龟鹿二仙胶含药血清诱导大鼠骨髓基质干细胞成骨分化的作用及机制

目的观察龟鹿二仙胶含药血清诱导大鼠骨髓基质干细胞(BMSCs)成骨分化的作用并探讨其机制。方法全骨髓贴壁法分离BMSCs,培养至F3代。MTT法检测龟鹿二仙胶含药血清增殖作用并确定最佳浓度;F3细胞分为10%FBS组、10%KB组、10%GLEXJ组和Classical组,检测碱性磷酸酶(Alkaline phosphatase,ALP)比活性,茜素红染色方法观察对BMSCs成骨分化的作用,RT-PCR方法和Western blot检测Fzd-2、Axin-2基因和蛋白表达的变化。结果 MTT结果显示浓度为10%的龟鹿二仙胶含药血清能促进BMSCs增殖;10%GLEXJ组和Classical组ALP比活性高于其余两组,差异有统计学意义(P<0.05);且随着时间的延长,增加更明显(P<0.05或P<0.01),茜素红染色见橘红色钙结节着色;10%GLEXJ组Fzd-2 m RNA和蛋白表达水平显著高于其余各组,差异均有统计学意义(P<0.05或P<0.01);10%GLEXJ组Axin-2 m RNA和蛋白表达水平显著低于10%FBS组和10%KB组,差异均有统计学意义(P<0.05或P<0.01)。结论龟鹿二仙胶含药血清能促进BMSCs增殖并诱导其向成骨细胞分化,其机制可能与增强Fzd-2表达、抑制Axin-2表达和激活Wnt/β-catenin通路密切相关。

特发性颈椎后凸畸形的手术治疗

目的 :明确颈椎前路手术治疗特发性颈椎后凸畸形的可行性和局限性。方法 :本文对 14例颈椎特发性后凸畸形患者采取手术方法进行治疗 ,所有患者均采用颈椎前路椎间盘切除减压 ,椎间隙植骨和前路钢板内固定。结果 :手术后患者临床体征明显改善 ,颈椎后凸畸形由手术前平均 -15 6°矫正为手术后平均 -6 4° ,矫正效果明显 ;手术后患者的短期随访表明颈椎矫正度数在随访中没有丢失。结论 :前路手术 ,延长颈椎前柱能够矫正颈椎的后凸畸形 。

SDF-1/CXCR4增强骨髓间质干细胞的造血支持作用

目的探讨基质细胞衍生因子-1(SDF-1)/CXCR4在骨髓间质干细胞(MSCs)支持CD34+造血干/祖细胞(HSPCs)扩增中的作用。方法在长期培养基(LTC)中,以大鼠骨髓MSCs作为饲养层体外扩增骨髓CD34+细胞,每周分别加入SDF-1、SDF-1抗体或CXCR4抗体至5周。计算CD34+细胞数和集落形成细胞(CFC)数,以评价造血支持功能。为评估SDF-1/CXCR4对CD34+细胞增殖周期的影响,进行了杀伤试验以计算增殖指数。流式细胞术检测MSCs和CD34+细胞中SDF-1与CXCR4的表达;ELISA检测MSCs和CD34+细胞培养基中SDF-1的含量。结果CD34+细胞数、CFC数和增殖指数在加入SDF-1后明显增加(P<0.01),加入SDF-1抗体或CXCR4抗体后明显减少(分别为P<0.05,P<0.01)。CD34+细胞表面表达CXCR4,MSCs则不表达;MSCs细胞内表达SDF-1,而CD34+细胞不表达。在MSCs培养基中检测到SDF-1,在CD34+细胞培养基中未发现。结论SDF-1/CXCR4在骨髓MSCs支持HSPCs扩增中起重要作用。

