溴氰菊酯及6-羟基多巴胺对PC12细胞Nrf2/ARE通路影响

目的探讨溴氰菊酯(DM)与6-羟基多巴胺(6-OHDA)对转录因子NF-E2相关因子2(Nrf2)/抗氧化反应元件(ARE)通路作用的影响及差异。方法用10μmol/L溴氰菊酯处理PC12细胞1h或用100μmol/L6-OHDA处理PC12细胞17h后,用RT-PCR方法检测细胞Nrf2基因和其驱动的靶基因-γ-谷氨酰半胱氨酸合成酶(GCS,由重亚单位GCSh和轻亚单位GCS1组成)和血红素氧合酶(HO-1)基因 mRNA表达水平,蛋白印迹(Westernblot)方法检测细胞Nrf2蛋白水平,免疫荧光细胞化学技术检测细胞HO-1蛋白水平。结果 DM染毒诱导转录因子Nrf2 mRNA表达、激活Nrf2,Nrf2可能参与DM对Nrf2下游基因GCSh、GCS1以及HO-1表达的调控;6-OHDA能诱导PC12细胞Nrf2 mRNA和蛋白的表达以及激活Nrf2;6-OHDA也诱导细胞HO-1或GCSh mRNA和蛋白的表达。结论 DM与6-OHDA对Nrf2/ARE通路的作用相似,DM是可干扰Nrf2/ARE通路的神经毒物。

锰染毒对大鼠肾上腺嗜铬瘤细胞活性氧生成和miR-133b表达的影响

目的研究锰对大鼠肾上腺嗜铬瘤细胞(PC12)活性氧(ROS)的生成和miR-133b表达的影响。方法调整PC12细胞密度约为1×106/ml,以0(对照)、300、600μmol/L MnCl2分别染毒PC12细胞72 h,采用DCFH-DA荧光探针检测ROS生成情况;以0(对照)、100、300μmol/L MnCl2分别染毒PC12细胞24 h,采用荧光定量RT-PCR检测miR-133b相对表达水平。结果与对照组比较,300、600μmol/L MnCl2染毒组PC12细胞ROS水平升高(P<0.05);300μmol/L MnCl2染毒组PC12细胞miR-133b表达水平上调,而100μmol/L MnCl2染毒组PC12细胞miR-133b表达水平未见改变(P>0.05)。结论 MnCl2可诱导PC12细胞活性氧生成增加及miR-133b的表达上调。