电子克隆结合RT-PCR获得两条eIF4E剪接变异体的全长cDNA

本研究旨在克隆急性白血病复发相关的新EST片段全长cDNA并进行生物信息学分析。电子克隆结合RT-PCR克隆新EST片段的全长cDNA,利用生物信息学技术分析所获得的cDNA。结果获得全长序列为1904bp和3393bp的两条真核细胞翻译起始因子4E(eukaryotic initiation factor4E,eIF4E)新的剪接变异体,命名为真核细胞翻译起始因子剪接变异体1(splicing variant1 of eIF4E)和真核细胞翻译起始因子剪接变异体2(splicing variant 2 of eIF4E)。编码的蛋白产物分别为245和132个氨基酸。二者编码的蛋白产物与eIF4E蛋白有所不同。结论:获得了两条eIF4E剪接变异体的全长cDNA,这为进一步探讨与急性白血病复发的相关性提供基础。

深静脉血栓形成的肝素应用

深静脉血栓形成(Deep Vein Theombosis．DVT)习指发生于下肢深静脉的血栓，但DVT也可发生于其他部位。上海中山医院1957-1988年间收冶的173例DVT中，发生于下肢深静脉者136例，上腔静脉者11例，上肢静脉12例。

用于转换国际标准的BCR-ABL（P210）转录本水平的转换系数多中心确认研究

目的确认用于转换国际标准的慢性髓性白血病的BCR-ABL（P2lO）转录本水平的转换系数（CF）的有效性。方法2012年澳大利亚医学与兽医科学研究所（IMVS）国】际参比实验室寄送2批各30份RNA样本至北京大学人民医院（简称人民医院），通过双方BCR-ABL（P21O）转录本水平检测值的比较，人民医院计算并确认用于转换国际标准的BCR．ABL（P210）转录本水平的CF。2013年人民医院统一制备用于确认9家医院之前已计算出的CF的比对样品，即用新鲜的BCR-ABL（一）患者骨髓有核细胞稀释BCR-ABL（P210）（＋）细胞制备出22种不同BCR-ABL水平的样本，每种样本各制备10份平行样本，加入TRIzol中。每家医院各检测1套样品。各医院的检测值分别与人民医院的检测值比较，进行Bland-Altman一致性分析。结果通过IMVS的确认，人民医院成功获得有效的CF，偏倚为1．1倍，95％一致性界限为-4．7～4．9倍。9家医院中，6家医院达到偏倚≤±1．4倍并且95％一致性界限介于士6．0倍之间的标准，说明已计算出的CF有效。结论CF的确认检验了BCR．ABL（P210）转录本水平检测的稳定性，对获得有效的转换国际标准的CF是必要的。

伊马替尼联合化疗治疗成人Ph阳性急性淋巴细胞白血病的疗效评估

目的:评估伊马替尼联合化疗方案治疗成人Ph染色体阳性急性淋巴细胞白血病(Ph+ALL)的疗效。方法:回顾性分析76例初治成人Ph+ALL的病例资料,通过比较应用伊马替尼联合化疗方案的联合组(56例)及单纯化疗组(20例)的完全缓解率、复发率、总生存(OS)时间、无病生存(DFS)时间等指标,评估伊马替尼联合化疗治疗成人Ph+ALL的疗效。结果:联合组和单纯化疗组的诱导完全缓解率分别为85.7%(48/56)和45.0%(9/20),2组差异有统计学意义(P<0.05)。联合组和单纯化疗组的血液学缓解持续时间分别为(6.8±5.6)个月和(5.7±4.5)个月,复发率分别为60.7%(34/56)和85.0%(17/20),2组差异无统计学意义。联合组和单纯化疗组的中位OS分别为12(2~39)个月和4.5(0~17)个月,1年、2年OS率分别为50.0%、18.0%和10.0%、0,2组差异有统计学意义(P<0.05)。联合组和单纯化疗组的中位DFS分别为7(0~35)个月和3(1~13)个月,1年、2年DFS率分别为31.6%、17.4%和11.6%、0,2组差异无统计学意义。联合组和单纯化疗组的常见不良反应为骨髓抑制、感染、出血、胃肠道反应、肝功能损害、乏力,2组不良反应差异无统计学意义。结论:在成人Ph+ALL患者治疗中,采用伊马替尼联合化疗方案,可以提高完全缓解率及改善预后,并且不增加治疗相关毒副反应。

CRISPR/Cas9介导的microRNA-21敲除对慢性髓性白血病细胞伊马替尼敏感性的影响

目的观察microRNA-21(miR-21)敲除对耐伊马替尼的人慢性髓性白血病细胞株K562/G01细胞在增殖、药物敏感性等方面的影响,初步探讨miR-21影响K562/G01细胞伊马替尼敏感性的可能机制。方法运用CRISPR/Cas9技术敲除K562/G01细胞的miR-21,经PCR筛选、Sanger测序鉴定和实时定量PCR检测获得miR-21敲除的单细胞克隆。扩增培养后,采用MTT法、细胞克隆形成实验检测miR-21敲除对K562/G01细胞增殖的影响。使用伊马替尼处理细胞后,用MTT法和AnnexinⅤ-APC/7-AAD双染流式细胞检测法观察敲除miR-21后K562/G01细胞对伊马替尼的敏感性的变化。Western blot法检测miR-21敲除前后K562/G01细胞PTEN、AKT、p-AKT、PI3K、p-PI3K、P210^(BCR-ABL)、p-P210^(BCR-ABL)蛋白表达量的变化。结果成功构建了3个miR-21敲除的K562/G01单细胞克隆,CRISPR/Cas9介导的突变效率为7.12%~8.11%。miR-21敲除使K562/G01细胞的增殖受抑,野生型和1#、2#、6#单细胞克隆的克隆形成率依次为(57.67±8.25)%、(26.94±5.36)%、(7.17±2.11)%、(31.50±3.65)%,差异有统计学意义(P<0.05)。miR-21敲除使K562/G01细胞对伊马替尼的敏感性增加,野生型和1#、2#、6#单细胞克隆对伊马替尼的IC_(50)值分别为(21.92±1.36)µmol/ml、(3.98±0.39)µmol/ml、(5.38±1.01)µmol/ml、(9.24±1.36)µmol/ml,差异有统计学意义(P<0.05)。miR-21敲除后,其靶基因PTEN的蛋白表达水平未见明显变化,但PI3K、AKT信号分子的活化受到抑制,并且P210^(BCR-ABL)、p-P210^(BCR-ABL)蛋白表达也下调。结论miR-21敲除抑制K562/G01细胞增殖,提高其对伊马替尼的敏感性,这可能是通过抑制PI3K/AKT信号通路和BCR-ABL表达实现的。

精准医疗时代外周T细胞淋巴瘤的分子生物学标志认识及其治疗进展

外周T细胞淋巴瘤（peripheral T-cell lymphomas,PTCLs）是一组起源于胸腺后成熟T淋巴细胞或NK/T细胞的高度异质性的侵袭性非霍奇金淋巴瘤,占新诊断非霍奇金淋巴瘤患者的10%-15%,患者中位年龄50-60岁。2016年WHO分类系统将PTCLs划分为超过20个亚型。