眼镜蛇毒细胞毒素缓释微球制备及体外性质研究

目的研究眼镜蛇毒细胞毒素（Cytotoxin，CTX）聚乳酸／羟基乙酸缓释微球的制备方法，考察其一般性质、体外释药特性及生物学活性。方法采用色谱方法纯化眼镜蛇CTX，MTT方法检测细胞毒活性，复乳-溶剂挥发法制备载药微球，考察微球表面形态、粒径、包封率、载药率、体外释药行为及释放眼镜蛇CTX细胞毒活性。结果纯化眼镜蛇CTX具有明显的细胞毒作用，对肝癌HepG2细胞12，24h的IC50分别为1．43，1．12μg／mL，对L02肝细胞12，24h的IC50分别为1．37，1．01μg／mL。微球表面光滑圆整，粒径2．1～7．8μm，包封率和栽药率分别为（74．10±9．92）％和（0．72±0．09）％，30d药物累积释放84．3％，释放眼镜蛇CTX保持较好的生物学活性。结论采用复乳-溶剂挥发法可制备具有较高包封率，良好缓释效果，保持完整生物学活性的眼镜蛇CTX缓释微球。

圆斑蝰蛇泰国亚种(Vipera russe lli siamensis)蛇毒凝血因子激活剂的纯化及部分特性研究

目的 从圆斑蝰蛇泰国亚种蛇毒中分离纯化凝血 因子 (F )激活剂并研究其部分特性。 方法 采用离子交换柱层析和凝胶过滤等方法进行分离纯化 ,以血液凝固时间及发色底物 (S- 2 2 2 2 )进行活性鉴定和温度、p H值、蛋白酶抑制剂对活性的影响 ,SDS- PAGE进行分子量、等电点及纯度测定 ,苯酚 -硫酸法及间苯二酚 -盐酸法测定糖含量。 结果 所得促凝组分 1 能特异性地活化牛 F ,从而水解 S- 2 2 2 2酰胺键。SDS- PAGE呈现单一蛋白带 ,分子量为 6 1.1± 1.5 k D(还原 ) ,6 0 .4± 1.9k D(非还原 )。等电点为 p H=8.0 0± 0 .0 6。含中性己糖 12 .4 %±0 .5 % ,唾液酸 0 .12 %± 0 .0 2 %。在 5 0℃以下稳定 ,最适 p H为 7.0～ 8.2。可被金属蛋白酶抑制剂 EDTA- Na2 完全抑制 ,二硫苏糖醇 (DTT)及 L -半胱氨酸部分抑制 ,不受胰蛋白酶抑制剂抑肽酶抑制。 结论 从圆斑蝰蛇泰国亚种蛇毒分离纯化的 F 激活剂是一种碱性糖蛋白 ,属于 Ca2 + 依赖性的金属蛋白酶。

福建产舟山眼镜蛇毒细胞毒素的快速分离纯化及鉴定

目的 从舟山眼镜蛇毒中分离纯化细胞毒素 (CTX) ,并鉴定其理化性质。 方法 采用 SP- SephadexC- 2 5阳离子交换色谱及 Sephasil Peptide C1 8反相高效液相色谱法从舟山眼镜蛇毒中分离纯化 CTX,SDS- PAGE(Tris- Tricine系统 )鉴定纯度 ,Edman降解法测定 N端氨基酸序列。 结果 粗毒经阳离子交换色谱 ,得到 1 4个蛋白峰 ,其中第 ～ 峰具 CTX活性 ;再分别经反相色谱纯化 ,得到 4个 CTX,总得率为 32 .4 8% ;SDS- PAGE显示为均一蛋白 ,分子量依次为 :7.2 8,7.33,7.2 4和 7.38k D;测定它们 N端 2 0个氨基酸序列。 结论 采用阳离子交换和反相高效液相色谱可快速、高效地从眼镜蛇毒中获得 4个

