2型糖尿病合并外周血管病变患者的骨密度变化

目的探讨2型糖尿病合并外周血管病变患者的骨密度变化。方法将100例2型糖尿病患者分为无并发症组(A组)和合并外周血管病变组(B组),进行双能X线吸收法(DEXA)骨密度(BMD)测定,同时测定臂踝脉波传播速度(baPWV)及超声波颈动脉内膜-中层厚度(IMT),并对两组患者临床数据与骨密度进行比较。结果2型糖尿病患者BMD低于同龄的非糖尿病患者;2型糖尿病合并外周血管病变患者BMD低于同年龄的2型糖尿病患者。结论2型糖尿病合并外周血管病变患者的动脉硬化可能与骨质疏松有关,二者的明确因果关系有待进一步研究。

乳铁蛋白对去卵巢大鼠骨密度及骨M-CSF，IL-6mRNA的影响

目的观察乳铁蛋白(LF)对去卵巢大鼠骨密度(BMD)及骨组织巨噬细胞集落刺激因子(M-CSF)和白细胞介素-6(IL-6)的影响及其防治骨质疏松作用可能机制。方法将6月龄雌性SD大鼠随机分为假手术组(Sham组,10只)与去卵巢模型组(Ovx组,60只),Ovx组再分为未治疗组(Con组)、雌激素组(E2组:0.1mg/kg·周-1)、不同剂量乳铁蛋白干预组(LF1组:0.01g/kg·周-1,LF2组:0.1g/kg·周-1,LF3组:1.0g/kg·周-1,LF4组:2.0mg/kg·周-1),每个亚组10只大鼠。治疗24周后,用微计算机断层扫描(micro-CT)检测大鼠右侧股骨、L2-4骨密度;用实时荧光定量聚合酶链反应(RealtimeRT-PCR)测量大鼠左股骨中M-CSF和IL-6mRNA的表达。结果与Con组相比,LF3和LF4组右侧股骨、L2-4骨密度明显增高,差异有统计学意义(P<0.05,P<0.01),与Con组相比,LF3和LF4组左股骨M-CSF和IL-6mRNA明显降低,差异有统计学意义(均P<0.01)。结论乳铁蛋白可增加去卵巢大鼠骨量及骨密度;可能通过调节M-CSF和IL-6mRNA水平降低破骨活动、减少骨量丢失。

乳铁蛋白对体外培养原代大鼠成骨细胞增生与分化的影响

目的研究不同浓度乳铁蛋白(LF)对体外培养原代大鼠成骨细胞增生与分化的影响,观察LF是否呈时间剂量依赖性促进成骨细胞的增生与分化。方法用混合酶消化法分离大鼠颅骨成骨细胞,进行原代培养;分别用不同浓度LF(0、0.1、1、10、100、1000μg/mL)干预成骨细胞1、3、5、7d后,采用MTT法测定细胞增生,采用PNPP法测定细胞内碱性磷酸酶活性。结果 MTT检测结果显示,与对照组相比,除0.1μg/mL组外,各时段不同LF干预组均可促进成骨细胞增生,差异均有统计学意义(均P<0.05)。但10、100μg/mLLF组干预第7天时细胞增生情况与对照组比较差异无统计学意义(P>0.05),1000μg/mLLF组干预第5天及第7天时细胞增生情况明显低于对照组(P<0.01)。碱性磷酸酶检测结果显示,0.1μg/mLLF对成骨细胞碱性磷酸酶活性无明显影响。1～1000μg/mLLF均可促进成骨细胞碱性磷酸酶活性,其中1000μg/mLLF在干预第7天时碱性磷酸酶活性最高,与对照组比较差异有统计学意义(P<0.01)。结论乳铁蛋白能促进大鼠成骨细胞增生与分化,并在一定时间和浓度范围内呈时间剂量依赖性。

