福建汉族人群结合珠蛋白基因群体遗传学分析

目的探讨福建汉族人群结合珠蛋白(Hp)基因的群体遗传特点及4个年龄组人群的特点和差异。方法应用聚丙烯酰胺凝胶垂直平板电泳技术,分离血清中的Hp,分析群体中的Hp基因频率和基因型频率,比较4个年龄组群体间差异。结果福建汉族Hp1基因频率为0.340,其中儿童组0.307,青年组0.338,中年组0.363,老年组0.383。儿童组Hp1基因频率显著低于中年组和老年组(P<0.05)。Hp0-0型频率0.026,4个年龄组分别为0.032,0.046 0.014,0.014。结论福建汉族人群Hp1基因频率较高。

核仁素通过调控胸苷激酶1影响淋巴瘤增殖的研究

目的:探讨核仁素通过胸苷激酶1(TK1)参与淋巴瘤增殖调控的机制。方法:选取弥漫性大B细胞淋巴瘤患者23例,纳入初治组14例,复发/难治组9例,检测患者血清TK1以及外周血单个核细胞中C23蛋白。以Burkitt淋巴瘤细胞株CA46为研究对象,通过慢病毒介导的转染方法,获得RNAi核仁素基因表达下调的细胞模型CA46-NCL-KD及阴性对照组细胞模型CA46-NCL-KNC;采用细胞增殖法(MTS法)分别检测CA46-NCL-KD、CA46-NCL-KNC和CA46对阿霉素的增殖半数抑制率(IC_(50))。通过Q-PCR和Western blot分别检测CA46-NCL-KD、CA46-NCL-KNC细胞NCL mRNA和蛋白表达水平,用流式细胞术对CA46-NCL-KD、CA46-NCL-KNC和CA46细胞进行细胞周期检测,用酶免疫点印记化学发光法分析CA46-NCL-KD、CA46-NCL-KNC细胞TK1蛋白的表达情况。结果:初治组患者血清TK1水平为0.43(0.30-1.01)pmol/L,低于复发/难治组患者的10.56(2.19-14.99)pmol/L(P<0.01),且初治组患者外周血单个核细胞NCL蛋白相对表达量明显低于复发/难治组。CA46-NCL-KD对阿霉素的IC_(50)为(0.147±0.02)μg/ml,明显低于CA46-NCL-KNC的(0.301±0.04)μg/ml以及CA46的(0.338±0.05)μg/ml(P<0.05);与CA46-NCL-KNC相比,CA46-NCL-KD中NCL mRNA和蛋白水平表达下降,细胞周期中的G0/G1期比例升高,S期及G2/M期比例下降,TK1蛋白表达下降。结论:在弥漫大B细胞淋巴瘤细胞以及淋巴瘤细胞株CA46细胞中NCL表达升高,提示细胞对药物敏感度降低,NCL可能通过影响TK1表达参与淋巴瘤细胞增殖的调控,从而影响淋巴瘤细胞对药物的敏感性。

不同寄主红花桑寄生总黄酮提取物抗白血病细胞株HL-60的研究

目的:比较不同寄主来源的红花桑寄生总黄酮提取物体外抗肿瘤效果。方法:用80%乙醇提取、聚酰胺柱层析分离了从寄主分别为夹竹桃、桑树、无患子和桂花的红花桑寄生总黄酮,硝酸铝显色法测定其中的黄酮含量;MTT法分析不同寄主来源的红花桑寄生总黄酮提取物体外对人白血病细胞株HL-60细胞增殖抑制效果;AO/EB荧光染色观察和DNA片段化分析检测了寄主为夹竹桃的红花桑寄生总黄酮提取物对HL-60细胞凋亡的诱导,流式细胞术分析细胞凋亡率和细胞周期分布。结果:寄主为夹竹桃的红花桑寄生总黄酮提取物对HL-60细胞增殖有很强的抑制作用,作用48 h的IC50值为0.60 mg.L-1,桑树寄生的效果次之,IC50值为2.49 mg.L-1,无患子寄生IC50值为83.89 mg.L-1,桂花寄生在检测的浓度范围内基本无抑制作用;夹竹桃寄生总黄酮提取物通过阻滞HL-60细胞周期于G0-G1期和诱导细胞凋亡而发挥抗肿瘤作用。结论:红花桑寄生总黄酮提取物抗肿瘤效果与其寄主相关,以寄主为夹竹桃者效果最好。