福建产眼镜王蛇毒神经毒素的分离及活性测定

目的 从眼镜王蛇蛇毒中分离神经毒素 ,测定其活性和毒性。 方法 应用 CM- Sephadex C- 5 0离子交换色谱 ,阶段梯度洗脱分离粗毒 ;用 Sephadex G- 5 0凝胶过滤纯化组分 ;用大鼠体外膈神经 -膈肌标本鉴定分离组分对神经 -肌肉接头的作用性质 ;观察神经毒素对乙酰胆碱 (Ach)引起蛙体外腹直肌收缩的量效曲线的影响 ;以Meier法测定神经毒素对小鼠的半数致死量 (L D50 )。 结果 眼镜王蛇粗毒经阳离子交换色谱后获得 A～ N共 1 4个蛋白峰 ,经鉴定 E、F、G、H、I、K等 6个蛋白峰具有阻断神经 -肌肉接头传导的作用 ,被鉴定为神经毒素 ,约占粗毒的 4 8.3% ;通过凝胶过滤对 E、G和 K组分进行初步纯化 ;E、G和 K组分可使 Ach引起的蛙腹直肌收缩的量效曲线平行右移 ,它们与 N2 -胆碱受体 (N2 - Ach R)的解离常数 (KD)分别为 :1 4 5 .87,73.5 3和 2 0 .0 4 ng/ m L;E、G和 K组分小鼠静脉注射的 L D50 分别为 :0 .884 ,0 .74 9和 1 .5 8mg/ kg。 结论 眼镜王蛇粗毒经离子交换色谱获得 6个神经毒素组分 ,经鉴定 E、G和 K组分为 N2 - Ach

蛇毒纤溶酶原激活剂的研究进展

蛇毒是含有多种生物活性蛋白质和多肽的混合物,其中一些蛋白可作用于人的凝血系统。蛇毒纤溶酶原激活剂是具独特活性的蛇毒丝氨酸蛋白酶,具有较长的半衰期,可专一性地裂解人Glu-纤溶酶原的Arg561-Val562肽键,使之变成有活性的纤溶酶,从而发挥溶栓作用。该文主要对蛇毒纤溶酶原激活剂的结构特点和作用机制进行了阐述,旨在为新型溶栓剂的研究提供方向。

蛇毒的非抗毒血清解毒剂研究进展

对于蛇毒的解毒和蛇伤的治疗,除了特效的抗毒血清外,一些化学物质,包括植物药,动物体中成分,化学药品等,通过不同作用方式,对蛇毒也有不同程度的解毒作用,有的也已试用于临床,以弥补抗毒血清的不足。本文综述了这方面的进展。

舟山眼镜蛇毒神经毒素的分离纯化及镇痛作用研究

目的从舟山眼镜蛇毒中分离纯化神经毒素，并测定其部分理化性质及镇痛活性。方法应用SP．SephadexC-50离子交换色谱法分离眼镜蛇毒粗毒，用SephadexG-50凝胶过滤色谱、CM—SephadexC-25离子交换色谱纯化神经毒素；SDS．PAGE（Tfis-Tfieine系统）鉴定纯度；用Meier方法测定毒性；用热板法观察神经毒素的镇痛作用。结果应用SP—SephadexC-50离子交换柱层析，从舟山眼镜蛇毒中分离得到14个蛋白峰，其中6个组分（NNAV-Ⅶ～Ⅻ）经鉴定为含有神经毒素组分，将神经毒活性最强的组分Ⅻ经SephadexG-50、CM．SephadexC-25纯化得神经毒素纯品NTⅪ。该纯品分子量12．3kD，小白鼠静脉注射和腹腔注射的LDso分别为1．9875、2．2217mg·kg^-1。NTXI能显著提高小鼠对热板刺激的痛阈。腹腔注射0．2mg·kg^-1NTXI可使小鼠的热板痛阈提高84．35％。NTXI的镇痛作用具有时效性，给药后2h起效，4h作用达峰值。结论舟山眼镜蛇毒中分离得到一个神经毒素纯品NTXI，具有镇痛作用。

眼镜蛇毒细胞毒素类免疫毒素研究进展

眼镜蛇毒细胞毒素类免疫毒素是将从眼镜蛇毒中分离纯化的细胞毒素与抗体或细胞因子偶联而得到的一类新型导向药物,它以抗体或细胞因子特异识别并结合靶细胞,通过细胞毒素破坏细胞膜而引起细胞死亡。由于细胞毒素类免疫毒素能高效、特异地杀伤靶细胞,因此选择眼镜蛇毒细胞毒素用于肿瘤导向治疗将是一条很有希望的途径。

