盐肤木根的化学成分及抗氧化活性研究

目的研究盐肤木(Rhus chinensis Mill.)根的化学成分及其抗氧化活性。方法应用多种色谱技术对盐肤木根水提醇沉提取物进行分离纯化,采用一维核磁共振(1D-NMR)及高分辨电喷雾质谱(HR-ESI-MS)等波谱方法鉴定化合物结构,并用1,1-二苯基-2-三硝基苯肼(DPPH)法评价其抗氧化活性。结果从总提物中分离得到20个化合物(包括2个鞣质,9个酚酸及9个黄酮),分别鉴定为1,2,3,4,6-五-O-没食子酰基-β-D-葡萄糖(1)、1,2,3,6-四-O-没食子酰基-β-D-葡萄糖(2)、没食子酸(3)、没食子酸甲酯(4)、没食子酸乙酯(5)、鞣花酸(6)、原儿茶醛(7)、原儿茶酸(8)、苔黑酚葡萄糖苷(9)、对羟基苯甲酸(10)、盐肤木内酯A(11)、芦丁(12)、漆黄素(13)、山柰酚(14)、山柰酚-3-O-芸香糖苷(15)、紫铆亭(16)、二氢漆黄素(17)、(+)-儿茶素(18)、根皮素(19)、根皮苷(20)。其中1～7、12～14抗氧化活性IC50值依次为2.61、5.54、8.75、8.99、9.36、10.86、14.60、16.68、18.88、27.52μmol·L^(-1),均优于阳性对照药维生素C。结论 2、7、10、15、16、18系首次从该植物分离,且1～7、12～14抗氧化活性良好。

黄毛耳草化学成分及其中车叶草苷和京尼平苷的含量测定研究

目的研究黄毛耳草(Hedyotis chrysotricha)全草的化学成分,并采用高效液相色谱(HPLC)法对其主要成分车叶草苷和京尼平苷进行含量测定。方法采用微孔树脂(MCI)柱及半制备高效液相色谱等技术,对其醇提物进行系统分离,得到单体;采用质谱(MS)、核磁共振(NMR)等波谱技术鉴定其结构。定量分析采用高效液相色谱-二极管阵列检测器(HPLC-DAD)法;色谱柱为Welch Ultimate XB-C 18(4.6 mm×250 mm,5μm);以乙腈∶0.1%甲酸水溶液(13∶87)为流动相;流速:1.0 mL·min^-1;检测波长:240 nm,柱温:30℃;进样量10μL。结果从植物中共分离到14个化合物,分别鉴定为(24 R)-stigmastane-3β,5α,6β-triol(1)、24ξ-ethylcholest-22 E-ene-3β,5α,6β-triol(2)、5-stigmasten-3β,7β-diol(3)、豆甾醇(4)、β-谷甾醇(5)、hyptatic acid B(6)、6β-hydroxyursolic acid(7)、齐墩果酸(8)、车叶草苷(9)、车叶草酸(10)、京尼平苷(11)、aitchisonide A(12)、3 S,5 R,6 R,9 S-tetrahydroxy-7 E-megastigmene(13)及(6 S,9 R)-roseoside(14)。首次基于2D-NMR数据完整归属了化合物6的氢谱数据;含量测定结果表明,车叶草苷和京尼平苷分别在12.80~128.00μg·mL^-1(r=0.9990)、3.00~30.00μg·mL^-1(r=0.9993)范围内线性关系良好,平均加样回收率分别为103.19%(RSD=2.40%)、95.06%(RSD=3.90%)。结论共分离鉴定14个化合物,其中,7个化合物(1~3、6、7、12、13)为首次从耳草属植物中分离,14为首次从黄毛耳草中得到;采用高效液相色谱-二极管阵列检测器建立车叶草苷和京尼平苷含量测定方法,10个批次中该两个化合物含量分别为0.733~2.282及0.080~0.328 mg·g^-1,方法简便准确,可作为该药材环烯醚萜苷的质量控制方法。

采用改良磷钼钨酸-干酪素法测定闽产盐肤木根中总鞣质含量

目的:建立舒冠通糖浆原药材盐肤木根中总鞣质的含量测定方法,并对产自福建的该药材进行鞣质含量的测定。方法:以《中华人民共和国药典》2015版四部中鞣质含量测定法(磷钼钨酸-干酪素法)为基础,在显色温度、显色时间、干酪素的用量及处理方法等方面进行改良,确定了含量测定方法,并用该法测定样品中总鞣质含量。结果:通过对鞣质含量测定各环节的考察,确定了原药材鞣质含量测定方法,并进行了方法学验证,没食子酸在1.00～12.00μg/mL与吸光度呈良好的线性关系,r=0.9985,操作重复性良好,RSD=2.89%,闽产盐肤木根中鞣质含量为22.1 mg·g-1(n=6,RSD=2.39%)。结论:经方法学验证,该方法可用于测定闽产盐肤木根中总鞣质的含量。

雷公藤红素靶向抑制STAT3抗结直肠癌的机制

目的探究雷公藤红素(celastrol,CEL)通过靶向抑制STAT3发挥抗结肠癌作用。方法体外培养HCT-116细胞、HepG2细胞、A549细胞,经不同浓度的CEL处理,CCK-8检测体外抗增殖活性;选择HCT-116细胞,利用Western blot检测给药前后STAT3及其上下游蛋白(JAK2、Survivin、MCL-1)的表达;应用表面等离子共振(SPR)以及分子对接技术分析CEL与人源STAT3重组蛋白(rhSTAT3)的结合;采用流式细胞仪检测HCT-116细胞凋亡与细胞周期阻滞情况;建立4例患者来源的结直肠肿瘤类器官(colorectal cancer organoid,CCO)模型(CCO-1、CCO-2、CCO-3、CCO-4)和1例正常结直肠组织类器官模型(colorectal normal organoid,CNO),评价化合物对CCOs和CNO的抑制作用。结果CEL对3种肿瘤细胞的半数抑制浓度分别为(A549:IC_(50)=2.37±0.02μmol·L^(-1)、HCT-116:IC_(50)=1.40±0.21μmol·L^(-1)、HepG2:IC_(50)=2.52±0.02μmol·L^(-1));HCT-116细胞经IL-6诱导后各蛋白水平均有明显的升高,差异具有统计学意义(P<0.05),CEL给药6 h后,使磷酸化信号转导及转录激活因子(p-STAT3)、细胞凋亡相关蛋白(Survivin、MCL-1)的表达量下调(P<0.05),对STAT3总蛋白以及磷酸化酪氨酸激酶(p-JAK2)的表达量无明显影响(P>0.05);CEL能够阻滞HCT-116细胞周期并诱导细胞凋亡;SPR分析CEL与rhSTAT3蛋白的平衡解离常数K_(D)=6.038×10^(-5) mol·L^(-1),具有良好的结合力,分子对接预测其结合位点位于STAT3的SH2结构域;CEL抗结直肠癌活性在CCOs上得到进一步验证,且作用强于阳性药奥沙利铂(L-OHP)。结论CEL具有显著的抗肿瘤活性,其可能是通过直接靶向抑制STAT3,进而诱导细胞凋亡、阻滞细胞周期来发挥抗结直肠癌作用。