γ-synuclein基因真核表达载体的构建及其对结肠癌细胞SW1116体外侵袭转移潜能的影响

目的构建针对γ-synuclein基因的真核表达载体并观察其对结肠癌细胞sw1116体外侵袭及与人脐静脉内皮细胞（HUVEC）黏附能力的影响。方法从结肠癌细胞系HT29提取总RNA，经RT．PCR获得γ-synucleincDNA全长片段，经过酶切连接等反应定向克隆至真核绿色荧光蛋白表达载体pEGFP-C1上，以脂质体转染的方法将重组质粒转染至结肠癌细胞系SW1116，经G418筛选出稳定转染的细胞株。采用Transwell小室法检测细胞体外侵袭能力。将细胞接种于铺有HUVEC的96孔板中，酶标仪读取荧光强度来表示黏附细胞的相对数。结果成功构建pEGFP-γ-synuclein真核表达载体，经过筛选后可在SW1116细胞中稳定表达，且能在体外翻译出GFP-γ-synuclein融合蛋白质。转染γ-synuclein后，穿过Matrigel胶及Transwell小室膜的细胞数明显增加（198．4±20．7比98．8±13．2，P〈0．05），与HUVEC黏附的细胞数（荧光强度）亦显著增加（3．08±0．36比1．22±0．21，P〈0．05）。结论γ-synuclein可显著增强结肠癌细胞SW1116体外侵袭转移潜能。