不同干预治疗对新诊断2型糖尿病患者胰岛β细胞功能的改善作用

目的探讨短期不同干预治疗对新诊断2型糖尿病患者的胰岛β细胞功能和长期血糖控制的影响。方法新诊断的2型糖尿病患者22例,随机分为单纯饮食运动治疗(对照组)5例、胰岛素泵治疗组(CSII组)6例、胰岛素多次注射治疗组(MDI组)5例及口服降糖药治疗组(OHA组)6例。短期治疗2周,采用自身前后对照,观察胰岛β细胞功能的变化及其影响因素,随访短期强化血糖控制治疗对长期血糖控制的影响。结果与对照组比较,CSII组、MDI组和OHA组治疗前后静脉葡萄糖试验中葡萄糖曲线下面积、胰岛素抵抗指数明显下降,胰岛素第1时相分泌功能、β细胞功能指数明显升高(P<0.05)。2例CSII组患者仅采用饮食控制(1例1年,1例2年)、1例MDI组患者2年未使用任何降糖药物即可控制血糖。结论短期强化血糖控制可以显著改善胰岛β细胞功能,减轻胰岛素抵抗,使患者回到2型糖尿病自然病程的更早期阶段。强化胰岛素治疗组得到的缓解时间比OHA组更长。

吡格列酮对游离脂肪酸介导的β细胞胰岛素分泌的双向调节作用研究

目的探讨吡格列酮对游离脂肪酸(FFA)作用不同时间介导的β细胞胰岛素分泌异常的干预效果。方法βTC3细胞分为对照组(Con组)、FFA干预组(FFA组)和FFA加吡格列酮共同干预组(FFA+Pio组),分别干预1、72h,放射免疫法检测不同糖浓度刺激的胰岛素分泌,巢式RT-PCR检测FFA受体1(FFA1R)mRNA的表达。结果干预1h,与Con组比较,FFA组低、中、高糖刺激的胰岛素分泌升高(分别为23.8±1.6 vs 20.0±2.0,28.7±1.4 vs 24.5±1.5,51.0±3.0 vs 42.6±3.4,P<0.05),FFA+Pio组与Con组相比无统计学差异,三组FFA1R表达均无差异。干预72h,FFA组低、中、高糖刺激的胰岛素分泌(分别为20.0±2.0,24.5±1.5,42.6±3.4)和FFA1R表达均较Con组低(P<0.05),FFA+Pio组的胰岛素分泌和FFA1R表达介于FFA组与Con组之间。结论吡格列酮对FFA作用不同时间介导的胰岛素分泌损害具有双向调节作用,其长时间作用可能与调节FFA1R表达有关。

Exendin-4对抵抗素介导的βTC6细胞PDX-1表达损害及细胞凋亡的干预作用

目的研究Exendin-4是否能拮抗抵抗素对胰岛βTC6细胞的毒性作用。方法βTC6细胞分为对照组、抵抗素（200ng/mL）干预组和Exendin-4干预组（浓度5、10、50nmol/L＋抵抗素200ng/mL）,分别干预6、12、24h。CCK-8法测定细胞增殖能力,DNA Ladder检测细胞凋亡,RT-PCR检测PDX-1基因表达,放射免疫法测定胰岛素分泌。结果 （1）与抵抗素干预组比较,Exendin-4低浓度（5nmol/L）和短时间（6h）未改善βTC6细胞的胰岛素分泌能力和增殖能力（P〉0.05）,且未减轻细胞凋亡;适宜浓度（10∽50nmol/L）及干预时间的延长（12、24h）均明显改善βTC6细胞的胰岛素分泌能力和增殖能力（P〈0.05）,10nmol/L和50nmol/L浓度组间差别无统计学意义（P〉0.05）,延长至24h时2种浓度组均可明显减少细胞凋亡;（2）Exendin-4预干预6h,各组βTC6细胞的PDX-1表达未见明显改变;当干预时间延长,各浓度组的PDX-1表达逐渐增加,10nmol/L和50nmol/L浓度组间差别无统计学意义（P〉0.05）。结论在一定干预时间和浓度范围内,Exendin-4可增加抵抗素作用下βTC6细胞PDX-1mRNA的表达,增加胰岛素分泌和增殖能力,减轻细胞凋亡。

吡格列酮对游离脂肪酸介导的βTc3细胞凋亡的干预作用

目的研究吡格列酮对游离脂肪酸(FFA)诱导的小鼠胰岛βTc3细胞凋亡的影响及其作用机制。方法以βTc3细胞为研究对象,分为对照组及FFA组(0.25,0.5,1.0mmol/L)。检测不同浓度FFA干预后βTc3细胞的增殖抑制率、细胞周期、细胞凋亡率;检测吡格列酮对FFA诱导的βTc3细胞凋亡的干预作用。结果FFA干预后的βTc3细胞增殖抑制率随FFA作用时间延长、浓度增加而进行性增加。各浓度FFA干预24h后βTc3细胞周期于G1/S检测点明显阻滞,凋亡细胞比例增加。吡格列酮干预FFA诱导的βTc3细胞后24h,βTc3细胞周期阻滞减少,凋亡细胞比例明显减少。结论FFA水平异常不利于胰岛βTc3细胞生存,并可诱导βTc3细胞凋亡;吡格列酮有助于维护在FFA诱导下的胰岛βTc3细胞的生存能力,并避免或减少其凋亡。

