人骨髓间充质干细胞向多巴胺神经元分化的体外研究

目的探讨人骨髓间充质干细胞(hMSC)向神经元和多巴胺神经元分化的潜能。方法分离和纯化hMSCs;在体外以WHI-P131预处理和碱性成纤维细胞生长因子预诱导后,全反式维甲酸和胶质细胞源性神经营养因子联合诱导hMSCs向神经元和多巴胺神经元分化。光镜下观察其分化过程中hMSCs的形态变化,免疫组化检测诱导前后细胞是否表达神经元和多巴胺能神经元标志蛋白。结果诱导后的hMSCs能分化成为具有典型神经元形态的细胞,并明显表达抗人神经巢蛋白(nestin)[(54.2±3.7)%]和神经元特异性烯醇化酶(NSE)[(77.0±5.7)%],低表达胶质纤维酸性蛋白(GFAP)[(8.8±2.4)%];对照组细胞这些表达均为阴性;而且相当部分hMSCs表达酪氨酸羟化酶(TH)[(36.5±15.8)%]和多巴胺转运体(DAT)[(26.0±14.2)%]。结论在适当条件下,hMSCs可分化成为神经元样细胞和多巴胺神经元样细胞。

青蒿琥酯对K562细胞的抑制作用及对VEGF表达的影响

本研究探讨青蒿琥酯(artesunate,ART)对K562的抑制作用和对VEGF表达的影响,为青蒿琥酯可能成为一种新的抗白血病药物提供实验基础和理论依据。实验以K562细胞为靶细胞,设对照组及各ART浓度(12.5、25、50、100μg/ml)组,绘制其生长曲线。用光学显微镜观察K562细胞生长情况及不同浓度ART作用不同时间后的细胞形态变化,同时用ELISA检测ART作用K562前后细胞上清液中VEGF含量变化。结果表明:ART对K562细胞的生长有明显的抑制作用(p<0.01),ART在抑制K562细胞生长时也下调其VEGF的表达(p<0.01)。K562细胞抑制率与其上清液中的VEGF浓度的相关分析表明:随着各ART组作用浓度递增,在一定时间范围内K562细胞抑制率升高,与此同时K562细胞VEGF表达下调,此变化差异有显著统计学意义(p<0.01)。结论:青蒿琥酯能显著地抑制K562细胞的生长;青蒿琥酯在抑制K562细胞生长时对VEGF的表达明显下调,K562细胞抑制率与其VEGF表达呈负相关;青蒿琥酯抑制K562细胞生长的机制可能是通过下调细胞的VEGF的表达实现的。

音速波状蛋白促进骨髓间充质干细胞向多巴胺能神经元分化

目的探讨音速波状蛋白(Shh)促进人骨髓间充质干细胞(MSCs)体外定向分化为多巴胺能神经元样细胞的作用。方法体外分离、扩增和鉴定人骨髓MSCs。采用不同诱导方案诱导MSCs向神经元和多巴胺能神经元样细胞定向转化后,进行抗神经巢蛋白(Nestin)、神经元特异烯醇化酶(NSE)、神经胶质纤维酸性蛋白(GFAP)、酪氨酸羟化酶(TH)和多巴胺转运体(DAT)等免疫细胞化学染色,并计算阳性细胞百分率。结果实验组诱导后MSCs能分化为具有典型神经元形态的细胞,可见NSE、Nestin、GFAP、TH和DAT等神经细胞标志表达;对照组MSCs细胞形态无明显变化,上述特异性标志物表达均为阴性。实验2组(诱导方案含Shh)与1组(诱导方案不含Shh)的NSE、Nestin、GFAP阳性细胞百分率的差异无统计学意义,但实验2组TH和DAT阳性细胞百分率明显高于实验1组,差异具有统计学意义(P<0.05)。结论Shh可促进MSCs分化为多巴胺能神经元样细胞。

