SU11248干预白血病细胞HL-60对P27^KIP1和cyclin G蛋白表达的影响

目的:探讨SU11248对人髓系白血病细胞株HL-60的效应及其对HL-60细胞表达P27KIP1和cyclin G蛋白改变的影响。方法:应用MTT法检测SU11248对HL-60细胞增殖能力的影响;采用Western blot检测SU11248干预HL-60细胞前后P27KIP1和cyclin G蛋白表达水平的变化及其相关性。结果:不同浓度(0.5、1.0、2.0、4.0、8.0mg/L)SU11248作用HL-60细胞24h、48h、72h、96h后,SU11248可抑制HL-60细胞增殖,抑制作用呈现剂量和时间依赖性,半数抑制浓度(IC50)约为2.0mg/L。2.0mg/LSU11248作用HL-60细胞72h时抑制率达到最高。2.0mg/LSU11248作用HL-60细胞后cyclin G蛋白表达呈时间依赖性降低,而P27KIP1蛋白表达呈时间依赖性升高。两蛋白各时间组的改变与对照组相比差异均有统计学意义(P<0.05)。结论:SU11248具有抑制HL-60细胞增殖的生物效应,在HL-60细胞及SU11248干预HL-60细胞过程中,P27KIP1基因可能对cyclin G基因及细胞周期发挥负性调控作用。SU11248通过上P27KIP1、下调cyclin G而干扰细胞周期可能是其发挥抑制肿瘤细胞分裂的环节之一。

SU11248对白血病细胞HL-60增殖及凋亡作用的实验研究

目的:探讨新型抗肿瘤药物苹果酸舒尼替尼(SU11248)对白血病细胞HL-60的生物学效应的影响及其作用机制。方法:应用MTT法检测SU11248对HL-60细胞增殖能力的影响;用AnnexinV/PI双染流式细胞术检测细胞凋亡;用流式细胞技术分析细胞的DNA倍体及细胞周期变化;用凝胶电泳分析DNA片段化;以Western blot法检测2.0μg/ml SU11248作用HL-60后bcl-2、bax、caspase-3蛋白水平的变化。结果:SU11248可明显抑制HL-60细胞增殖(P<0.05),呈剂量和时间依赖性,半数抑制浓度(IC50)约为2.00μg/ml。SU11248可促进细胞凋亡,并呈剂量依赖性;能将HL-60细胞阻滞于G0/G1期,并呈时间依赖性;诱导HL-60细胞呈典型的DNA梯带;SU11248作用后bcl-2蛋白表达随时间依赖性降低,caspase-3蛋白表达升高,bax蛋白表达无明显变化。结论:SU11248能抑制HL-60细胞增殖,诱导其凋亡,调节bcl-2家族蛋白的表达,并裂解caspase-3是其可能作用机制之一。

MicroScan WalkAway仪器对碳青霉烯类耐药肠杆菌科细菌检测能力的评价

目的评价MicroScanWalkAway 96 Plus(MSW)全自动微生物分析仪在碳青霉烯类耐药肠杆菌科细菌(CRE)鉴定与预警中的指导价值。方法同时用PCR法和MSW系统检测福建医科大学附属协和医院实验室保存的81株CRE。以纸片扩散法和PCR法为金标准,比较该分析仪器对CRE菌株鉴定及预测是否产碳青霉烯酶的可靠性。结果 MSW判定CRE的符合率为69.1%(56/81)。PCR检测有48株细菌携带碳青霉烯类耐药基因;仪器法检测这些菌株时,高级专家系统(AES)预测产碳青霉烯酶的灵敏度为93.8%,特异度为42.4%,阳性预测值为70.3%,阴性预测值为82.4%,准确度为72.8%。结论 MSW系统对CRE具有较强的检测能力。

白血病细胞周期蛋白G基因mRNA的表达及其临床意义

目的探讨细胞周期蛋白G基因(CyclinG)mRNA在白血病患者中的表达及其临床意义。方法采用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)对129例白血病患者和10例正常人白细胞的CyclinGmRNA表达进行分析。结果(1)急性白血病(AL)组和慢性白血病(CL)组CyclinGmRNA的表达值明显高于正常对照组(P<0.05)。但AL组和CL组的差异无显著性(P>0·05)。(2)AL、AML、ALL组中初治/复发亚组的CyclinG阳性率分别为71.3%、66.7%和85.7%,均明显高于相应的缓解组(P<0.05或P<0.01)和正常对照组(P<0.01);但各白血病缓解组与正常对照组之间无显著差异(P>0.05)。(3)Cyc-linG阳性表达率在白血病初治患者的不同性别、不同年龄、不同幼稚细胞之间无显著性差异。但AL组和AML组中初治患者WBC计数>50×109/L组的CyclinG的阳性率明显高于WBC计数≤50×109/L组。(4)初治患者中有53例CyclinG表达阳性,其中强阳性表达患者的缓解率(51.7%)显著低于一般阳性患者的缓解率(79.1%)(P<0.05)。结论CyclinG在白血病患者中有异常高表达,与白血病的发生有一定联系;其异常高表达可能是白血病预后不良的因素之一。