eEF1A1回复表达对敲除eEF1A1基因的Jurkat细胞增殖、凋亡的影响及机制研究

本文探讨真核翻译延伸因子1A1(eEF1A1)回复表达对eEF1A1基因敲除人急性T淋巴细胞白血病(T-ALL)Jurkat细胞增殖、凋亡的影响及其作用机制。构建表达的eEF1A1慢病毒并感染eEF1A1基因敲除的Jurkat细胞,应用RT-PCR和Western blot分别检测细胞eEF1A1 mRNA和蛋白的表达;应用MTT法、Annexin V-APC标记法、DNA倍体法分别检测细胞增殖、细胞凋亡和细胞周期,Western blot法检测细胞PI3K/Akt信号通路相关信号分子的表达。结果表明,构建的eEF1A1表达慢病毒使基因敲除Jurkat细胞的eEF1A1表达明显回复。与阴性对照组相比,eEF1A1表达组Jurkat细胞增殖能力明显增强,凋亡明显减少,G0/G1期细胞比例明显减少;随着S期、G2/M期细胞比例增多,pAk、NF-κB、p-NF-κB、mTOR、p-mTOR蛋白的表达明显升高。结论:eEF1A1在T-ALL细胞中可能具有潜在的致癌作用,它的表达可有效促进Jurkat细胞的增殖并抑制凋亡,其机制可能与上调PI3K/Akt/NF-κB和PI3K/Akt/mTOR信号通路有关。

大黄素对Jurkat细胞凋亡的诱导作用及其机制的初步研究

本研究探讨中药大黄素(emodin)对T淋巴细胞白血病Jurkat细胞株增殖、凋亡的影响及其作用机制。应用MTT法检测细胞增殖能力;DNA片段化检测和末端缺口原位标记(TUNEL)法分析细胞凋亡;蛋白印迹法(Western blot)检测BCL-2、C-MYC、hTERT、caspase蛋白前体procaspase-8、procaspase-9、procaspase-3和caspase-3剪切片段以及PARP等蛋白的表达水平。结果表明:大黄素能明显抑制Jurkat细胞增殖,对Jurkat细胞的半数抑制浓度(IC50)约为20μmol/L。DNA片段化的检出及TUNEL凋亡细胞的检出证实了大黄素能有效诱导Jurkat细胞凋亡,细胞凋亡率在一定的药物浓度范围内(0-80μmol/L)与药物作用浓度和作用时间呈正相关。Western blot检测结果显示,BCL-2、C-MYC和hTERT蛋白在大黄素作用后表达水平下降,caspase家族的蛋白前体procaspase-3、8、9表达均下降,而激活后的活性片段caspase-3则表达上调。结论:大黄素能有效抑制Jurkat细胞增殖,诱导其凋亡。其机制可能与下调BCL-2、C-MYC、hTERT等凋亡相关蛋白表达,激活caspase家族特别是caspase-3活性片段蛋白表达有关。

两性霉素B治疗49例血液恶性肿瘤患者深部真菌感染分析

目的观察两性霉素B对血液恶性肿瘤患者深部真菌感染的临床疗效及安全性。方法49例血液恶性肿瘤患者合并真菌感染使用两性霉素B,剂量为每日0．5～1 mg/kg,用药10～61 d,中位数26 d,观察用药前及用药后1周患者症状、体征,血电解质及肝、肾功能的变化。结果两性霉素B临床总有效率为56．9%,真菌清除率42．4%,各种不良反应发生率在3．6%～24．5%,常见的不良反应依次为两性霉素B输注的畏寒、寒战、发热等全身反应,低钾血症,消化道反应,肾功能损害,肝功能损害,静脉炎。结论两性霉素B抗菌谱广,抗菌作用强,虽不良反应较为多见,只要合理用药及不良反应处理得当,大多数患者仍可耐受。

