透射电镜样品取材及固定为主的研究生教学和指导

电镜技术课程是重要的选修课，常安排在研究生刚入学，但学生缺乏科研经历，对将来课题内容及实验中能用何种电镜技术尚不知。此时教学重点是常规电镜技术，其中“取材、固定”是重中之重。因为在观察细胞超微结构的电镜技术中，取材、固定最为关键，将影响到结果科学性及图像美观。

组织处理仪在临床超微病理样品制备中的应用

电镜用于临床病理标本的诊断,以往采用传统的手工法进行制样,不仅费时费力、试剂消耗量大、且人为因素多、结果不稳定,出病理报告时间也长.近年来,许多单位使用组织处理仪进行电镜样本制备[1,2],其过程是按照手工法的步骤进行,且对每一步骤的实验条件如振动频率、时间和温度未做详细设定,这样常会出现漂洗及脱水不净造成包埋效果不稳定.故我们考虑仪器本身的特点及影响电镜制样效果的关键因素,结合手工制样经验,摸索出一套适于临床病理标本的电镜组织处理仪的制样程序,后期再使用微波辅助聚合样品[3],达到快速制样的目的,其包埋效果好,利于临床快速诊断.

肝淀粉样变性的显微和超微结构观察

应用HE染色、刚果红染色、高锰酸钾氧化刚果红染色、透射式电子显微镜观察病肝组织的显微及超微结构变化。结果显示,光镜下淀粉样物质可逐渐沉积于窦周间隙、肝细胞间、汇管区,这些受累的区域无细胞或细胞过少;电镜下观察肝细胞间沉着大量淀粉样物质,肝细胞萎缩甚至崩解,细胞器消失,出现裸核。

APP/PS1转基因AD鼠海马CA1区神经元突触超微结构

目的:探讨携带5个家族性基因突变的APP/PS1转基因阿尔茨海默病(AD)(5×FAD)模型小鼠海马CA1区神经元突触超微结构改变。方法:应用透射电镜观察和形态计量学分析5×FAD转基因AD鼠海马CA1区GrayⅠ型突触界面结构参数,包括突触间隙长度、突触间隙面积、突触后致密物浓度和突触界面曲率的变化。结果:5×FAD转基因AD鼠海马CA1区神经元突触活性区长度显著小于对照组,差异有统计学意义;突触后致密物厚度、突触界面曲率及宽度与对照组差异无统计学意义。结论:5个家族性突变基因导致小鼠海马CA1区神经元突触可塑性的改变,这可能是该突变基因导致的发病机制之一。

褪黑素对阿尔茨海默病样细胞总tau蛋白表达的影响

目的建立冈田酸(OA)诱导的阿尔茨海默病(AD)细胞模型,研究褪黑素对此AD样细胞总tau蛋白表达的影响。方法以OA处理NG108-15细胞建立AD样细胞模型,褪黑素进行干预,以免疫细胞化学及细胞免疫印迹技术观察细胞总tau蛋白表达的变化。结果褪黑素可引起AD样细胞总tau蛋白表达明显升高。结论褪黑素可升高AD样细胞总tau蛋白水平,起到拮抗AD的作用。

神经调节素β1对P3大鼠缺氧性脑白质损伤的保护作用

目的：探讨神经调节素β1（NRG β1）对新生鼠脑白质损伤的保护作用。方法：P3大鼠被随机分成假手术组，缺氧缺血组和NRG β1治疗组。观察各组大鼠生长发育和神经学行为变化包括体质量变化，睁眼时间，悬崖回避反应时间，双前肢悬挂时间。取各组P7、 P14和P21大鼠脑室周围白质，应用免疫印迹法比较分析各组大鼠脑室周围白质髓鞘碱性蛋白（MBP）合成情况。结果：而NRGβ1组相应日龄MBP的表达与假手术组相比均有恢复。NRG β1组大鼠生长发育得以改善（体质量增加，睁眼时间提早），悬崖回避反应时间也缩短，但双前肢悬挂能力无明显改善。结论：NRG β1可以促进缺氧损伤的P3大鼠脑白质髓鞘合成，并使大鼠部分神经行为功能得以不同程度恢复。

缺氧低糖培养对少突胶质前体细胞的影响

目的：探讨缺氧低糖环境对体外培养少突胶质前体细胞（O2A细胞）的影响。方法：应用台盼蓝染色计数细胞存活率，Hochest33258荧光染色及流式细胞仪分析细胞凋亡情况，透射电镜观察细胞形态变化。结果：缺氧培养3h细胞变化不明显，但缺氧培养6h，细胞存活率明显下降，凋亡细胞明显增多，并且随着缺氧时间延长存活细胞更少、凋亡细胞更多，至缺氧培养12h，大多数细胞破碎。结论：低糖联合缺氧培养模式可以建立可行的O2A细胞外缺氧模型。

冈田酸诱导SH-SY5Y细胞建立阿尔茨海默病细胞模型超微结构的变化

目的建立冈田酸诱导的阿尔茨海默病(AD)细胞模型,研究AD细胞模型的超微结构变化。方法本研究以冈田酸(OA)处理SH-SY5Y细胞建立AD样细胞模型,以MTT比色法测定细胞活性、光学显微镜观察细胞形态变化和电子显微镜观察细胞微管等超微结构变化,观察OA所致AD样细胞效应。结果 OA可引起SH-SY5Y细胞活性下降,呈剂量和时间依赖性;光学显微镜观察SH-SY5Y细胞数量明显减少,细胞胞体皱缩,突起缩短消失;电子显微镜观察SH-SY5Y细胞微管结构破坏。结论 OA可诱导SH-SY5Y细胞建立AD样细胞模型。