蛇毒纤溶酶原激活剂的研究进展

蛇毒纤溶酶原激活剂能间接溶解纤维蛋白,具有较强抗PAI的抗性及半衰期较长等优点,由于其在临床上潜在的应用价值,因此是一个值得开拓、前景广阔的领域。本文综述了蛇毒纤溶酶原激活剂的研究近况。

蛇毒蛋白基因的大肠杆菌表达研究进展

蛇毒是多种生物活性蛋白和多肽的混合物,由于蛇毒在基础医学和临床上的特殊作用以及天然蛇毒蛋白获取方法的局限性,采用生物工程方法规模化生产高纯度的蛇毒蛋白已成为当前及今后的研究方向。该文就蛇毒蛋白基因在大肠杆菌中表达的研究近况进行介绍。

舟山眼镜蛇毒细胞毒素的分离纯化及其体外抗肿瘤活性

目的从眼镜蛇毒中分离纯化细胞毒素 F(CTX F)并鉴定其活性。方法应用凝胶过滤、离子交换柱色谱及疏水柱色谱等方法从舟山眼镜蛇毒中分离纯化CTX F ,以SRB法观察CTX F对体外培养癌细胞的杀伤作用。结果眼镜蛇毒粗毒经凝胶过滤获得 4个蛋白峰 ,将CTX所在第Ⅳ峰用阳离子交换柱色谱获A、B、C、D、E、F和G等7个组分 ,其中E、F和G具CTX活性 ,将F组分再经凝胶过滤和疏水色谱进一步纯化得不含磷酯酶A2 (PLA2 )的CTX纯品 ,暂定名为CTX F ,它对多种癌细胞株有杀伤作用。结论应用凝胶过滤、离子交换和疏水色谱等方法可从眼镜蛇毒中获得不含PLA2 的CTX 。

短尾蝮蛇毒纤溶酶原激活剂的分离纯化及活性测定

目的从短尾蝮蛇毒中分离纯化纤溶酶原激活剂(plasminogen activator of Gloydius brevicaudus venom,GBV-PA),对其理化性质及部分生物活性进行研究。方法应用苯甲脒-琼脂糖凝胶(Benzamidine Sepharose6B)亲和层析及Lichrospher C18反相层析柱进行分离纯化,应用SDS-PAGE测定分子量、聚丙烯酰胺凝胶盘状电泳测定等电点,以发色底物法测定生物活性。结果通过亲和层析、反相层析等方法可从短尾蝮蛇毒中分离纯化出纤溶酶原激活剂至电泳纯以上,其相对分子质量约为32.6×103,等电点约为5.2,能特异激活人纤溶酶原为纤溶酶,其比活性为2.87t-PA IU.mg-1;该酶为丝氨酸蛋白酶,对纤维蛋白无亲和性。结论应用亲和层析和反相层析可从短尾蝮蛇毒获得一种纤溶酶原激活剂;该酶为丝氨酸蛋白酶,对纤维蛋白无亲和性。

舟山眼镜蛇毒心脏毒素-13的纯化、活性及尼群地平对其作用的影响

目的 从舟山眼镜蛇 (Najaatra)毒分离纯化心脏毒素并观察其心脏毒性作用和探讨作用机制。方法 用离子交换和凝胶过滤法从蛇毒中分离纯化心脏毒素 ,观察其对整体动物 ,离体器官和组织的作用及作用影响因素。结果 从舟山眼镜蛇毒中分离出 4个有心脏毒性组分 ,纯化其中 1个定名为心脏毒素 13(Cardiotoxin 13,CTX 13) ,它含有 6 0个氨基酸 ,分子质量 7 76 9ku。小鼠ivLD50 为 0 75 6mg·kg-1。对大鼠离体心脏CTX 13可使冠脉阻力增高 ,心脏收缩幅度减小 ,停于收缩期。尼群地平 (Nit)能取消CTX 13升高冠脉阻力作用 ,同时使CTX 13的负性肌力作用逆转为正性肌力作用。CTX 13可诱发猪离体冠脉环呈剂量依赖性收缩 ,其EC50 为 2 6 0mg·L-1,Nit 0 0 5 μmol·L-1使其量效曲线平行右移 ,EC50 提高到 36 0mg·L-1。但对于大鼠离体乳头肌Nit 0 83μmol·L-1对CTX 13所致心脏毒性无明显对抗作用。在整体实验中Ni0 3mg·kg-1可使大鼠ivCTX 13的最小致死量 (MLD)从 (44 4 7± 2 8 5 ) μg·kg-1提高到(5 41 2± 2 3 2 ) μg·kg-1。结论 CTX 13的心脏毒性作用除其直接心脏毒作用外 。

