长柄石杉ISSR-PCR反应体系的建立与正交优化

长柄石杉ISSR反应体系的建立能为利用ISSR标记技术进行长柄石杉品种鉴别、分类、种质资源遗传多样性分析奠定良好基础。利用正交试验设计的方法,从dNTP浓度、TaqDNA聚合酶浓度、引物浓度和Mg2+浓度4种因素,对长柄石杉ISSR-PCR反应体系进行优化分析,并在此基础上对模板DNA浓度进行梯度检测。结果表明,20μLISSR-PCR反应体系中各因素的最佳浓度为1×PCRbuffer、300μmol/LdNTP、0.2μmol/L引物、2.0mmol/LMg2+、1.75UTaqDNA聚合酶、40ng模板DNA。该优化体系的建立为下一步进行长柄石杉ISSR分子标记奠定了基础。