自体树突状细胞活化的骨髓细胞对慢性粒细胞白血病骨髓的净化

为考察慢性粒细胞白血病 (CML)患者自体树突状细胞 (DCs)活化骨髓细胞、净化骨髓的作用 ,采用免疫磁珠从 2例血液学缓解的CML骨髓单个核细胞 (BMMNCs)分离DCs,另取BMMNCs置T 2 5塑料培养瓶建立Dexter培养体系 ,分为 3份 ,第 1份为对照 ,第 2份加rhIL 2 ,第3份加自体DCs。每周取半量非贴壁细胞、计数、行CFU GM检测 ,然后加等量新鲜培养基继续培养。当非贴壁细胞总数 <2× 10 5时终止培养 ,收集贴壁细胞做CFU GM集落形成试验并检测CD34和P2 10表达。取贴壁细胞形成的CFU GM集落 ,抽提RNA ,用反转录聚合酶链反应 (RT PCR)检测BCR ABL的表达。结果发现 ,在DCs加入CML骨髓Dexter培养体系培养后 1- 2周 ,非贴壁细胞的CFU GM产量明显下降 ,与rhIL 2的体系基本平行 ,同时体系中的P2 10阳性细胞显著减少。不过 ,培养 3周后含DCs的体系CFU GM产量下降减缓 ,而含rhIL 2的体系CFU GM产量持续下降。在含自体DCs的Dexter体系 ,贴壁细胞中CD34+ 细胞和P2 10 + 细胞比例最低 ,只是贴壁细胞产生的CFU GM集落中 ,BCR ABL(+ )的集落比例与不含DCs的体系比较无明显差别。这些结果说明自体DCs加入CML骨髓Dexter培养体系能减少白血病的祖细胞 ,包括成熟的祖细胞和原始的祖细胞 ,自体DCs有可能用于CML骨髓的体外净化。

RT-PCR动态检测体外扩增脐血巨核细胞GATA-1、NF-E2和GPⅡb mRNA的表达

目的研究体外扩增的脐血巨核细胞GATA-1、NF-E2和GPⅡb mRNA的表达情况,探讨SCF与TPO协同促进巨核细胞扩增的有效性。方法通过不同细胞因子组合诱导脐血巨核细胞扩增,RT-PCR方法进一步动态检测一个培养周期中SCF+TPO组GATA-1、NF-E2和GPⅡbmRNA。结果经14天培养后,SCF+TPO组扩增的巨核细胞的数量和纯度均较高,且GATA-1、NF-E2和GPⅡb mRNA的表达均呈时间依赖性。结论SCF和TPO的协同刺激在有效促进巨核细胞扩增的同时,也在有效诱导其分化。

钙离子载体诱导慢性髓系白血病细胞分化为树突状细胞的实验研究

本研究旨在探索钙载体(calcium ionophore, CI)诱导慢性髓性白血病(CML)细胞分化成树突状细胞(DC)的作用,了解诱导产生P210蛋白的情况和刺激自身T细胞产生针对CML细胞的细胞毒作用。用CI和粒-单集落刺激因子(GM-CSF)联合诱导CML病人骨髓来源的单个核细胞,通过倒置显微镜和电子显微镜观察细胞的形态变化和超微结构,用流式细胞仪检测细胞表面分化抗原的变化和变化过程;用Western blot检测CML特异的肿瘤标志物P210蛋白在DC中的表达;通过乳酸脱氢酶(LDH)实验评估CI诱导的CML-DC刺激自身T细胞产生抗CML细胞的细胞毒作用。结果表明: CML细胞经CI和GM-CSF联合诱导96小时后在倒置显微镜和电子显微镜下观察到DC典型的形态结构;流式细胞仪检测显示CD83、CD86、CD80、HLA-DR、CD40等细胞表面分化抗原的表达显著提高;Western blot实验表明,生成的CML-DC有P210蛋白的表达,与未经诱导的CML单个核细胞比较,用CI和GM-CSF联合诱导生成的CML-DC的P210蛋白表达水平降低;LDH实验表明,这些CML-DC刺激的自身T细胞对CML细胞的杀伤率显著高于用CML细胞刺激的自身T细胞。结论: CI和GM-CSF联合能快速诱导CML细胞分化成DC,这些CML-DC表达CML细胞特异的肿瘤标志物P210蛋白,但其表达水平较未经诱导的CML单个核细胞低;CML细胞经诱导生成的CML-DC能够刺激自身T细胞产生抗白血病细胞毒性。

急性淋巴细胞白血病髓系抗原表达的临床意义

目的探讨急性淋巴细胞白血病（ALL）患者髓系抗原表达与临床特征、预后的关系及意义。方法回顾性分析103例初治ALL患者的临床资料，根据流式细胞术免疫分型分为髓系抗原阳性表达（MyAg＋ALL）和阴性表达（MyAg＋ALL），分析髓系抗原表达与临床特征、近期疗效及5年总生存率的关系。结果103例ALL患者中，髓系抗原表达占46．5％，以CD13、CD33为主，分别为34．2％、21．4％；CD34在MyAg＋ALL中表达率高于MyAg＋ALL组（75．3％与60．5％，P〈0．05）；髓系抗原表达在T—ALL高于B—ALL（66．7％与42．8％，P〈0．05）；MyAg＋ALL患者形态学分型与免疫学分型不相符率（12．3％）明显高于MyAg—ALL（0．0％）。结论ALL髓系抗原表达与ALL患者临床特征、预后无明显关系。