肝豆状核变性线粒体超微结构的形态计量学分析

目的:比较肝豆状核变性(hepatolenticular degeneration,Wilson’s disease,WD)与正常肝脏肝细胞线粒体的形态计量学差异。方法:应用透射电镜观察两组肝组织中肝细胞内线粒体并应用图像分析软件计算线粒体的平均周长、平均面积、数密度等。结果:肝豆状核变性肝细胞线粒体平均周长(Bm)、平均面积(Am)均大于正常对照组线粒体,两者差异具有显著性(P<0.05),数密度(Nv)差异无统计学意义。结论:肝豆状核变性线粒体发生显著肥大。

Ehlers-Danlos综合征1例

1病历摘要 患儿男，21个月。因皮肤弹性增加21个月伴运动发育障碍于2011年5月30日入院。出生后患儿家长发现患儿皮肤弹性较好．异于常人，但未予以重视。后发现患儿运动发育总是晚于同龄人，先后至儿保科、骨科、康复科就诊，行骨关节X线、超声、CT、磁共振成像（MRI）、肌电图等检查均正常后转到皮肤科。

神经调节素-1β对大鼠脑局灶性缺血再灌注后白质损伤的保护作用

目的:研究神经调节素-1β(NRG-1β)对大鼠脑局灶性缺血再灌注脑白质损伤的保护作用.方法:SD大鼠随机分为假手术组,缺血再灌注组即MACO/A组和NRG-1β干预组.H-E染色观察脑白质组织病理学病变;透射电镜观察少突胶质细胞和髓鞘的改变.应用酶联免疫法(ELISA)检测脑白质肿瘤坏死因子-α(TNF-α)含量;免疫组织化学显色检测髓鞘碱性蛋白(MBP)的表达;原位切口末端标记技术(TUNEL)标记凋亡细胞的数目.结果:与假手术组相比,缺血再灌注组缺血侧脑白质囊性变,大量炎症细胞浸润,电镜下可见脱髓鞘改变.MBP阳性分布减少,TNF-α含量增高,凋亡细胞增多与假手术组相比差异均有统计学意义.NRG-1β干预组与缺血再灌注组相比,H-E染色显示缺血侧脑白质囊性变减少,炎症细胞浸润减少,电镜下脱髓鞘改变减少.MBP阳性分布有增多,TNF-α含量减少,凋亡细胞减少差异均有统计学意义.结论:大脑中动脉缺血再灌注可对脑白质造成显著损伤.侧脑室注射NRG-1β干预治疗对脑缺血再灌注后的脑白质具有保护作用,其机制与抑制炎症反应、减少胶质细胞凋亡和髓鞘破坏相关.

褪黑素对冈田酸致NG108-15细胞超微结构变化的作用

目的观察褪黑素(MLT)对冈田酸(okadaic acid,OA)致NG108-15细胞超微结构的影响。方法以光学显微镜、MTT法和电子显微镜观察OA对细胞形态和超微结构的影响及褪黑素的拮抗作用。结果 OA作用后细胞形态改变明显,突起回缩,细胞活性明显减弱,细胞空泡化明显,微管等结构松解,褪黑素组细胞活性显著提高,微管结构得到恢复。结论 MLT可对抗OA致阿尔茨海默病(AD)样细胞形态改变,可能与其对微管结构的保护作用有关,并且可能是其发挥抗AD的机制之一。

Neuregulin-1β对大鼠缺血再灌注后GAP-43表达及神经功能的影响

目的观察神经调节蛋白-1(Neuregulin-1β;NRG-1β)对大鼠脑缺血再灌注后灰质梗死周围区生长相关蛋白(GAP-43)的影响。方法成年健康雄性SD大鼠54只,随机分NRG-1β给药组,NS对照组,空白对照组。采用线栓法建立大脑中动脉缺血再灌注动物模型(MCAO/R),分别于MCAO/R后1 d组,3 d组和7 d组进行神经功能学评分;斜板实验:测大鼠随意运动功能及RT-PCR法观察GAP-43 mRNA的表达。结果NRG-1β组3 d和7 d,GAP-43 mRNA表达较NS对照组和空白组表达增加,差异有统计学意义(P<0.05)。NRG-1β注射后7 d,神经功能也有改善。结论神经调节素促进大鼠脑灰质缺血再灌注后神经功能恢复,改善大鼠随意运动和提高GAP-43 mRNA表达,具有神经保护作用。

Ehlers-Danlos综合征患儿运动障碍与遗传和病理特征的初步探讨

目的探讨Ehlers-Danlos综合征的运动发育障碍、遗传、皮肤-骨骼肌病理特征。方法对1例经典型Ehlers-Danlos综合征患儿的病史、临床表现、基因检测、病理特征和随访2年结果进行回顾性分析。结果 Ehlers-Danlos综合征患儿表现为皮肤弹力增加,关节伸展过度,四肢肌张力减低,运动发育明显延迟。然而,随着年龄的增加,运动状态逐渐得到改善。皮肤病理改变为真皮层变薄,胶原纤维数量减少、排列疏松、紊乱,弹力纤维数量增多并呈颗粒状纤维断裂改变;电镜见胶原纤维大小不等;COL5A1基因的22号内含子发生剪切突变c.2133+1G.>A。结论早期诊断Ehlers-Danlos综合征和保护关节功能对患儿的运动发育非常重要。