过表达基质细胞衍生因子1基因促进骨髓间充质干细胞增殖和迁移

背景:基质细胞衍生因子1(stromal cell derived factor,SDF-1)/CXCR4轴不仅能够促进骨髓间充质干细胞向损伤组织迁移,而且具有抑制骨髓间充质干细胞凋亡、增加骨髓间充质干细胞存活率及增殖活性等作用。目的:建立慢病毒介导的稳定过表达SDF-1α的骨髓间充质干细胞系,在体外观察其对骨髓间充质干细胞增殖和迁移的影响。方法:构建过表达SDF-1α重组慢病毒载体(pNL-SDF-1α-IRES_2-EGFP),并以空载体质粒pNL-IRES_2-EGFP、基因沉默质粒GV-118-SDF-1α-siRNA作为实验对照,分别转染293T细胞和骨髓间充质干细胞,建立稳定过表达SDF-1α的骨髓间充质干细胞系:SDF-1α-BMSCs组、null-BMSCs组和siRNA-BMSCs组;采用RT-PCR、Western Blot方法检测SDF-1αmRNA和蛋白的表达水平;MTT法检测骨髓间充质干细胞的增殖能力;Transwell迁移实验检测SDF-1α对骨髓间充质干细胞迁移能力的影响。结果与结论:(1)成功构建pNL-SDF-1α-IRES_2-EGFP质粒,经测序结果表明pNL-SDF-1α-IRES_2-EGFP重组质粒构建成功;(2)慢病毒转染48 h后可见293T细胞和各组骨髓间充质干细胞强烈表达EGFP;(3)SDF-1α-BMSCs组高效表达SDF-1α,siRNA-BMSCs组SDF-1α表达明显被抑制;(4)SDF-1α-BMSCs组的细胞增殖能力增强,SDF-1α可明显促进骨髓间充质干细胞的跨膜迁移。在抗SDF-1α多抗作用后各组细胞迁移指数明显下降;(5)结果可见,慢病毒载体可介导外源性基因SDF-1α在大鼠骨髓间充质干细胞中高效表达,并促进骨髓间充质干细胞的增殖和迁移。

大鼠骶副交感核的形态学测量和三维重建

目的:研究大鼠盆内脏神经的初级中枢骶副交感核(SPN)的形态学特征及空间三维立体结构,为准确定位SPN并探索其功能提供形态学依据,方法:经背侧入路显露S D大鼠的盆内脏神经,在其中枢断端采用Alexa594结合的霍乱毒素b(CTb)逆行示踪。将标记后的脊髓L_(6)~S_(1)节段分别进行连续的水平面和矢状面切片。荧光显微镜下观察CTb标记的神经元的形态、位置和结构。通过三维重建软件,从切片图像序列中模拟出SPN的三维模型。结果:CTb逆行标记的盆内脏神经的节前神经元主要分布于脊髓L_(6)~S_(1)节段的中间带外侧。这些神经元可分为3个亚群:外侧带位于SPN的外下部,大多是纺锤形双极神经元,树突沿灰质外侧缘指向前角方向;背侧带位于SPN的背上方内部,放射状分布的神经元的树突多沿后联合方向水平延展;中间带位于前两者之间,神经元的形态多样,以多极神经元为主。三维重建显示SPN呈“串珠样”结构。定位注射的理想的进针角度是与水平线60°,进针深度距离白质表面约为220~245μm。结论:SPN的定位和测量,为进一步研究其神经生理功能提供形态学方面的基础数据;三维重建可以从各个角度显示出SPN的结构特点,也可为准确定位注射提供参数。

慢性胰腺炎诱发疼痛的机制

慢性胰腺炎(CP)最突出的临床症状是反复发作的腹部疼痛,疼痛严重程度影响患者的预后与转归。目前CP疼痛的发生机制尙不明确,临床缺乏针对CP疼痛的有效治疗。有越来越多的证据表明CP疼痛是神经病理性痛,接受胰腺信息传导的中枢神经系统的结构发生的可塑性改变在CP疼痛的维持中发挥重要的作用。本文从CP的胰腺自身、外周敏化和中枢敏化等方面阐述CP疼痛相关机制的研究进展,以提高我们对于CP疼痛的认知和治疗水平。

骨髓基质干细胞旁分泌作用促进大鼠损伤脊髓的血管新生

目的 观察移植骨髓基质干细胞（BMSCs）旁分泌作用对大鼠损伤脊髓血管新生的促进作用. 方法 用密度梯度离心及贴壁法相结合的方法分离、纯化、培养大鼠BMSCs,应用流式细胞技术检测BMSCs表面细胞标志CD34、CD45、CD29、CD90;根据改良Allen法制备大鼠脊髓损伤模型,54只清洁型SD大鼠分为假手术组、对照组和实验组（n=1 8）,假手术组和实验组经尾静脉注射BMSCs,对照组经尾静脉注射PBS.移植BMSCs后l、7、14d应用免疫荧光标记观察羧基荧光素乙酰乙酸标记的BMSCs表达血管内皮细胞生长因子（VEGF）和碱性成纤维细胞生长因子（bFGF）的情况;应用免疫组化检测移植BMSCs对损伤脊髓第Ⅷ因子相关抗原表达的影响;应用逆转录-聚合酶链反应法检测移植BMSCs对损伤脊髓VEGF和bFGF mRNA表达的影响. 结果 激光共聚焦显微镜显示移植的BMSCs可在脊髓损伤处及损伤附近区域聚集、存活且表达VEGF和bFGF.实验组大鼠脊髓内第Ⅷ因子相关抗原的灰度值、微血管密度以及VEGF mRNA和bFGF mRNA的表达量明显高于对照组和假手术组,差异均有统计学意义（P＜0.05）;而且实验组14d微血管密度、VEGF mRNA、bFGF mRNA的表达量较1、7d明显升高,差异均有统计学意义（P＜0.05）. 结论 BMSCs在损伤脊髓内可以通过旁分泌VEGF和bFGF增加微血管密度,促进损伤脊髓的结构和功能恢复.