红花桑寄生总黄酮提取物增强多柔比星抗白血病效果及其相关机制研究

以人急性髓系白血病细胞株HL-60裸鼠移植瘤为模型,研究了一种寄主为夹竹桃的红花桑寄生总黄酮提取物(Nispex)与多柔比星联用的抗白血病效果及其可能的作用机制。以抑瘤率为指标,采用药物相互作用指数(CDI)来评价药物联合作用疗效。10mg/kg/d Nispex腹腔给药(连续给药9d)与15mg/kg多柔比星(尾静脉一次性给药,下同)联用对HL-60移植瘤有较好的抑制作用,抑瘤率89%,CDI为0.43(P<0.01);与10mg/kg多柔比星联用,抑瘤率为57%,CDI值为0.80(P<0.05)。说明Nispex与多柔比星有较好的协同抗白血病作用。采用EMSA、Western blot和免疫荧光染色分析了Nispex对HL-60细胞中NF-κB的影响,结果表明Nispex可降低了NF-κB的DNA结合活性,下调NF-κBp65蛋白的表达,也抑制NF-κB的核转移,说明Nispex是一种天然NF-κB抑制剂。ELISA分析表明Nispex可下调HL-60细胞分泌VEGF。

红花桑寄生总黄酮提取物诱导淋巴瘤细胞株CA46凋亡及其分子机制研究

研究了一种寄主为夹竹桃的红花桑寄生总黄酮提取物(Nispex)对人Burkitt淋巴瘤细胞株CA46的抗肿瘤作用,探讨了其抗肿瘤作用的分子机制。应用MTT法研究Nispex对CA46细胞增殖的抑制效果,细胞集落培养法观察Nispex对CA46中增殖细胞群的影响。采用AO/EB荧光染色、TUNEL分析、DNA凝胶电泳分析以及AnnexinV流式细胞术检测细胞凋亡,Western blot检测Nispex对CA46细胞中NF-κBp65、Bcl-2、Bax、Caspase-3和PARP等蛋白表达的影响。结果表明,Nispex显著抑制CA46细胞增殖和诱导CA46细胞凋亡,作用48h的IC50值为1.72μg/mL,细胞凋亡率与药物浓度正相关。Nispex能有效上调CA46细胞Bax、Caspase-3蛋白表达,下调NF-κBp65、Bcl-2、PARP蛋白表达。Nispex诱导CA46细胞凋亡可能是通过对NF-κB信号通路的抑制来实现的。

反义寡核苷酸对K562细胞的抑制作用及诱导细胞凋亡的研究

目的 :研究bcr abl硫代磷酸反义寡脱氧核糖核酸 (Aspo)作用于K5 62细胞后 ,对细胞mRNA、蛋白水平的影响 ,以及诱导细胞凋亡情况。方法 :Aspo与K5 62细胞共培养后 ,用流式细胞仪检测P2 10蛋白表达及细胞凋亡率 ,RT PCR半定量检测bcr ablmRNA表达情况 ,电镜观察细胞凋亡的形态学改变。结果 :K5 62细胞经浓度大于 5 μmol Lbcr ablAspo处理 2 4h ,流式细胞仪检测细胞P2 10蛋白表达下调甚至完全受抑制 ,10 μmol Lbcr ablAspo作用 48h ,细胞bcr ablmRNA下降 45 %左右 ,当细胞初始浓度为 1× 10 4 ml时 ,Aspo作用 12 0h细胞凋亡率 2 0 %～ 30 % ,当细胞数增加至 1× 10 5 ml时 ,Aspo作用 48h即可使 30 %细胞发生凋亡 ,电镜下观察到典型凋亡细胞形态学改变。结论 :bcr abl反义核酸对K5 62细胞mRNA水平具有抑制作用 。

