鼠脑外伤后人工脑脊液灌洗对ERK通路和神经细胞凋亡的影响

目的:检测人工脑脊液灌洗通过ERK通路对脑外伤后神经细胞凋亡的影响。方法:将SD大鼠192只,随机分为假手术组、脑外伤模型组、局部人工脑脊液灌洗组、局部生理盐水灌洗组,各组又按处死时间即术后6 h,12 h,1 d,3 d分为4个亚组。采用蛋白免疫印迹法检测各组磷酸化细胞外信号调节激酶2(P-ERK2)蛋白的表达、SABC法半定量检测肿瘤坏死因子α(TNF-α)蛋白的表达,TUNEL法检测细胞凋亡。结果:人工脑脊液灌洗组伤灶区P-ERK2蛋白和TNF-α蛋白的表达以及凋亡阳性细胞数在各时间点均低于模型组和生理盐水灌洗组(P<0.05)。结论:人工脑脊液灌洗可能通过ERK通路减少脑损伤后神经细胞凋亡。

血管内皮细胞生长因子对胶质瘤病理形态影响的实验研究

目的了解血管内皮细胞生长因子(VEGF)对胶质瘤病理形态的影响。方法利用光镜和电镜观察转染有反义VEGF cDNA片段的C_6胶质瘤细胞的裸鼠移植瘤的病理特征,ELISA法检测肿瘤组织中VEGF的含量。结果转染有反义VEGF cDNA片段的C_6胶质瘤组织中VEGF含量明显低于仅转染有空载体的C_6胶质瘤组织(P＜0．05)。前者瘤组织表面存在类包膜,瘤周血管反应轻。无明显瘤周水肿,瘤周侵袭少见,凋亡瘤细胞明显增多；血管内皮细胞胞浆内VVO样结构少见,基板不连续、单层,外周见胶原纤维；但个别肿瘤大者瘤组织中VEGF含量也高,且内皮细胞VVO样结构也随之增多。而后者瘤周血管反应明显,瘤体和瘤周水肿严重,瘤细胞可侵袭瘤周组织,瘤内组织明显出血坏死,且可见瘤细胞形成类微血管样结构,血管内皮细胞胞浆内VVO样结构较多,水肿越明显VVO样结构越多见,并与组织中VEGF含量相一致；基板较完整连续,多数基质疏松,呈多层排列,外层见少量胶原纤维。所观察的几种肿瘤中的微血管内皮细胞孔窗及内皮细胞裂隙与转染的目的基因无明显的关系,且内皮细胞的凋亡均不明显。结论胶质瘤细胞上VEGF表达的下调可促进胶质瘤细胞凋亡；VEGF通过内皮细胞内的VVO样结构增多引起血管渗透性增加致瘤体和瘤周水肿,而与内皮细胞上孔窗无明显的关系：胶质瘤组织中的血管基板完整连续与否与VEGF有关。

内皮抑素和反义/正义内皮细胞生长因子cDNA真核共表达载体构建与表达

目的构建大鼠内皮抑素cDNA和反义/正义血管内皮细胞生长因子(VEGF)cDNA真核共表达载体,并在C6胶质瘤细胞上获得表达。方法以1d龄大鼠脑组织总RNA为模板,利用RT-PCR法从中扩增出内皮抑素和反义/正义VEGF的cDNA,并将获得的目的cDNA依次重组入真核表达载体pBudCE4.1上。重组子经酶切、PCR及测序鉴定后脂质体法转染C6细胞,zeocin抗性筛选。Western-blot方法、免疫细胞化学法及MTT法鉴定含内皮抑素的阳性克隆子;ELISA方法检测各阳性克隆子上清液中VEGF含量。结果构建带有目的基因的重组子经酶切、PCR和测序鉴定,产物大小及基因序列与预期值相符。经抗性筛选的含内皮抑素cDNA的阳性克隆子可分泌具有生物学活性的内皮抑素;含反义VEGFcDNA的阳性克隆子VEGF均呈低表达,其中转染有内皮抑素cDNA和反义VEGFcDNA共表达载体的克隆子的VEGF表达最低;转染有内皮抑素cDNA和正义VEGFcDNA共表达载体的克隆子的VEGF也呈低表达。结论成功地构建大鼠内皮抑素和反义/正义VEGFcDNA真核共表达载体并在C6细胞上获得表达,内皮抑素可下调VEGF在肿瘤细胞上的表达。