探讨TLR4/NF-κB信号通路在劳力性热射病大鼠脑损伤中的作用

目的探讨Toll样受体4/核转录因子-κB(toll-like receptor 4/nuclear factor kappa B,TLR4/NF-κB)信号通路在劳力性热射病(exertional heat stroke,EHS)大鼠脑损伤中的作用机制。方法选取SPF级SD雄性大鼠30只,随机分为对照组、模型组、Eritoran组,每组均10只。模型组、Eritoran组建立EHS大鼠模型,建模成功后Eritoran组立即腹腔注射依立托仑(Eritoran)(5 mg/kg),模型组立即腹腔注射等量的0.9%氯化钠注射液,对照组不作任何处理。采用酶联免疫吸附试验检测大鼠血清肿瘤坏死因子-ɑ(tumor necrosis factor-ɑ,TNF-α)、白细胞介素-1β(interleukin-1β,IL-1β)、白细胞介素-6(interleukin-6,IL-6)的水平,采用HE染色检查大鼠脑组织的病理改变,采用蛋白免疫印迹实验、实时定量PCR检测大鼠脑组织TLR4、NF-κB蛋白及mRNA的表达。结果对照组大鼠脑组织无神经细胞变性,无脑组织水肿,未见炎症细胞浸润;模型组大鼠脑组织充血、水肿,部分神经细胞变性坏死,可见大量炎症细胞浸润;Eritoran组大鼠脑组织存在少量的神经细胞轻度水肿、变性,偶见炎症细胞浸润。大鼠脑组织TLR4、NF-κB蛋白及mRNA表达在模型组、Eritoran组和对照组间依次降低(P均<0.05);模型组大鼠血清TNF-α、IL-1β、IL-6水平高于Eritoran组和对照组(P均<0.05),Eritoran组大鼠血清TNF-α、IL-1β、IL-6水平高于对照组(P均<0.05)。结论TLR4/NF-κB信号通路可能参与了EHS脑损伤的发生、发展,抑制该通路的激活,有望成为治疗EHS脑损伤的新切入点。

激素联合雷公藤多苷治疗成人特发性膜性肾病疗效与血清抗PLA2R抗体水平的关系

目的:探讨在激素联合雷公藤多苷治疗成人特发性膜性肾病(IMN)疗效与血清抗PLA2R抗体水平的关系。方法:61例成人IMN患者,采用间接免疫荧光法(IIFT)检测血清抗PLA2R抗体,根据血清抗PLA2R抗体检测结果分为血清抗PLA2R抗体阳性组(n=40)和血清抗PLA2R抗体阴性组(n=21),两组均予激素联合小剂量雷公藤多苷治疗,观察其疗效与血清抗PLA2R抗体的关系。结果:两组第1、3、6个月完全缓解率均呈升高趋势,与血清抗PLA2R抗体阳性组相比,血清抗PLA2R抗体阴性组第3个月完全缓解率(26.1%vs 5.8%)及第6个月总有效率(82.60%vs 55.80%)显著高于血清抗PLA2R抗体阳性组,差异具有统计学意义(P<0.05)。上呼吸道感染及肝功能异常是其主要的不良事件,但发生率两组无差异。结论:激素联合雷公藤多苷治疗IMN的疗效与血清血清抗PLA2R抗体水平有关,对血清抗PLA2R抗体阴性者疗效较好。

快速肠管重建在大鼠肠管断裂伴失血性休克中的应用研究

目的比较快速暂时性肠管重建与传统的肠管断端结扎方法对大鼠肠管断裂伴失血性休克的救治疗效,探索更加合理、有效的损伤控制性手术方法。方法将20只达到失血性休克状态的SD大鼠按随机数字表法分为2组,结扎组(n=10)采用肠管断端丝线结扎方法,重建组(n=10)采用自主研制肠道重建套管进行肠道连续性重建,于术后12h、24h取眼内眦静脉血离心测定2组大鼠血清中肿瘤坏死因子α(TNF-α)和白细胞介素6(IL-6)水平,24h后取2组肠道中间5mm肠管组织,标本固定后用光学显微镜观察其组织形态及炎症浸润程度。结果与重建组比较,结扎组大鼠术后12h血清中IL-6水平([152.20±16.24)ng/Lvs(217.28±19.23)ng/L]及24h血清中TNF-α和IL-6水平([117.56±15.78)ng/Lvs(258.60±21.65)ng/L,(173.78±8.58)ng/Lvs(341.07±49.52)ng/L]显著升高(P<0.01)。组织病理观察到结扎组肠黏膜上皮结构破坏,大量炎症细胞浸润;重建组肠黏膜上皮结构完整,黏膜下层仅少量炎症细胞浸润。结论在肠管断裂伤中,与肠管断端结扎相比,暂时性肠管重建可以有效减轻机体的炎症、保护肠黏膜屏障,有望成为新的损伤控制性手术处理措施。

共培养法分离培养不同遗传背景的小鼠精原干细胞

目的 建立一种简便、高效的小鼠精原干细胞(mouse spermatogonial stem cell, mSSC)分离、培养方法。方法 选取昆明小鼠和C57BL/6小鼠的雄性幼鼠睾丸,通过机械分离和酶消化相结合的方法获得细胞悬液,随后将含有mSSC和支持细胞以及其它细胞的混合悬液以合适的密度接种至培养皿中共同培养,待mSSC形成克隆,但支持细胞还未进入大量增值期时,将mSSC移至饲养层细胞中扩大培养,最后通过特异性分子标志物检测和诱导分化等实验对分离的mSSC进行鉴定。结果 通过将mSSC和支持细胞共同培养的方法建立了mSSC体外分离培养的共培养法,该方法从昆明小鼠和C57BL/6小鼠两种不同遗传背景的幼鼠睾丸中成功分离mSSC。RT-PCR实验结果表明,本研究分离培养的mSSC表达mSSC的特异性分子标志物Plzf、Gfrα-1和Ngn3,使用维甲酸(retinoic acid, RA)诱导后可观察到精子样细胞的出现,使用流式细胞术进行倍体分析表明,诱导后的细胞中有9.52%为单倍体,而未诱导的细胞中检测不到单倍体细胞存在。RT-PCR实验结果表明,诱导后mSSC开始表达精原干细胞分化相关基因Acrosin、Th2b和Sycp3。结论 本研究建立了一种适合不同遗传背景mSSC的体外分离、培养方法,该方法既简化了分离步骤,又节约了培养成本,为广泛开展mSSC的研究提供了条件。