血液病并呼吸道侵袭性真菌感染的临床分析

目的:探讨血液病患者并发呼吸道侵袭性真菌感染(IFI)的临床特点和不同分层诊断的真菌感染的疗效。方法:回顾性分析了我科从2005年4月-2008年3月期间住院的血液病患者85例发生真菌感染的临床表现、肺部CT影像,以及应用氟康唑、伊曲康唑、两性霉素B脂质体对不同分层诊断的抗真菌疗效。结果:①呼吸道IFI肺部CT影像学主要特征有结节样/球状阴影和靠胸膜的楔形阴影等;②微生物检测结果念珠菌属占44.7%,霉菌占12.9%,未检出真菌占42·4%;③IFI初始治疗中伊曲康唑组有效(痊愈加好转)率(67.7%)好于氟康唑组(36.0%),差异有统计学意义,而与两性霉素B脂质体组比较差异无统计学意义;④氟康唑初始治疗无效改用伊曲康唑或两性霉素B脂质体治疗患者16例,治疗有效率分别是66.7%和75%,而伊曲康唑无效改用两性霉素B脂质体有效率为30%,2者差异有统计学意义;⑤分层治疗中,拟诊治疗、抢先治疗与确诊治疗各组间有效率比较差异无统计学意义;⑥影响抗真菌治疗效果的因素分析中主要是与原发病是否进展的相关性有统计学意义,而与年龄、粒细胞缺乏时间、抗真菌治疗时间的相关性无统计学意义。结论:①胸部CT影像学对IFI诊断有重要价值,而痰检真菌学诊断价值不大;②伊曲康唑注射液可以优先选择用于呼吸道IFI经验性治疗。

应用蛋白质组学技术研究HL-60细胞及其耐阿霉素细胞株的蛋白表达差异

目的比较人髓系白血病细胞株HL-60细胞和耐阿霉素的细胞(HL-60/ADR)的整体蛋白表达谱,以期获得人髓系白血病细胞的耐药相关蛋白。方法提取HL-60细胞和HL-60/ADR细胞的总蛋白,采用荧光差异显示的双向凝胶电泳技术(DIGE)比较分析差异表达蛋白;经胶内酶解,MALDI-TOF/TOF质谱分析,搜索蛋白质数据库,获得差异蛋白质的信息。结果经过初步筛选和质谱分析共获得16个具有统计学意义的表达差异蛋白点,其中13个在HL-60细胞中表达上调,3个表达下调。主要是代谢酶类、DNA修复、信号转导相关蛋白、细胞周期调节蛋白和细胞增殖与凋亡等相关的蛋白。结论根据人髓系白血病细胞株HL-60细胞和HL-60/ADR细胞的差异蛋白表达谱比较,筛选出耐药相关蛋白。

长链非编码RNA MALAT-1在肿瘤中的作用及其机制研究进展

近年来,长链非编码RNA(long noncoding RNA,lnc RNA)的研究逐渐成为热点,已证实某些lnc RNA的异常表达与肿瘤的发生、发展关系密切。其中,肺腺癌转移相关转录本1(metastasis-associated lung adenocarcinoma transcript 1,MALAT-1)更是在多种肿瘤,尤其是肺癌的研究中受到关注。了解MALAT-1在调节肿瘤细胞生命活动中的具体作用十分必要。本文就MALAT-1的分子结构、生物学功能、在调节肿瘤细胞增殖、转移、周期及凋亡等方面中的作用和机制作一综述。同时对MALAT-1参与的表观遗传调控进行适当阐述,希望能为今后肿瘤的预防和治疗提供新的思路。