肠道菌群调控炎症微环境在结肠癌中的作用及机制研究进展

近几年大量研究表明肠道菌群失调与结肠癌（Colon cancer）发生发展有着密切联系。正常机体结肠中寄生的大量微生物,参与结肠内环境稳态的维持,然而一旦这种稳态遭到破坏,会导致肠道菌群失调,进而诱发结肠癌的发生。但是其中的机制并不是很清楚,现已报道的主要有：诱发慢性炎症,合成生物毒素阻碍肠上皮细胞周期调节,产生有毒代谢产物,激活致癌化合物例如杂环胺等。

徐长卿多糖抗肿瘤活性研究

目的:从徐长卿中提取多糖并测定其体内抗肿瘤活性。方法:应用水提醇沉法从徐长卿根茎粉末中提取徐长卿多糖(CPB)粗品,用苯酚-硫酸法测其含量。运用小鼠移植性腹水癌H22和EAC及移植性实体瘤S180观察徐长卿多糖灌胃对肿瘤生长的影响。结果:徐长卿根茎粉末中提取徐长卿多糖,提取率约为5.07%,其多糖平均含量约为82.43%。徐长卿多糖100、50mg/kg ig对小鼠移植性腹水癌EAC有显著抑制作用,其生命延长率分别为15.18%和30.22%,而徐长卿多糖200mg/kg ig,生命延长率为3.20%。徐长卿多糖200、100和50mg/kg ig×10d对小鼠腹水癌H22有显著抑制作用,其腹水减轻率分别为12.37%、26.91%、12.24%。徐长卿多糖200、100和50mg/kg ig×10d对小鼠移植性实体瘤S180有显著抑制作用,其抑瘤率分别为47.48%、55.40%、57.55%。结论:应用水提醇沉方法可以从徐长卿中快速简便获得徐长卿粗多糖,徐长卿多糖灌胃给药对小鼠移植性腹水癌H22、EAC和实体瘤S180生长具有抑制作用。

徐长卿提取液对眼镜蛇蛇毒引起的炎症及毒性的影响

目的 探讨徐长卿提取液对眼镜蛇毒的解毒作用。 方法 (1)采用眼镜蛇蛇毒对大鼠足跖肿胀的致炎模型 ,观察徐长卿提取液灌胃给药后 ,对大鼠足跖肿胀度的影响 ;(2 )观察徐长卿提取液对大鼠腹股沟植入含眼镜蛇毒棉球形成的肉芽肿的影响 ;(3)观察徐长卿提取液灌胃对眼镜蛇毒中毒小鼠的解毒作用。 结果 以 5 ,10 ,15 g/kg徐长卿提取液灌胃对眼镜蛇毒引起的大鼠足跖肿胀及棉球肉芽肿均有显著的抑制作用。眼镜蛇毒所致的大鼠足跖肿胀的抑制率用药后 1h分别是 2 5 .1% ,2 9.7% ,36 .6 % ,用药后 3h分别是 2 8.9% ,37.3% ,4 0 .7% ;徐长卿提取液灌胃(1/d× 7)对腹股沟棉球肉芽肿的抑制率分别为 2 8.9% ,39.8% ,2 9.6 % ;徐长卿提取液灌胃对眼镜蛇毒中毒小鼠有明显的减毒作用 (P<0 .0 5 )。 结论 徐长卿对眼镜蛇毒引起的炎症及毒性有明显的对抗作用。