DNA扩增制备探针并用于临床白色念珠菌感染鉴定

目的 应用聚合酶链反应技术扩增特异DNA片段 ,并制备成为可应用于临床鉴定白色念珠菌的基因探针。方法 采用聚合酶链反应技术特异地扩增白色念珠菌标准株DNAEO3 12 5bp基因片段 ,然后用半抗原地高辛配基标记 ,在完成基因探针显色敏感度检测之后 ,应用该基因探针分别对血液病病房分离的白色念珠菌、热带念珠菌及大肠埃希菌等多种细菌进行斑点杂交测试。结果 基因扩增制备Dig 12 5bpDNA探针显色敏感度为0 0 1pg,具有白色念珠菌特异性 ,与其他念珠菌和细菌不发生杂交。结论 基因扩增制备EO3 12 5bpDNA探针方法简便可靠 ,具有很强特异性 ,可应用于临床鉴定白色念珠菌感染。

血液病念珠菌感染基因扩增检测技术建立及临床应用

目的 针对血液病真菌感染日益严重趋势 ,建立念珠菌基因扩增技术并应用于临床。方法 本研究应用Lyticase破真菌壁提取DNA ,采用二对引物分别对白色念珠菌EO3 12 5bpDNA和念珠菌细胞色素P4 5 0L1A12 4 3bpDNA进行基因扩增 ;并分别对白色念珠菌标准株、临床样本株、其他念珠菌和不同细菌菌株进行基因扩增特异性比较 ,同时应用该技术检测血液病患者痰液和血液中念珠菌。结果 基因扩增显示EO3 12 5bpDNA只有标准株和临床样本白色念珠菌阳性 ,细胞色素P4 5 0L1A12 4 3bpDNA具有念珠菌种的特异性 ,临床血液和痰液标本检测阳性率显著提高 ,与临床病情一致。结论 血液病念珠菌感染基因扩增技术敏感性、特异性显著增强 ,而且耗时显著缩短 。

金黄色葡萄球菌L型对胆囊癌细胞的致病变研究

目的研究金黄色葡萄球菌L型对胆囊癌细胞(GBC-SD)的致病变作用。方法金葡菌L型感染GBC-SD细胞后,采用光学显微镜、透射电子显微镜及PCR检测其能否侵入细胞,采用四甲基偶氮唑盐微量酶反应比色(MTT)法、增殖细胞核抗原(PCNA)法检测其能否促进细胞增殖,采用基因芯片检测其引起的细胞基因改变。结果PCR检测以及光镜、电镜拍照显示金葡菌L型能够粘附并且进入GBC-SD细胞,MTT法、PCNA检测表明金葡菌L型能够促进GBC-SD细胞增殖。基因芯片结果显示金葡菌L型作用后的GBC-SD细胞有15个基因表达异常,取表达上调基因含表皮生长因子组件粘蛋白类似激素受体2(EMR2)、表达下调基因细胞外基质蛋白2(ECM2)进行RT-PCR法验证,与基因芯片结果符合。结论金葡菌L型能够进入GBC-SD细胞中并促进其增殖,引起细胞EMR2基因上调、ECM2基因下调,提示金葡菌L型可能与胆囊癌的发生、发展存在一定相关性。