基于网络药理学和分子对接技术探讨蛇葡萄素抗肿瘤作用机制

目的利用网络药理学和分子对接技术探讨蛇葡萄素抗肿瘤的潜在分子作用机制。方法借助PharmMapper服务器预测并筛选蛇葡萄素的潜在靶蛋白,建立靶蛋白相互作用网络,并对潜在靶标进行KEGG通路富集分析,获得富集在癌症相关通路的靶标,利用Cytoscape软件进一步构建蛇葡萄素的“靶点-通路”相互关联网络,筛选关键靶点,并用AutoDock vina将蛇葡萄素与关键靶标进行分子对接验证。结果从PharmMapper服务器预测并筛选得到了蛇葡萄素的199个人源靶蛋白,KEGG通路富集和网络分析结果显示,蛇葡萄素主要作用于前列腺癌、非小细胞肺癌、肝细胞癌、乳腺癌、黑色素瘤、膀胱癌、子宫内膜癌等23条癌症通路中的HRAS、PIK3R1、AKT1、EGFR、BRAF、ME T等56个靶蛋白,从而发挥抗肿瘤作用。结论蛇葡萄素是一个治疗肿瘤的潜在候选药物,其可能通过多靶点、多通路协同作用的机制发挥抗肿瘤作用。

蛇葡萄素对人前列腺癌DU145细胞增殖、迁移和侵袭的影响

目的:探讨蛇葡萄素(AMP)对人前列腺癌DU145细胞增殖、迁移和侵袭的影响,研究其对转化生长因子β(TGF-β)诱导的上皮间质转化(EMT)模型的作用。方法:用不同浓度的AMP处理DU145细胞,采用CCK-8法和克隆形成实验检测细胞增殖情况;Transwell法检测细胞的迁移和侵袭能力;细胞免疫荧光实验表征不同浓度TGF-β处理后细胞内E-cadherin和Vimentin表达情况,确定EMT模型最佳诱导浓度;Western blot法进一步检测加药后EMT模型E-cadherin和Vimentin表达情况。结果:AMP对DU145细胞增殖具有显著的抑制作用,24、48、72 h的IC50分别为35.62、32.71、28.43μg·mL^-1;Transwell实验显示AMP处理后穿膜细胞数明显减少,显著抑制细胞的迁移和侵袭能力;细胞免疫荧光实验表征发现TGF-β诱导后细胞内E-cadherin表达下调,Vimentin表达上调,确定10ng·mL^-1为TGF-β诱导EMT模型的最佳浓度。Western blot法检测显示,与对照组相比,TGF-β组和TGF-β+AMP组的细胞内E-cadherin表达下调,Vimentin表达上调,此外,与TGF-β组相比,TGF-β+AMP组细胞内E-cadherin表达变化无统计学差异,但Vimentin表达降低(P<0.05),表明AMP具有逆转EMT过程的作用。结论:AMP不仅能够抑制人前列腺癌DU145细胞的增殖,还可抑制其迁移和侵袭能力,这可能与逆转EMT过程有关。

雷公藤内酯酮联合甘草次酸对促进人肝癌HepG2细胞凋亡及相关蛋白表达的影响

目的研究雷公藤内酯酮(TPN)单独或联用甘草次酸(GA)对人肝癌HepG2细胞增殖、迁移、凋亡及相关信号通路Caspase-3、Bax和Bcl-2蛋白表达的影响。方法采用CCK-8法测定TPN单独或TPN(0.3、0.6、1.2μmol/L)联用GA(2、10、20μmol/L)对HepG2细胞24 h的增殖抑制作用,利用增效指数(q值)判定协同药效;Annexin V-FITC/PI染色法检测给药后细胞凋亡率变化;细胞划痕实验检测药物对细胞迁移能力的影响;Western-blot法检测Caspase-3、Bax和Bcl-2蛋白的表达水平。结果TPN、GA单独作用对HepG2细胞24 h的半数抑制浓度(IC 50)分别为(7.28±2.13)和(26.56±6.32)μmol/L。TPN(1.2μmol/L)和GA(2μmol/L)联用组的q值(1.505)最大,细胞抑制率为(62.28±6.13)%;该联用组对HepG2细胞的总凋亡率高于单独使用TPN(P<0.05),同时抑制HepG2细胞的迁移,使细胞内Caspase-3蛋白表达水平升高、Bcl-2蛋白表达水平降低(P<0.05)。结论TPN联用GA对HepG2细胞的增殖具有良好的协同抑制效果,可能与其通过下调Bcl-2基因表达与激活Caspase基因家族共同诱导肝癌细胞的凋亡有关,两者联用能增强抑制肝癌HepG2细胞的迁移。

响应面分析法优化雷公藤内酯酮脂质体的制备工艺

目的制备雷公藤内酯酮(Triptonide,TPN)脂质体,并对其处方进行优化。方法采用薄膜分散法制备TPN脂质体,以包封率为评价指标,响应面分析法对优化处方所制脂质体进行验证,并对脂质体理化性质进行考察。结果 TPN脂质体的最佳制备工艺为:磷脂药物比2∶1,磷脂胆固醇比22.5∶1。其包封率为(78±0.58)%,载药量为(1.39±0.03)%,粒径为(185±4) nm,多分散系数为(0.318±0.02)。结论在最佳处方工艺条件下采用薄膜分散法制备的TPN脂质体包封率和载药量较高,该方法可行。

雷公藤内酯酮脂质体的体外释放特性及体外抗肿瘤活性

目的考察雷公藤内酯酮(Triptonide,TPN)脂质体的体外释放特性及体外抗肿瘤活性。方法反渗透法考察脂质体的体外释放行为;MTT法测定其在体外对人结肠癌细胞SW620和人白血病细胞K562的抗肿瘤活性。结果TPN脂质体在pH 6.8的缓冲环境中的释放符合一级动力学方程,对SW620和K562细胞48 h的半数抑制浓度显著低于TPN溶液。结论TPN脂质体在体外具有缓释特性,能增强TPN的体外抗肿瘤活性,有望开发为临床药用新剂型。

浅谈动物实验室的管理工作与思考

动物实验室是师生开展实验教学和进行科学研究的基础,加强动物实验室的管理有利于动物实验的顺利开展,提高科研水平和实验效果。以我院动物实验室的实际情况为例,建立相应的管理制度及各项措施使动物实验室的管理更加规范化和标准化,从而保证动物实验的顺利开展。