3,3',5-碘-L-甲腺原氨酸对成骨细胞前体增殖和成骨分化的作用

目的观察不同浓度的3,3',5-碘-L-甲腺原氨酸(3,3',5-triiodo-L-thyronine,T3)对小鼠颅顶前成骨细胞亚克隆14(MC3T3-E1 subclone 14)细胞增殖及分化水平的作用.方法分别给予不同浓度T3干预细胞,培养1、2、3 d后采用CCK8法检测细胞增殖水平;在成骨分化诱导试剂干预7 d基础上,结合上述T3给药,通过碱性磷酸酶(alkaline phosphatase,ALP)染色检测各浓度组成骨细胞分化水平,通过实时荧光定量PCR和免疫蛋白印迹(Western blot)法检测各浓度组的成骨细胞标记性基因及蛋白的表达差异.结果在分别干预1、2、3 d后,T3随着浓度增高,对细胞的增殖水平均呈明显上调;而且相同剂量的T3对于细胞增殖呈时间依赖性增强.此外,MC3T3-E1 Subclone 14细胞诱导7 d后,对比于0对照组,低浓度T3(1 nmol/L)对成骨细胞各分化参数均无明显作用,而10、100、1000 nmol/L的T3对细胞ALP染色,成骨细胞相关基因及蛋白均明显上调,其中以10和100 nmol/L组最为显著.结论T3对于MC3T3-E1 Subclone 14细胞的增殖和成骨细胞分化均有显著的促进作用.

乳铁蛋白对大鼠成骨细胞增殖及IGF-1/IGF-1R mRNA表达的影响

目的探讨乳铁蛋白对大鼠成骨细胞增殖及胰岛素样生长因子1(IGF-1)/和胰岛素样生长因子1受体(IGF-1R)表达的影响。方法取出生24 h内SD大鼠6只,无菌条件下取出颅骨,用混合酶消化法进行成骨细胞培养,用不同浓度乳铁蛋白(0、0.1、1、10、100、1 000μg/mL)干预成骨细胞1、3、5、7 d后,用噻唑蓝比色法(MTT)测定成骨细胞增殖,用实时荧光定量聚合酶链反应(real time-PCR,RT-PCR)检测乳铁蛋白对IGF-1及IGF-1R mRNA表达的影响。结果 MTT结果显示与对照组相比,浓度为1、10、100、1 000μg/mL的乳铁蛋白在不同时间均能促进成骨细胞增殖,差异有统计学意义(均P<0.05)。随时间推移,不同浓度乳铁蛋白均可使成骨细胞数量增加,其中100μg/mL组第7天细胞增殖数达到最大。RT-PCR结果显示,与对照组相比,浓度为10、100、1 000μg/mL的乳铁蛋白在各时间段均能增加成骨细胞IGF-1/IGF-1R mRNA的表达量,差异有统计学意义(均P<0.05),且随时间推移呈增加趋势,上述浓度乳铁蛋白对成骨细胞IGF-1/IGF-1R mRNA的表达量在第5、7天差异有统计学意义(均P<0.01)。结论乳铁蛋白能促进大鼠成骨细胞增殖,促进IGF-1/IGF-1R mRNA表达,可能是乳铁蛋白防治骨质疏松的机制之一。

阿托伐他汀钙对原代成骨细胞OPG、RANKL、M-CSF基因表达的影响

目的观察不同浓度阿托伐他汀钙对体外培养原代成骨细胞增生和对OPG、RANKL、M-CSF基因表达的影响,探讨阿托伐他汀钙抗骨质疏松的分子机制,为临床用药提供实验依据。方法采用胰酶和Ⅰ型胶原酶混合酶消化法分离获得原代成骨细胞;采用差速贴壁法进行纯化。光镜下观察细胞的形态结构和生长状况,通过碱性磷酸酶染色和Ⅰ型胶原免疫组化SABC法对细胞进行鉴定。用不同浓度的阿托伐他汀钙(10^(-9)、10^(-8)、10^(-7)、10^(-6)和10^(-5) mol/L)干预成骨细胞,在24、48和72 h后,用实时荧光定量方法检测OPGmRNA、RANKL mRNA、M-CSF mRNA的表达水平。结果镜下观察显示细胞具有成骨细胞的典型特征,细胞多为单核,呈三角、多边、长梭等形态,并伸有粗大伪足;碱性磷酸酶染色及Ⅰ型胶原免疫组化染色呈阳性。实时荧光定量PCR结果显示:不同浓度的阿托伐他汀钙(10^(-9)、10^(-8)、10^(-7)、10^(-6)、10^(-5)mol/L)均可以促进OPG mRNA的表达,抑制RANKL mRNA的表达,对M-CSF mRNA基因的表达也具有促进作用,且与药物浓度及作用时间有关。结论采用胰酶和Ⅰ型胶原酶混合酶消化法体外分离成骨细胞,采用多次"差速贴壁法"可以获得数量多、纯度高且活性好的成骨细胞。阿托伐他汀钙可以促进成骨细胞OPG基因mRNA的表达,抑制RANKL基因mRNA的表达,对M-CSF基因的表达也有一定的促进作用。