经腹腔镜BAK腰5～骶1椎体间融合术的应用解剖

目的 :为经腹腔镜BAK椎体间融合术提供解剖学基础。方法 :在 30具成人尸体标本上解剖观察了L5 ～S1椎间盘的形态及其前侧的毗邻关系。结果 :①脊柱L5 ～S1段前方有两侧髂血管围成的“∧’形区 ,内有骶中动、静脉 ,上腹下神经丛走行。②椎间盘平面正对腹前壁耻骨联合上方 ( 6 .7± 2 .8)cm处。结论 :经腹腔镜BAK椎体间融合术是安全、可行的术式。

兔骨髓间充质干细胞体外培养的生物学特性及多潜能分化研究

目的:研究兔骨髓间充质干细胞体外培养的生物学特性,建立一种稳定的细胞分化体系。方法:取3月龄大耳白兔骨髓3ml^4ml,采用贴壁法获取骨髓间质干细胞,取2代细胞按1×104个/孔接种于24孔培养板内,绘制生长曲线。将传代2代细胞按3×103个.cm-2,接种于6孔板内,并加入条件培养液(地塞米松10-7mol.L-1,β-甘油磷酸钠10 ml.L-1,50 mg.L-1抗环血酸),ALP-钙化染色鉴定,将传代2代细胞按3×105个.cm-2接种于6孔板内,并加入条件培养液(TGF-β15 ng.ml-1,地塞米松10-7mol.L-1或多聚赖氨酸10μg.ml-1),阿新兰染色鉴定。结果:原代生长的细胞呈梭形,7d后形成多个集落,并逐渐溶合或片铺满瓶底,随着传代次数的增加,细胞增殖能力增强。骨髓间质干细胞在不同条件培养液下可向成骨细胞或软骨细胞分化,ALP-钙染色及阿新兰染色阳性。结论:在本培养体系下,骨髓间质干细胞生长良好,可分化为成骨细胞及软骨细胞,具有多向分化潜能。

重组人促红细胞生成素对大鼠脊髓损伤后白细胞介素-10表达的影响及意义

目的 探讨重组人促红细胞生成素 (rHuEPO)对大鼠脊髓损伤后白细胞介素 10 (IL 10 )表达的影响。方法 SD大鼠 10 2只 ,随机分为 4组 ,采用改良Allen脊髓损伤打击模型 ,以逆转录 -聚合酶链反应(RT PCR)法测定伤段脊髓组织IL 10mRNA的表达情况。结果 正常脊髓组织内存在IL 10mRNA的表达 ;脊髓损伤后IL 10mRNA表达逐渐增强 ,在伤后 16 8h达高峰 (本实验的最后观察点 ) ;脊髓损伤后 30min注射rHuEPO能明显上调损伤脊髓组织内IL 10mRNA的表达。结论 脊髓损伤后IL 10mRNA表达逐渐增强 ;rHuEPO通过上调IL 10mRNA的表达 ,对脊髓继发性损伤可能有保护作用。

VEGF和p53在退变椎间盘组织中的表达及其意义

目的：探讨血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)和p53蛋白在退变椎间盘组织中的表达情况及其参与血管浸润的机制。方法：将156例腰椎间盘突出症患者手术中所取得的椎间盘组织进行病理切片检查，免疫组织化学方法检测退变椎间盘组织中的VEGF和p53蛋白的表达情况。结果：156例退变椎间盘组织中见血管浸润现象98例，占62．8％；退变椎间盘组织中VEGF和p53的阳性表达率分别为73．42％(116／156)和58.97％(92／156)，共同表达率53．2％(83／156)；有血管浸润的退变椎间盘组织中VEGF、p53的表达明显高于无血管浸润的退变椎间盘组织；VEGF与p53蛋白表达密切相关。结论：VEGF和p53基因在退变椎间盘组织中存在协同表达，共同参与椎间盘组织中新生血管形成和浸润，加速椎间盘组织退变。

