基于生物正交点击化学修饰吲哚菁绿用于脂肪间充质干细胞活体示踪的实验研究

目的探究生物正交点击化学修饰可否用于脂肪间充质干细胞(ADSC)的吲哚菁绿(ICG)标记及活体示踪研究。方法收集小鼠脂肪组织进行ADSC的分离与培养,分别添加Ac4ManNAz、DBCO-ICG进行生物正交点击化学反应,评估该方法对ADSC细胞活性的影响,并利用共聚焦显微镜观察ADSC的ICG标记情况;将标记ICG的ADSC移植到急性肝损伤小鼠体内,利用近红外二区荧光成像开展ADSC的活体示踪研究,收集肝组织进行ADSC归巢性分析;最后,评估生物正交点击化学修饰对ADSC移植治疗急性肝损伤疗效的影响。结果生物正交点击化学可将ICG探针成功地修饰于ADSC细胞内,且不影响ADSC的细胞活性;标记ICG的ADSC移植到体内后主要分布、定位在肝组织内,说明ADSC具有肝向归巢性;生物正交点击化学修饰不影响ADSC改善急性肝损伤小鼠肝功能、减少肝细胞坏死的疗效。结论生物正交点击化学可用于ADSC的ICG探针标记及活体示踪研究。

乙肝病毒X蛋白抑制高迁移率族蛋白B1的表达和活性氧的产生

目的观察乙肝病毒X蛋白（HBX）表达对宿主细胞高迁移率族蛋白B1（HMGB1）和活性氧（ROS）的影响。方法在正常肝细胞系LO2中过表达HBX蛋白；利用Western blot和ROS检测剂双氯荧光素（DCFH-DA）检测HMGB1的表达、ROS的产生和核因子（NF）-κB信号通路的变化；然后利用NF-κB和ROS的激活剂分别刺激细胞，验证NF-κB对HMGB1和ROS的调节作用。结果Western blot结果显示HBX的过表达显著抑制HMGB1的表达，下调2.4倍（P＝0.025）。通过对绿色荧光的观察发现HBX对ROS的产生具有抑制作用。Western blot结果证明HBX过表达可以抑制NF-κB（p65）及其抑制子IκB的磷酸化；鱼藤酮和LPS分别刺激HBX过表达细胞后发现，NF-κB（p65）及其抑制子IκB的磷酸化增强、HMGB1、ROS和Toll样受体4（TLR4）的表达量增加，提示HMGB1与NF-κB信号通路间是相互正调控关系。结论HBX通过抑制NF-κB信号通路，进而抑制HMGB1的表达和ROS的产生，同时抑制宿主细胞对炎性细胞因子的释放。

金属硫蛋白-1G对肝癌细胞增殖的影响

目的探讨金属硫蛋白-1G(MT1G)在肝细胞癌(HCC)恶化过程中发挥的调节作用及调节机制。方法利用无标记定量蛋白质组学技术比较MT1G过表达与参照细胞株之间蛋白质组差异;利用细胞计数试剂盒(CCK-8)、胸腺嘧啶核苷类似物染色试剂盒(EDU法)观察细胞表型变化;利用蛋白质印迹法(Western blot)检测相关信号通路关键因子表达量变化。样本间的比较采用t检验进行统计分析。结果首先成功构建出MT1G过表达细胞株。经质谱(MS)鉴定结果表明与参照细胞比共有182种蛋白在MT1G过表达细胞中出现表达量差异有统计学意义(阈值≥5.0倍或≤0.2倍,且P<0.05)。GO分析显示这些差异表达蛋白(DEPs)可能参与细胞周期调控和磷脂酰肌醇3激酶-蛋白激酶B(PI3K-Akt)信号通路。定量聚合酶链反应(PCR)验证表明与参照细胞比,MT1G在MT1G过表达细胞中上调表达,差异均有统计学意义(294.9±33.3)倍(t=8.837,P<0.01);吡多醛激酶(PDXK)上调表达(34.02±2.59)倍(t=13.148,P<0.01);UBX结构域蛋白7(UBXN)上调表达(19.08±0.47)倍(t=40.652,P<0.01);跨膜蛋白9家族成员4(TM9S4)上调(8.91±0.43)倍(t=20.485,P<0.01),这些结果与MS鉴定结果趋势一致,差异均有统计学意义。CCK-8和EDU染色结果揭示MT1G过表达可以显著抑制HCC细胞的增殖,而这种抑制作用是通过抑制Akt和雷帕霉素靶蛋白(mTOR)的磷酸化实现的。结论MT1G通过调节PI3K-Akt信号通路活性抑制肝细胞癌细胞的增殖。

循环肿瘤DNA对中国肝癌诊断价值的Meta分析

目的系统评价循环肿瘤DNA(ctDNA)在中国人群原发性肝癌(肝癌)中的诊断价值。方法检索PubMed、Web of Science、Embase、中国知网、万方、维普数据库中从建库至2021年11月关于应用ctDNA诊断肝癌的文献。中英文检索词为循环肿瘤DNA、ctDNA、游离DNA、循环DNA、cfDNA、血浆DNA、血清DNA,以及肝癌、肝细胞癌、肝肿瘤、肝脏肿瘤、原发性肝癌等。对纳入文献进行数据提取和质量评估后,采用Review Manager 5.3和Stata 15.1统计软件计算合并敏感度、特异度,绘制森林图和综合受试者操作特征(sROC)曲线并计算曲线下面积(AUC)。通过Meta回归分析和亚组分析分析异质性来源。绘制Deek's漏斗图检验发表偏倚。结果共纳入符合标准的文献25篇,包括4063例肝癌患者和3509例对照。其中5项研究为检测ctDNA浓度的定量分析,14篇为检测ctDNA中的肿瘤特异性单基因甲基化的定性分析,6篇通过ctDNA的特征构建模型进行诊断。定量研究组的合并敏感度、特异度及AUC分别为0.68(0.58~0.77)、0.82(0.71~0.89)和0.81(0.77~0.84);定性研究组相应为0.55(0.47~0.62)、0.99(0.93~1.00)和0.80(0.77~0.83);模型构建组相应为0.81(0.72~0.87)、0.91(0.85~0.94)和0.93(0.90~0.95)。Deek's漏斗图检验显示,定量研究组(t=1.080,P>0.05)、定性研究组(t=0.690,P>0.05)和模型构建组(t=0.230,P>0.05)均不存在明显的发表偏倚。结论ctDNA在我国肝癌诊断中具有良好的应用价值,利用ctDNA构建模型的诊断性能优于定量分析和定性分析。