寡核苷酸的摄取与血液肿瘤细胞种类和增殖活性的关系

目的 探讨血液肿瘤细胞摄取寡核苷酸与其种类和活性的关系。方法 流式细胞仪测定细胞内的平均荧光强度。结果 经过 0 60 μmol·L-1 荧光素FITC标记的G31 39作用 4h后 ,血液系统肿瘤患者外周血及骨髓单个核细胞对G31 39的摄取能力明显高于正常人 ;不同来源的血液肿瘤细胞株摄取G31 39的能力不同 ,单核细胞、B淋巴细胞和髓系粒细胞来源的白血病细胞的摄取能力明显高于T淋巴细胞来源的白血病细胞 ;经过全反式维甲酸作用的HL60细胞的增殖活性明显受到抑制 ,同时细胞摄取G31 39的能力明显下降。结论 血液肿瘤细胞具有摄取寡核苷酸的能力 。

烷化溶血磷脂ET-18-OCH3对K562细胞作用的研究

为研究烷化溶血磷脂ET-18-OCH3(ALP)的抗白血病效果,本文以K562细胞为研究对象,通过台盼蓝拒染法测定ALP作用后K562细胞的生长抑制率和生长曲线;甲基纤维素半固体培养法测定克隆原细胞的存活率;流式细胞仪检测K562细胞P210蛋白表达;RT-PCR半定量法测定细胞的bcr-abl mRAN;采用流式细胞仪进行DNA分析以及电镜观察细胞形态学改变。结果显示,K562细胞经ALP处理后细胞生长明显受抑制,呈作用时间和剂量的依赖性,IC_(50)为31.6(24),22.3(48h),14.8(72h)μg/ml;细胞增殖速度显著降低,克隆原细胞存活曲线呈指数型,而正常对照组细胞的CFU-GM则未受影响;ALP还可使K562细胞P210及bcr-abl mRNA水平下调,并有诱导细胞凋亡的作用。说明ALP对K562细胞生长具有明显抑制作用,并有诱导细胞凋亡作用,提示ALP具有一定的抗白血病效应。

自体造血干细胞移植治疗恶性血液病

目的 评价自体造血干细胞移植 (AHSCT)治疗恶性血液病的疗效。 方法 用 AHSCT治疗白血病及恶性淋巴瘤患者共 5 8例 ,年龄 31.9± 10 .5 (14～ 5 8)岁。其中急性非淋巴细胞白血病 (ANL L ) 30例 (CR1 2 4例 ,CR2 5例 ,CR31例 ) ,急性淋巴细胞白血病 (AL L ) 18例 (CR1 13例 ,CR2 3例 ,CR32例 ) ,慢性粒细胞白血病 (CML ) 3例 (均获血液学缓解 ) ,恶性淋巴瘤 7例 (CR4例 ,PR3例 )。预处理化疗方案选用以下药物中任意两种或三种联合 :阿糖胞苷 3～ 4g/ m2 ,环磷酰胺 4～ 6 g/ m2 ,鬼臼乙叉苷 (VP- 16 ) 0 .5～ 1.0 g/ m2 。除 5例联合全身骨髓照射 (剂量为7～ 8Gy) ,其余均单用化疗。 结果 所有患者移植后均重建造血 ,移植相关死亡 1例 (1.72 % )。ANL L、AL L CR1期移植者 3年无病生存率分别为 5 2 .4%± 4.2 %和 46 .1%± 3.5 % ,复发率分别为 37.7%± 4.5 %和 40 .5 %±6 .7%。 10例 CML 和恶性淋巴瘤患者中 ,除 1例 期恶性淋巴瘤患者复发 ,余均获持续完全缓解。 结论 为降低白血病和恶性淋巴瘤的复发率 ,提高患者的无病生存期 ,无造血干细胞供者的 CR1 期白血病及恶性淋巴瘤患者应积极行 AHSCT。

