（p．Ala786Profs＊45）移码突变。Sanger测序显示患儿父亲为c．1060G〉A杂合突变携带者，母亲为c．2356delG杂合突变携带者。脐血细胞DNA未检测到上述突变。结论IGHMBP2基因的c．1060G〉A错义突变和c．2356delG移码突变是患儿的致病原因。IGHMBP2基因检测为SMARD1的病因诊断和产前诊断提供了重要依据。