高脂饮食对去卵巢大鼠骨微结构、骨IL-6及M-CSF mRNA水平的影响

目的观察高脂饮食对绝经后雌性SD(sprague-dawiey)大鼠骨微结构、骨组织白介素-6(IL-6)及巨噬细胞集落刺激因子(M-CSF)m RNA的影响,探讨高脂对骨微结构的影响及其可能的发病机制。方法将40只6月龄雌性SD大鼠随机分为假手术+普通饲料饲养组(SHAM组)、假手术+高脂饲料饲养组(HFD组)、去卵巢+普通饲料组(OVX组)、去卵巢+高脂饲料饲养组(OVX+HFD组),每组10只。6个月后用微计算机断层扫描(Micro-CT)等方法检测大鼠右侧胫骨的骨微结构。用实时荧光定量聚合酶链反应(Realtime RT-PCR)测量大鼠左侧股骨中IL-6和M-CSF m RNA的表达差异。结果 6个月后,OVX组的骨体积(BV/TV)、骨小梁数目(Tb.N)、骨小梁厚度(Tb.Th)低于SHAM组,骨小梁分离度(Tb.Sp)大于SHAM组(P<0.05);OVX组BV/TV、Tb.N均大于OVX+HFD组,Tb.Sp小于OVX+HFD组(P<0.05);SHAM组BV/TV、Tb.N、Tb.Th高于SHAM+HFD组,SHAM+HFD与OVX组相比,除Tb.N外,其BV/TV、Tb.Th及Tb.Sp均无明显差异(P>0.05)。OVX组M-CSF和IL-6 m RNA的表达均高于SHAM组(P<0.05)。SHAM的M-CSF和IL-6 m RNA的表达低于SHAM+HFD组(P<0.05),SHAM+HFD的MCSF和IL-6 m RNA的表达低于OVX组(P<0.05),但OVX组与OVX+HFD组比较,M-CSF和IL-6 m RNA的表达无显著差异(P>0.05)。结论高脂引起的骨微结构的改变有可能是通过提高IL-6、M-CSF m RNA水平,导致破骨细胞活性增强、骨吸收增加引起的。

合并高血压的老年2型糖尿病患者血压控制目标探讨

目的探讨老年2型糖尿病合并高血压患者降压的目标值。方法选取2008年1月至2011年1月在福建省立医院内科就诊的707例65岁以上老年2型糖尿病合并高血压患者，其中男324例，女383例，平均年龄（72±6）岁。按收缩压（SBP）高低分为收缩压严格控制组（130mm Hg≤SBP〈140mmHg，1mmHg=0．133kPa）235例，收缩压宽松控制组（140mmHg≤SBP〈160mm Hg）472例，两组患者收缩压水平均维持至少3年。所有患者进行12导联心电图检查，预估肾小球滤过率（eGFR）通过Cockcroft—Gault公式计算。将心电图aVL导联R波的电压（RaVL）作为心血管风险的替代指标，将eGFR作为评价肾功能的指标。以RaVL≥0．57mV和〈0．57mV作为二分类变量，使用logistic回归法分析心血管疾病风险。结果收缩压宽松控制组与严格控制组RaVL分别为：0，55（0．50～0．59）、0．58（0．52～0．64）mV，差异无统计学意义（F：0．235，P〉0．05）。收缩压宽松控制组eGFR为55．6（53．2～58．0）ml／min，低于收缩压严格控制组[59．6（56．2～63．1）ml／min]，但差异无统计学意义（F=1．289，P〉0．05）。将RaVL≥0．57mV及RaVL〈0．57mV作为因变量进行多因素logistic回归分析发现，收缩压宽松控制组RaVL≥0．57mV的风险与收缩压严格控制组相比差异无统计学意义（OR=0．927，95％CI：0．567～1．514，P〉0．05）。结论老年2型糖尿病合并高血压患者收缩压的目标值控制在140mm Hg以下可能并不改善心血管和肾脏预后。

