PI3K/AKT/mTOR信号通路与类风湿关节炎的相关性

目的探讨类风湿关节炎(RA)不同活动期进程与PI3K/AKT/mTOR信号通路的相关性,为临床寻找诊疗RA新的理论依据。方法按RA疾病活动指数(DAS28)分为低、中、高度活动期共60例,其中低度活动期(L组)22例,中度活动期(M组)20例,高度活动期(H组)18例,同时采集同期门诊25例健康体检者外周血作为健康对照组,通过FQ-PCR检测外周血单个核细胞(PBMC)中PI3K/AKT/mTOR信号通路PI3K、AKT、mTOR基因mRNA表达水平;并通过蛋白免疫印迹法检测PI3K/AKT/mTOR蛋白表达变化。结果 L组、M组、H组中PI3K的mRNA分别为2.04±0.74、4.05±0.46、2.18±0.25,均高于健康对照组0.49±0.13,差异有统计学意义(P=0.020、0.009、0.019)。M组高于L组、H组,差异有统计学意义(P=0.018、0.031)。L组、M组、H组中AKT的mRNA分别为0.46±0.32、0.83±0.42、0.65±0.38,均高于健康对照组0.23±0.21,差异有统计学意义(P=0.030、0.017、0.027)。L组、M组、H组中mTOR的mRNA分别为0.94±0.12、1.12±0.23、0.94±0.30均高于健康对照0.32±0.06,差异有统计学意义(P=0.003、0.002、0.001)。与健康对照组比较,L组、M组、H组RA患者PBMC中PI3K蛋白表达降低,分别为0.44±0.11、0.14±0.02、0.06±0.01,差异有统计学意义(P=0.008、0.005、0.001)。与健康对照组比较,L组、M组、H组RA患者PBMC中AKT蛋白表达升高,分别为2.51±0.11、18.29±4.52、15.13±3.28,差异有统计学意义(P=0.035、0.001、0.002)。与健康对照组比较,M组、H组RA患者PBMC中m TOR蛋白表达升高,分别为31.5±7.52、35.13±8.62,差异有统计学意义(P=0.002、0.001)。L组(1.25±0.13)与健康对照组比较,差异无统计学意义(P>0.05)。结论 PI3K/AKT/mTOR信号通路在RA不同活动组表达有差异,可能与RA的病情严重程度相关。

类风湿关节炎患者外周血单个核细胞中c-FLIP与外源性凋亡途径的相关性分析

目的:分析类风湿关节炎患者外周血单个核细胞(PBMC)中Fas相关死亡区样白介素1转换酶抑制蛋白(c-FLIP)与外源性凋亡途径相关蛋白死亡结构域蛋白(FADD)、caspase-8表达水平变化的相关性。方法:选择2014年1月至2015年6月福建医科大学附属漳州市医院类风湿关节炎患者60例,按照类风湿关节炎疾病活动指数将患者分为低、中、高活动度组(分别为22、20和18例)。同时选择健康体检者25名作为健康对照组。采用实时定量RT-PCR和蛋白质印迹法分别检测PBMC中c-FLIP、FADD和caspase-8的mRNA和蛋白表达水平,并采用Pearson检验对c-FLIP与FADD、caspase-8表达的相关性进行分析。结果:类风湿关节炎患者PBMC中c-FLIP、FADD和caspase-8的mRNA表达量均高于健康对照组(均P <0. 05)。其中,中活动度组PBMC中FADD和caspase-8的mRNA表达量高于低活动度组(均P <0. 05),c-FLIP的mRNA表达量与低活动度组相近(P>0. 05);高活动度组PBMC中c-FLIP的mRNA表达量高于中、低活动度组(均P <0. 05),caspase-8的mRNA表达量低于中、低活动度组(均P <0. 05),FADD的mRNA表达量高于低活动度组(P <0. 05)。类风湿关节炎患者PBMC中c-FLIP mRNA水平与FADD mRNA水平呈正相关(r=0. 323,P <0. 05),与caspase-8mRNA水平呈负相关(r=-1. 104,P <0. 05)。中活动度组c-FLIP和FADD蛋白表达量高于健康对照组、低活动度组和高活动度组(P <0. 05或P <0. 01);中、高活动度组caspase-8蛋白表达量高于健康对照组和低活动度组(P <0. 05或P <0. 01),且高活动度组caspase-8蛋白表达量高于中活动度组(P <0. 05)。结论:类风湿关节炎患者PBMC中凋亡相关蛋白c-FLIP可能参与了外源性凋亡途径,并可为类风湿关节炎病情评估提供参考。

