2017~2019年福建省预包装食品中致病菌污染状况调查与分析

目的了解福建省市售预包装食品中致病菌的污染状况。方法根据相关抽检细则收集2017~2019年福建省市售预包装食品8088份食品样品,分析检测金黄色葡萄球菌、单增李斯特氏菌、沙门氏菌、副溶血性弧菌、克罗诺杆菌5种致病菌,并将不合格样品及一部分合格样品进行实时荧光PCR法测试。结果不合格样品共14份,检出率为0.17%(14/8088),其中速冻食品1.80%(9/487);豆制品检出率为0.61%(1/163);肉制品的检出率为0.34%(2/589);婴幼儿配方乳粉第一段0.31%(1/325);调味品检出率0.19%(1/516);实时荧光PCR法检测所有不合格样品均为阳性。结论福建省预包装食品致病菌污染率较低,总体状况良好,速冻食品为主要被污染物,应加强监管;婴幼儿配方乳粉中仍有致病菌检出,仍要严防。由于样品量大,检出率低,建议检验实验室先采用实时荧光PCR法筛选,阳性样品再采用传统微生物法确认,节省人力物力。

餐饮食品中6病原菌叠氮丙啶-定量聚合酶链反应检测方法开发与检验数据分析

目的建立叠氮丙啶-定量聚合酶链反应法(propidiummonoazide-quantitativepolymerasechain reaction,PMA-qPCR)快速检测餐饮食品中6病原菌的方法。方法开发6种病原菌前增菌通用型培养基,采用热裂解方法提取样品DNA,采用PMA技术鉴别活菌与死菌,运用分子生物学技术检测样品中目标菌的特异性基因片段,建立病原菌的PMA-qPCR检测方法,开展餐饮食品样品病原菌筛查检测。结果本方法特异性良好,灵敏度较高, 1533份餐饮食品样品中检出病原菌71株,检出率为4.63%(71/1533)。结论本研究运用PMA-qPCR开展病原菌活菌检测技术研究,所建立研究方法可广泛应用于餐饮食品及相关食品中病原菌的快速筛查检测,具有较好的应用前景和现实意义。

冷链食品中铜绿假单胞菌的检测方法研究及进化树构建

铜绿假单胞菌是条件致病菌,对于患者具有较大的感染风险与危害,因此建立冷链食品中铜绿假单胞菌的检测方法并完成其溯源分子进化树构建工作,对于保障食品安全至关重要。以冷链食品中的铜绿假单胞菌为研究对象,应用实时荧光PCR检测技术建立快速检测方法。通过冷链食品抽样调查检测出铜绿假单胞菌后,将样品中检测出的铜绿假单胞菌菌株进行测序分析并建立铜绿假单胞菌生物进化树完成溯源分析。结果利用该方法成功从随机采集的271份冷链食品中检出10株病原菌,病原菌总体检出率为3.69%(10/271),并通过分子进化树的构建成功溯源铜绿假单胞菌的污染来源并完成菌种种属定位。研究成果可以为冷链食品中铜绿假单胞菌等相关病原菌的检测溯源分析提供思路与方法。

QuEChERS-超高效液相色谱-串联质谱法测定动物源性食品中30种抗寄生虫类药物残留

目的:采用超高效液相色谱-串联质谱法,建立测定动物源性食品中30种抗寄生虫类药物残留的方法。方法:样品经乙腈、1%氨水乙酸乙酯提取,经QuEChERS净化。净化后采用Waters ACQUITY UPLC^(TM) BEH C_(18)色谱柱分离,10 mmol/L甲酸铵(含0.1%甲酸)水溶液-乙腈:甲醇(50:50,v:v)为流动相进行梯度洗脱,电喷雾离子源正负离子切换多反应监测(Multiple Reaction Monitoring,MRM)模式下进行检测,基质匹配外标法定量。结果:在优化的条件下,30种抗寄生虫类药物在各自的线性范围内线性良好,决定系数(r^(2))均大于0.99;回收率为70.1%~111%;相对标准偏差在0.10%~9.1%之间(n=6);方法检出限为0.001~0.3μg/kg之间,方法定量限在0.004~1μg/kg。结论:该方法灵敏、准确,具有良好的重复性和稳定性,可用于动物源性食品中多种抗寄生虫药物残留的检测。

叠氮丙啶-实时荧光聚合酶链式反应-高通量测序技术鉴定冷链食品中多种病原菌

目的 应用叠氮丙啶-实时荧光聚合酶链式反应-高通量测序技术鉴定冷链食品中多种病原菌,构建病原菌分子进化树。方法 以冷链食品中的沙门氏菌、金黄色葡萄球菌、蜡样芽胞杆菌、副溶血性弧菌、单核细胞增生李斯特氏菌5种病原菌作为研究对象,应用叠氮丙啶-实时荧光聚合酶链式反应技术作为冷链食品中病原菌检测初筛手段,应用微生物培养法以及生化鉴定仪器法进行方法比对与结果验证,运用高通量测序以及分子进化树构建作为冷链食品中所分离病原菌的种属地位确证方法。结果 叠氮丙啶-实时荧光聚合酶链式反应技术成功扩增了冷链食品中生活状态病原菌的特征性核酸片段,排除了死亡细菌以及阴性对照菌的干扰,病原菌检出限可达到1×10^(3)CFU/mL,一次反应可检测42份试样,可以在18 h内完成检测工作。在冷链食品中病原菌抽样检测调查中,随机采集的751份冷链食品,共检出62株病原菌,病原菌总体检出率为8.3%(62/751)。通过后续的16S rRNA测序以及葡萄球菌属、弧菌属以及李斯特菌属分子进化树的构建,成功溯源了金黄色葡萄球菌的污染来源并完成病原菌种属定位。结论 本方法特异性好、灵敏度高、检测通量高,为冷链食品及相关食品中病原菌的精确检测与溯源分析提供新的思路与方法。