ZnPcS_2P_2在K562和HL-60细胞中的定位研究

目的:探讨ZnPcS2P2在K562细胞,HL-60细胞亚细胞结构中的精确定位,揭示光动力学疗法(photody-namic therapy,PDT)的作用机制。方法:将K562细胞,HL-60细胞与ZnPcS2P2共同孵育5 h。应用激光扫描共聚焦显微成像系统,选择特异性细胞器荧光探针(线粒体探针若丹明Rodanmine123、溶酶体探针LysoTrackerDND-26、内质网探针Dioc6(3)采用波形比较法对光敏剂进行亚细胞定位。结果:ZnPcS2P2在K562细胞,HL-60细胞中发出的荧光与负载的Rodanmine123、Lyso-TracKer DND-26、Dioc6(3)均有部分重叠,波形均有相似之处。ZnPc-S2P2在线粒体、溶酶体、内质网均有分布。结论:线粒体是ZnPcS2P2介导的PDT(ZnPcS2P2-PDT)光损伤的主要靶点,溶酶体、内质网也是ZnPcS2P2-PDT光损伤的靶点。

Hippo通路在肿瘤发生中的研究进展

Hippo信号通路是近年来在果蝇属中研究发现的,它由核心成分、上游及下游成分组成,是一条非常保守的参与调控器官大小及细胞周期和凋亡调节的通路,此信号通路由多种抑癌基因及一种候选癌基因组成。研究表明,此通路的不能激活或异常表达在动物试验中参与多种疾病的发生,进而发现其与人类多种肿瘤的发生密切相关,主要与其抑癌基因的低表达相关。

抑制性消减杂交法研究初治和复发急性淋巴细胞白血病基因的差异表达

目的 比较初治与复发急性淋巴细胞白血病基因的差异表达。 方法 应用抑制性消减杂交法(SSH)成功地构建消减效率高的一对来自同一个体复发与初治时的急性淋巴细胞白血病基因差异表达的 c DNA文库 ,对含有插入片段的质粒 DNA进行测序分析 ,将差异表达的表达序列标签 (EST)与 Gen Bank核酸数据库中的已知序列进行同源性比较。 结果 在挑选 80个白色克隆中有 70个含有 (4 0 0～ 10 0 0 bp)长短不等的插入片段 ,测序结果经检索显示 2 0个片段为未知序列 EST,提示这些片段可能来自 2 0个新基因 ,其中 7个 EST片段已在Gen Bank db EST数据库注册登记。 结论 复发急性淋巴细胞白血病消减文库的建立为进一步克隆、分离、鉴定急淋白血病复发相关基因奠定了良好的基础。

自体树突状细胞用于慢性粒细胞白血病骨髓净化的初步研究

目的 考察慢性粒细胞白血病 (CML)树突状细胞 (DC)刺激自体骨髓 T细胞 ,清除白血病细胞的作用。 方法 采集 3例 CML 病人 (2例慢性期和 1例急变期 )外周血 ,分离单个核细胞 (PBMNC) ,经塑料贴壁后在含自体血浆、重组人白介素 4(rh IL- 4)、重组人粒 -单集落刺激因子 (rh GM- CSF)和重组人肿瘤坏死因子 (rh TNFα)的 RPMI- 16 40培养液 ,37℃ ,5 % CO2 孵箱培养 10天 ,或用免疫磁珠从 PBMNC分离 DC,在含自体血浆、rh GM-CSF和 rh TNFα的 RPMI16 40培养液培养 3天 ,收获的细胞即 DC加到含 rh IL- 2的 Dexter骨髓长期培养体系 ,置37℃ ,5 % CO2 孵箱培养 7天 ,观察培养前后骨髓细胞的免疫表型和 P2 10阳性细胞比例。 结果 从 CML 病人外周血获得的 DC大多数表达 P2 10。在含 rh IL- 2的 Dexter体系加入 DC能进一步增加体系中的 T细胞数。在 2例慢性期病人体系中的 P2 10阳性细胞减少 ,但在急性期病例 ,体系中 P2 10细胞明显增加。 结论 CML 病人的 DC表达 P2 10 ,能刺激自体骨髓中 T细胞增生 ,在慢性期病人 ,这些自体 DC活化的骨髓