类风湿关节炎患者外周血单个核细胞中TRAIL、c-FLIP等表达水平及临床意义

目的:分析类风湿关节炎(RA)患者外周血单个核细胞中肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体TRAIL、c-FLIP、caspase-8等基因表达情况,探讨其在RA中的临床意义,为RA的临床诊治寻找更有效的途径和方法提供实验基础。方法:采用实时荧光定量PCR的方法检测外周血单个核细胞肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体TRAIL、c-FLIP、caspase-8 mRNA表达水平;采用蛋白免疫印迹法检测PBMC中TRAIL、c-FLIP、caspase-8蛋白表达水平。结果:各组RA患者PBMC的TRAIL、c-FLIP、caspase-8的mRNA表达水平:中活动组(M)中TRAIL的mRNA为(3.26±0.78),高于健康对照(N)(1.30±0.20,P=0.028)。低活动组(L)和高活动组(H)(1.56±0.37、1.83±0.26),略高于健康对照(N)(P=0.048、0.043);L、M、H组c-FLIP mRNA相对表达量分别为1.27±0.28,1.32±.34,1.93±0.40,均高于N组1.08±0.12(P分别为0.035、0.034、0.030),差异有统计学意义;caspase-8 mRNA L、M、H组中分别为(2.77±0.97)、(4.52±0.85)、(2.13±0.44),均高于N组(1.04±0.13,P=0.023,0.012,0.032)。RA患者PBMC中TRAIL、c-FLIP、caspase-8蛋白表达:M组TRAIL蛋白表达明显高于N组(P=0.013),H组稍高于N组(P=0.043),L组与N组无明显统计学差异(P=0.058),M组明显高于L、H组(P=0.011,0.021);c-FLIP蛋白表达中M组明显高于N组(P<0.01),而L、H组与N组无显著差异(P=0.062,0.053);L组表达与N组无显著差异(P>0.05),而M、H组caspase-8蛋白表达明显高于N组(P=0.003,0.001)。结论:在RA的不同活动期中,外周血单个核细胞TRAIL、c-FLIP和caspase-8等表达水平总体趋势增加,可为RA的临床诊治及后续研究提供实验参考。

类风湿关节炎患者PBMC中凋亡相关蛋白Bcl-2与c-FLIP的表达及其意义

目的探讨类风湿关节炎(RA)患者外周血单个核细胞(PBMC)中凋亡相关蛋白Bcl-2与c-FLIP的表达水平及其临床意义。方法 60例类风湿关节炎患者外周血标本按RA疾病活动指数(DAS28)分为低度活动期(DAS28 <3. 2)、中度活动期(DAS28 3. 2～5. 1)与高度活动期(DAS28> 5. 1),以同期25例健康体检者外周血作为健康对照组(N组)。实时荧光定量PCR法检测RA患者PBMC中Bcl-2、c-FLIP、caspase-8凋亡相关蛋白的mRNA表达水平;蛋白免疫印迹法检测PBMC中cFLIP、caspase-8蛋白表达水平。结果 Bcl-2的低活动组mRNA相对表达量为1. 02±0. 35,高于健康对照组(0. 32±0. 18,P<0. 05),而中、高活动组分别为0. 08±0. 01,0. 05±0. 02,低于健康对照组(均P <0. 05)。c-FLIP的低、中、高三个活动组mRNA相对表达量分别为1. 27±0. 28,1. 32±0. 34,1. 93±0. 40,均高于健康对照组(1. 08±0. 12,均P <0. 05); caspase-8的低、中、高组mRNA相对表达量分别为2. 77±0. 97,4. 52±0. 85,2. 13±0. 44,也均高于健康对照组(均P <0. 05)。中活动组cFLIP蛋白表达明显高于健康对照组(P <0. 05),而低、高活动组与对照组差异无统计学意义(P> 0. 05);中、高活动组caspase-8蛋白表达明显高于健康对照组(P <0. 05),而低活动组表达差异无统计学意义(P> 0. 05)。结论 PBMC中凋亡相关蛋白c-FLIP mRNA表达水平随着RA疾病的进程增高,而Bcl-2只有低活动组有明显增高,此可为类风湿关节炎发病机制的后续研究提供参考。