游离脂肪酸对胰岛素瘤细胞系βTc6细胞葡萄糖激酶和葡萄糖转运蛋白2表达及胰岛素分泌功能的影响

目的 探讨游离脂肪酸（FFA）对小鼠胰岛素瘤细胞系βTc6细胞葡萄糖激酶（GK）和葡萄糖转运蛋白2（GLUT2）的表达及相应的胰岛素分泌功能变化的影响.方法用不同浓度FFA（0.25、0.50、1.00 mmol/L）干预βTc6细胞24 h,应用逆转录（RT）-PCR法和Western Blot法检测GK和GLUT2表达情况,并观察细胞形态及葡萄糖刺激的胰岛素分泌功能（GSIS）的变化.应用单因素方差分析进行统计学分析.结果 （1）经过0.25 mmol/L FFA 作用24 h后,未见细胞形态学及GSIS 明显变化,细胞内GK和GLUT2 mRNA及其蛋白的表达水平与空白对照组（GK对照组0.80±0.12,GLUT2对照组0.72±0.11）比较亦未发生明显改变（均P〉0.05）;（2）0.50～1.00 mmol/L FFA 作用24 h之后,βTc6细胞内可见脂滴积聚,细胞团有崩解的趋势,随着浓度的增大,上述现象愈加明显.细胞GK（GKFFA0.500.32±0.05,GKFFA1.000.24±0.03）和GLUT2 （GLUT2FFA0.500.28±0.04,GLUT2FFA1.000.21±0.03）mRNA表达逐渐减低（均P〈0.05）,相应的蛋白表达水平亦逐步降低,胰岛素分泌也逐渐减少（均P〈0.05）.结论 低浓度FFA对胰岛β细胞生存和GK、GLUT2表达以及GSIS没有明显影响,但较高浓度的FFA将损害β细胞,并抑制GK和GLUT2表达以及GSIS.

游离脂肪酸对βTc6细胞PDX-1表达及胰岛素分泌能力的影响

目的探讨游离脂肪酸对胰岛β细胞胰-十二指肠同源盒因子-1（PDX-1）的表达及相应的β细胞增殖活性和胰岛素分泌功能变化的影响。方法0．25—1．00mmol／L游离脂肪酸干预小鼠胰岛素瘤细胞系βTc6细胞24～48h，应用RT—PCR法检测转录因子PDX-1mRNA表达，四甲基偶氮唑盐法检测细胞的增殖活性，放射免疫法检测葡萄糖刺激的胰岛素分泌水平，并观察细胞形态变化。结果经0．25～1．00mmol／L游离脂肪酸干预24h，βTc6细胞PDX-1mRNA的转录逐步增加，但随着干预时间进一步延长至48h，PDX-1mRNA的转录逐渐回落，特别是用1．00mmol／L游离脂肪酸干预48h后，βTc6细胞PDX-1mRNA的表达低于空白对照组。经过0．50～1．00mmol／L游离脂肪酸24—48h的干预之后，βTc6细胞形态学上呈现凋亡趋势，细胞增殖活力以及葡萄糖刺激的胰岛素分泌功能降低，而0．25mmoL／L游离脂肪酸24h的干预未见此类现象。结论短时间低浓度的游离脂肪酸干预可介导β细胞转录因子PDX-1的表达上调，对β细胞的增殖活性和胰岛素分泌能力无明显影响；而长时间高浓度的游离脂肪酸干预则将导致PDX-1mRNA的表达下调，并使β细胞的增殖活性和胰岛素分泌能力受损。

游离脂肪酸介导胰岛βTC-3细胞膜G蛋白受体40表达对胰岛素分泌的影响及吡格列酮的干预作用

目的 探讨游离脂肪酸(FFAs)介导的胰岛βTC-3细胞膜G蛋白受体40(GPR40)表达改变对胰岛素分泌功能的影响,以及吡格列酮对上述FFAs作用干预的效果.方法 体外培养βTC-3细胞,分为对照组、FFAs干预组、吡格列酮干预组和FFAs+吡格列酮共同干预组.巢式逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)法检测GPR40 mRNA表达的变化,双辛丁酸(BCA)法进行总蛋白定量,放射免疫法检测细胞胰岛素分泌.应用单因素方差分析和双变量相关分析进行统计学分析.结果 (1)FFAs干预12 h,各浓度FFAs组末见βTC-3细胞的形态和GPR40表达发生明显变化;随着干预时间增加,细胞形态逐渐出现变异,各浓度FFAs干预组GPR40表达下调(F24h=5.475,F48h=25.923,均P<0.05).(2)FFAs干预12 h,各浓度FFAs干预组βTC-3细胞的基础胰岛素(BIS)、葡萄糖刺激的胰岛素分泌(GSIS)无变化;干预时间延长至24、48 h,则均呈下降趋势(F24h BIS=6.876,F48h BIS=12.421,F24h GSIS=27.767,F48h GSIS=36.382,均P<0.05).(3)随着吡格列酮的干预浓度在0.1～10 μmol/L范围内增加,FFAs作用下的βTC-3细胞GPR40 mRNA表达和胰岛素分泌水平逐渐改善(FGPR40=14.303,FINS=56.618,均P<0.05).结论 高水平FFAs可导致BTC-3细胞GPR40表达下调,损害细胞胰岛素分泌功能,吡格列酮对此具有拈抗作用,GPR40表达的差异对胰岛素分泌功能起着重要作用.