中国畲族人群血脂异常患病率及危险因素分析

目的 探讨中国福建省畲族人群的血脂异常患病率和流行病学特征.方法 2009年4月到9月在福建宁德地区福鼎市桐城街道、前歧镇和沙埕镇采用随机整群分层抽样方法随机抽取4 838名畲族人进入研究.测量身高、体重和血压,并测定血总胆固醇（TC）、低密度脂蛋白胆固醇（LDL-C）、高密度脂蛋白胆固醇（HDL-C）和甘油三酯（TG）.应用不同标准对受试者进行分组并使用x2检验和多因素logistic回归对血脂情况进行统计分析.结果 共有1 285名参与者血脂异常（患病率26.6％）,其中高TC血症、高LDL-C血症、低HDL-C血症和高TG血症的患病率分别是10.1％（488/4 838）、12.6％ （609/4 838）、5.2％ （252/4 838）和11.4％ （551/4 838）；男女性血脂异常患病率为30.0％ （617/2 057）和24.0％ （667/2 781）,差异具有统计学意义（x2=21.91,P＜0.05）.血脂异常的患病率随年龄增长的差异有统计学意义（x2=30.89,P＜0.05）,并且与性别、体质指数、空腹血糖、血压密切相关（OR=0.656、1.146、1.059、1.457,均P＜0.05）.结论 畲族人群的血脂异常患病率较高,有必要加强患者的管理,进行综合干预.

不同数量的骨髓间充质干细胞移植对去卵巢大鼠骨质疏松的影响

目的比较不同数量的骨髓间充质干细胞(BMSCs)移植对去卵巢大鼠骨质疏松的影响。方法将40只雌性Spraguedawley(SD)大鼠随机分为假手术组和去卵巢组,3个月后验证造模成功,再将去卵巢组大鼠随机分为单纯去卵巢组(OVX组)、雌激素治疗组(E2组)、低剂量BMSCs移植组(BMSCs2×10^6,LS组)、中剂量BMSCs移植组(BMSCs4×10^6,MS组)、高剂量BMSCs移植组(BMSCs6×10^6,HS组)。LS组、MS组、HS组分别经尾静脉移植对应剂量的BMSCs,E2组肌注雌二醇。在干预后的第8、12和16周时用双能X线骨密度仪测量全身骨密度,干预16周后取胫骨做苏木精-伊红染色法(HE染色)。结果OVX组的全身骨密度(BMD)和骨小梁占骨髓腔面积的比例均降低(P<0.05)。各BMSCs移植组的全身BMD及骨小梁占骨髓腔面积的比例均较OVX组高(P<0.05),且随着所移植干细胞数量的增加而增高,HS组的骨密度和骨小梁占骨髓腔面积比例为最佳。结论移植BMSCs可以明显改善去卵巢大鼠的骨质疏松,随着所移植BMSCs数量的增加可以获得更好和更长久的疗效。