原发灶不明脊柱转移癌的诊断和手术治疗

目的 探讨原发灶不明脊柱转移癌的诊断和手术治疗的临床疗效。方法 对 4 6例原发灶不明脊柱转移癌进行回顾性分析 ,其中手术为主的综合治疗 2 4例 ,非手术治疗 2 2例。结果 随访 1～ 4年 ,手术患者 1年存活率 2 2 7% (5例 ) ,3年存活率 9 1% (2例 ) ,4年内全部死亡 ,平均生存期为 6 2个月。疼痛消失或缓解2 0例 ;6例不全瘫痪患者 ,术后神经功能 1例完全恢复 ,2例部分恢复 ,3例无改变 ;完全瘫痪者则无一例恢复 ;14例无瘫痪患者术后 3例发生截瘫 ,较同期无瘫痪未手术者的截瘫发生率低。结论 原发灶不明脊柱转移癌预后差 ,手术为主的综合治疗能减轻或缓解疼痛、维持或改善神经功能、稳定脊柱 ,减少截瘫的发生 。

带锁髓内钉治疗股骨、胫骨干骨折

目的:探讨带锁髓内钉的适应证、优缺点及并发症的预防。方法:回顾性地分析应用带锁髓内钉治疗63例股骨及胫骨干骨折的临床资料,从以上各方面进行讨论。结果:获随访58例中,骨折全部愈合。术中再骨折1例,远端锁钉放置失败 3例,术后肢体延长1例,主钉断裂、弯曲各1例,远端锁钉断裂1例,退出2例。结论:交锁髓内钉是良好的内固定方法,具有骨折固定牢固、愈合良好的优点,运用时应严格掌握适应症及严格按规程操作,预防并发症发生。

龟鹿二仙胶诱导大鼠骨髓基质干细胞成骨分化作用及对Wnt通路的影响

目的观察龟鹿二仙胶含药血清对SD大鼠骨髓基质干细胞(bone marrow mesenchymal stem cells,BMMSCs)成骨分化的作用及其对Wnt信号通路相关因子的影响。方法 100只3月龄雌性SD大鼠经腹腔入路切除双侧卵巢,按随机数字表法分为低剂量组、中剂量组、高剂量组和空白组,每组25只。按体表面积换算龟鹿二仙胶剂量并灌胃给药,连续7天后腹主动脉采血制备含药血清。1月龄SD大鼠全骨髓贴壁法分离BMMSCs,流式细胞法(flow cytometry,FCM)法检测F3代细胞CD45和CD90表达;不同浓度龟鹿二仙胶含药血清干预F3代BMMSCs 72 h后,FCM法检测细胞周期的影响并计算增殖指数,确定最佳干预浓度。F3代细胞分为FBS组、空白组、龟鹿二仙胶组和经典诱导组,诱导培养21天后,茜素红(alizarin red staining,ARS)染色法观察BMMSCs成骨分化,RT-PCR检测成骨分化相关基因碱性磷酸酶(alkaline phosphatase,ALP)和骨钙素(osteocalcin,OC)mRNA的表达;RT-PCR和Western blot检测Wnt5a、β-连环蛋白(β-catenin)、淋巴样增强因子-1(lymphoid enhancer factor-1,Lef-1)mRNA和蛋白的表达。结果 F3代细胞CD45阳性表达率为1.46%±0.23%,CD90阳性表达率为96.97%±3.21%;浓度为10%的龟鹿二仙胶中剂量组含药血清能显著促进BMMSCs增殖;龟鹿二仙胶组和经典诱导组ARS染色可见橘红色钙结节。与空白组及FBS组比较,龟鹿二仙胶组和经典诱导组OC和ALP mRNA表达上调(P<0.05),Wnt5a、β-catenin mRNA和蛋白表达上调(P<0.05);与空白组、FBS组和经典诱导组比较,龟鹿二仙胶组Lef-1 mRNA和蛋白表达均升高(P<0.05);与FBS组和空白组比较,经典诱导组Lef-1蛋白表达上调(P<0.05)。结论龟鹿二仙胶含药血清具有促进BMMSCs增殖,诱导BMMSCs向成骨细胞分化的作用,其机制可能与调控Wnt信号通路相关因子的表达有关。