YAP1、PD-L1及MMR蛋白在消化道神经内分泌癌中的表达及意义

目的探讨Yes相关蛋白1(YAP1)、程序性死亡-配体1(PD-L1)及错配修复(MMR)蛋白在消化道神经内分泌癌组织中的表达及临床意义。方法应用组织芯片及免疫组化法,检测122例消化道神经内分泌癌组织中YAP1、PD-L1及MMR蛋白的表达情况,并结合消化道神经内分泌癌不同临床病理参数和患者预后进行比较分析。结果YAP1核、YAP1质、PD-L1及MMR蛋白缺失的阳性率分别为27.1%、35.3%、22.1%、2.5%。YAP1在神经内分泌癌组织中的表达显著高于正常组织或神经内分泌瘤(均P<0.05),YAP1核表达与脉管浸润、淋巴结转移及TNM分期呈显著正相关(均P<0.05)。PD-L1表达与临床病理特征无明显相关性(均P>0.05)。相关性分析显示YAP1核表达与PD-L1表达呈负相关(P<0.05)。生存分析未发现YAP1及PD-L1的预后意义。结论YAP1核表达可能与消化道神经内分泌癌的发生发展有关;消化道神经内分泌癌表达PD-L1及错配修复缺陷(dMMR);针对YAP1的靶向治疗及抗PD-1/PD-L1治疗可能成为消化道神经内分泌癌的潜在新疗法。

RNA结合蛋白CELF4对小鼠早期胚胎发育的作用

目的观察RNA结合蛋白CELF4在小鼠早期胚胎中的分布与表达,初步探讨CELF4对小鼠早期胚胎发育的作用。方法利用免疫荧光和Real-Time PCR检测CELF4在小鼠早期胚胎中的定位和mRNA表达,利用显微注射技术在1-细胞胚中注入CELF4抗体,观察其对小鼠体外早期胚胎发育的影响,以及对2-细胞期ZGA标志基因eIF1A、MuERV-L、Zscan4d、Hsp70.1和桑椹胚期Cdx2、Oct4、Sox2 mRNA表达的影响。结果CELF4分布于各阶段早期胚胎的细胞质内,在8-细胞胚和桑椹胚中荧光变强,但在囊胚阶段则明显减弱;CELF4 mRNA在1-细胞胚、2-细胞胚和4-细胞胚表达较高,8-细胞胚至囊胚阶段显著下降;CELF4抗体封闭组囊胚发育率低于对照组,Cdx2 mRNA表达显著下降。结论CELF4在小鼠早胚胞质内的阶段特异性表达提示其可能对早期胚胎发育起一定的作用,其可能通过调控滋养层细胞Cdx2 RNA的翻译或者稳定性从而影响囊胚的形成。

蛋白激酶在小鼠囊胚形成中的作用机制

在小鼠8-细胞胚向囊胚发育的过程中发生第1次细胞系分化。蛋白激酶(Akt)是一种功能强大的激酶,其在囊胚形成期间的作用尚未明确。本研究中结果显示,Akt蛋白特异性定位于桑葚胚的外层细胞。Akt特异性抑制剂MK2206可显著抑制小鼠囊胚形成,并导致滋养外胚层标志基因Cdx2表达水平降低、核蛋白ERα出现胞质内粗颗粒状表达。采用siRNA显微注射的方式敲低ERα也可导致小鼠囊胚发育率降低,并伴有Yap蛋白表达水平降低。

转录因子TRPS1通过H3K27me3调控小鼠合子型基因激活

前期研究发现,转录因子TRPS1可参与调控小鼠植入前胚合子基因组激活,但具体调节机制尚未明确。本研究收集小鼠1-细胞胚,采用显微注射的方法,注射TRPS1的抗体、siRNA和反寡义核苷酸,分别沉默TRPS1的蛋白和mRNA,观察小鼠植入前胚各阶段发育率变化;利用免疫荧光染色法检测TRPS1-siRNA显微注射后H3K27me3表达情况,并利用染色质免疫共沉淀技术(ChIP)在细胞模型中探讨其作用机制。结果表明,沉默TRPS1的蛋白和mRNA能够使大部分小鼠植入前胚发育停滞在2-/4-细胞胚阶段;Trps1-siRNA显微注射处理导致H3K27me3表达水平降低。在细胞模型S-KO-V3卵巢癌细胞中转染TRPS1-siRNA,发现H3K27me3的甲基转移酶EZH2下调;采用ChIP-qPCR技术,发现TRPS1能够特异性的结合在EZH2的启动子上,在植入前胚中验证发现,TRPS1下调能够引起2-细胞胚EZH2蛋白表达水平下降。