临床分离大肠埃希菌质粒介导喹诺酮耐药基因和β内酰胺酶基因检测

目的探讨大肠埃希菌临床分离株质粒介导喹诺酮耐药(PMQR)基因的流行情况,及其与β内酰胺酶基因相关性。方法收集2013年7-12月福建医科大学附属协和医院临床分离的对左氧氟沙星和/或环丙沙星耐药的大肠埃希菌200株,采用PCR检测qnrA、qnrB、qnrC、qnrD、qnrS、aac(6')-Ib-cr、qepA和oqxAB基因,对PMQR基因阳性菌株扩增常见β内酰胺酶基因;采用琼脂稀释法对PMQR基因阳性菌株进行药敏试验,以及PCR法对菌株进行系统发育分型;利用肠杆菌基因重复一致序列分析(ERIC-PCR)进行菌株同源性分析。结果 PCR扩增结果显示实验菌株PMQR阳性率为29.0%(58/200)。其中qnr阳性率为5.5%(11/200),aac(6')-Ib-cr阳性率为20.5%(41/200),oqx AB阳性率为8.0%(16/200),qepA阳性率为0.5%(1/200)。58株PMQR基因阳性菌株中CTX-M-1组32株(55.2%)、CTX-M-9组17株(29.3%)和TEM型1株(1.7%),未检出SHV型β内酰胺酶基因。PMQR阳性菌呈现多重耐药现象;系统发育分型结果显示A型有21株(36.2%),D型17株(29.3%),B2型11株(19.0%),B1型9株(15.5%)。ERIC-PCR显示PMQR大肠埃希菌可分为50个不同的型别,其中1株未能分型。结论该院大肠埃希菌中PMQR基因以aac(6')-Ib-cr、qnr和oqxAB为主,且与β内酰胺酶耐药基因高度相关;此外PMQR菌株以非克隆播散方式在该院中流行。

靶向ERR α siRNA对不同类型子宫内膜癌细胞凋亡的影响

目的探究si RNA作用于不同类型子宫内膜癌细胞雌激素受体相关受体α(estrogen receptor-related receptorα,ERRα)的表达及细胞的凋亡情况。方法 si RNA处理RL952、AN3-CA、HEC-1A和HEC-1B细胞,以RL952、AN3-CA为Ⅰ型子宫内膜癌体外模型,HEC-1A、HEC-1B为Ⅱ型子宫内膜癌体外模型;采用荧光定量PCR法检测ERRαm RNA的表达,Western blot法检测ERRα蛋白的表达,流式细胞仪分别检测si RNA干扰后4株子宫内膜癌细胞的凋亡情况。结果 si RNA组较对照组ERRαm RNA表达水平显著下降(RL952:0.701±0.017 vs.1.165±0.019;AN3-CA:0.899±0.019 vs.1.362±0.007;HEC-1A:0.093±0.004 vs.0.541±0.038;HEC-1B:0.158±0.004 vs.0.356±0.001;P均<0.05)。各株细胞si RNA组与对照组ERRαm RNA的表达比较,差异有统计学意义(P<0.05),ERRαm RNA表达分别减少了39.77%、34.01%、82.82%和55.78%。West ern blot结果显示,4株细胞RNA干扰后ERRα蛋白表达与m RNA表达趋势一致。4株细胞凋亡率:RL952为(30.000±1.056)%vs.(10.572±1.027)%;AN3-CA为(32.931±1.613)%vs.(10.274±0.882)%;HEC-1A为(17.272±0.950)%vs.(8.704±0.608)%;HEC-1B为(18.703±1.877)%vs.(3.801±0.265)%,si RNA干扰4株细胞后凋亡率与各自对照组比较,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论 si RNA能够有效抑制子宫内膜癌中ERRα的表达,ERRα低表达可能与子宫内膜癌细胞的凋亡增加密切相关。