用RNA干扰慢病毒研究Wnt/β-连环蛋白信号通路对小鼠胰岛β细胞增殖的影响

目的 构建β-连环蛋白特异的RNA干扰(RNA interference,RNAi)慢病毒表达载体,初步探讨Wnt/β-连环蛋白信号通路对小鼠胰岛β细胞增殖的影响.方法 利用体外同源重组技术构建短发夹RNA(shRNA)慢病毒表达载体,与辅助包装质粒一起在293 T淋巴细胞中包装并扩增病毒,逐孔稀释法测定病毒滴度;RNAi慢病毒感染小鼠胰岛β细胞,实时PCR以及Western blot法检测其对β-连环蛋白表达的抑制效应;利用构建的RNAi慢病毒抑制β-连环蛋白表达,四甲基偶氮唑盐法检测小鼠胰岛β细胞增殖活性.组间比较采用方差分析(ANOVA).结果 成功构建了β-连环蛋白特异的RNAi慢病毒表达载体,获得的慢病毒滴度在5.0×10~8TU/ml左右;RNAi慢病毒在3 d后就能有效感染小鼠胰岛β细胞,5 d后使细胞内β-连环蛋白基因mRNA和相应蛋白的表达受到明显抑制;慢病毒感染小鼠胰岛β细胞后,细胞增殖率明显减少.结论 构建的目的RNAi慢病毒表达载体能有效抑制β-连环蛋白基因的表达;Wnt/β-连环蛋白信号通路在小鼠胰岛β细胞增殖中有重要影响.

热休克蛋白27磷酸化在高糖诱导的人脐静脉内皮细胞凋亡中的作用

目的研究热休克蛋白27磷酸化在高糖诱导的人脐静脉内皮细胞凋亡中的作用。方法取健康剖腹产孕妇的脐静脉内皮细胞(HUVEC)进行培养,选择2～3代细胞进行实验。①检测高糖对内皮细胞中热休克蛋白27(HSP-27)蛋白活性的影响:实验分正常细胞组与高糖组。正常细胞组不做处理直接提取细胞总蛋白,高糖组为30.5mmol/L高糖分别干预细胞24、48、72h后提取总蛋白。②检测槲皮素对高糖诱导的内皮细胞中HSP-27活性的影响:实验分为正常细胞组,高糖组和高糖+槲皮素组。正常细胞组不做处理,高糖组为30.5mmol/L高糖干预细胞;高糖+槲皮素组为槲皮素(10μmol/L)先与细胞孵育1h后再加入刺激物高糖(30.5mmol/L),各细胞组培养48h后提取总蛋白。①与②中细胞总蛋白均采用特异性Phospho-HSP27抗体的蛋白免疫印迹法检测HSP-27的活性;采用Annexin-Ⅴ-PI染色流式细胞技术检测人脐静脉内皮细胞凋亡。分组及干预情况同②,比较各组间细胞的凋亡率。结果高糖呈时间依赖性诱导人脐静脉内皮细胞中HSP-27磷酸化,30.5mmol/L高糖作用24、48、72h,HSP-27磷酸化水平较正常对照组分别提高了100%(P<0.05),182.5%(P<0.01),117%(P<0.05)。而HSP-27选择性阻断剂槲皮素(10μmol/L)作用48h可以抑制高糖诱导的HSP-27磷酸化,与高糖组相比槲皮素组HSP-27磷酸化水平降低了52.6%(P<0.01),与此同时,可使凋亡增加,内皮细胞凋亡率较高糖组增高了37.6%(P<0.01)。结论 HSP-27磷酸化可能在高糖诱导的人脐静脉内皮细胞凋亡中起保护作用。

胰岛素自身免疫综合征一例

患者男，51岁，主因“反复四肢乏力25d，意识模糊9d。”入院，患者于入院前25d无明显诱因出现四肢乏力，伴出汗、饥饿感，无头晕、头痛，无躁动、四肢抽搐，无心悸、胸闷、心前区疼痛，无恶心、呕吐，予自行进食后症状缓解。此后上述症状反复发作，常发生于夜间及清晨空腹时，每日1次，性质及程度同前，自行进食后症状缓解，未重视，未诊治。于入院前9d无明显诱因出现意识模糊，呼之可回应，症状持续约30min，家属予进食后症状缓解。3d前就诊政和县医院，

胰岛β细胞休眠

近年有学者发现,糖尿病患者胰腺中存在一定数量残留的β细胞[1-4],其中有些是静息的、非功能性的β细胞,平素并不分泌胰岛素,而通过某些机制可以让其合成并分泌胰岛素,通常把这些β细胞理解为"休眠的β细胞".对β细胞休眠机制进行深入研究,有望能重新激活休眠的β细胞和保存β细胞功能,从而找到一种干预糖尿病的新手段.本文将对"休眠的β细胞"的类型及相关研究进行简要阐述.