冷冻水产品中副溶血性弧菌的实时荧光PCR检测方法研究

文章研发了一种可在16 h内完成冷冻水产品中副溶血性弧菌快速检测的方法。方法在首先完成样品的预增菌工作后,采用高温热裂解法与核酸亲和膜吸附法提取冷冻水产品等样品中的检材总DNA,设计副溶血性弧菌专一引物探针,运用实时荧光定量PCR技术扩增试样中副溶血性弧菌基因组保守基因片段,同时开展与国家标准方法的比对工作证实方法的可靠性,建立了特异性好、高检测通量的PCR检测方法。为验证所建立方法的适用性与稳定性,本研究从市场中随机抽取共331份冷冻水产品样品开展副溶血性弧菌的筛查检测,结果表明采用该方法在上述抽样调查的冷冻水产品中3份样品的副溶血性弧菌特异性的基因片段被扩增检验出,试样的目标菌检出率约为0.9%(3/331),该研究PCR方法的DNA检出限可达到0.01 ng/μL。

冷链食品中诺如病毒的检测方法研究以及污染状况分析

文章以冷链食品中的诺如病毒为研究对象,建立冷链食品中诺如病毒的高效提取方法。该方法设计特异性引物探针,应用逆转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)检验冷链食品中诺如病毒,文章应用所构建的方法开展了冷链食品中诺如病毒污染状况的抽样调查。结果表明,应用RT-PCR成功扩增了诺如病毒特征性核酸,在后续使用该方法进行的冷链食品中病毒的抽样检测调查中发现诺如病毒总体检出率为7.0%(27/383),病毒分型发现检出的27株诺如病毒中有25份为诺如病毒GII型,2份为诺如病毒GI型。

2013～2018年福建省食品接触材料中微生物污染状况调查

文章对福建省食品接触材料中微生物污染情况连续5年的抽样检测数据进行统计分析,数据显示:2013~2018年间抽样检验的1331份食品接触材料的整体合格率约为95.5%,不合格项目集中于大肠菌群与霉菌等,致病菌均未检出。通过数据可以看出,福建省食品接触材料卫生状况整体情况较好,但也存在一定的问题。文章建议执法部门加强对检出率较高、污染较为严重的食品接触材料,如餐具等加强监督检查力度,加大抽检频次,发现问题及时处理。文章为读者全面了解福建省内食品接触材料的卫生质量情况和今后开展食品接触材料的卫生监督工作提供了数据依据。

冷链食品行业发展现状及建议

文章阐述了我国冷链食品产业概况,分析了冷链食品质量安全主要问题,提出了完善冷链食品法律法规和标准体系、加大行政监管和服务力度、建设现代化的冷链物流体系和构建冷链食品信息预警系统四项对策措施,对加强冷链食品物流体系建设,健全相关法规标准,强化冷链食品监管,提高冷链食品质量安全具有重要意义。

水产品及螺旋藻片中微囊藻毒素检测方法研究

建立了超高效液相色谱-串联质谱法检测水产品及螺旋藻片中微囊藻毒素的高灵敏度色质联用快速检测方法。样品经溶剂超声提取、固相萃取净化,氮气吹至近干并定容后,通过超高效液相色谱-串联四极杆质谱仪检测。分离柱为Waters Acquity BEH C18柱(1.7μm,2.1 mm×100 mm);流动相为0.3%甲酸水溶液-乙腈;流速0.4 mL/min。4种不同基质样品中有害毒素微囊藻毒素MCYST-RR和MCYST-LR的检测限分别为0.7μg/kg和0.3μg/kg。4种不同基质样品中微囊藻毒素的回收率为80.0%～103.6%,相对标准偏差(RSD)为2.2%～14.6%(n=5),在0.01μg/mL～10μg/mL浓度范围内呈良好的线性关系,线性回归系数r2均大于0.999。

液相色谱串联质谱法测定热加工食品中杂环胺

建立固相萃取-超高效液相色谱-串联质谱法同时测定热加工食品中14 HAAs种含量的方法。样品经过5%盐酸-甲醇酸化后均质,涡旋,超声提取,经混合型弱阳离子交换PCX固相萃取小柱富集、净化,5%氨水/甲醇溶液洗脱,采用BEH C18色谱柱,以3%甲酸和乙腈为流动相进行梯度洗脱分离,电喷雾离子正源模式(ESI+),采用多反应监测(MRM)扫描,以内标法定量分析,结果表明,14种HAAs在1.25μg/kg^25μg/kg范围内线性关系良好,相关系数r>0.99;在12 min内实现分离,加标回收率在51.1%~118.5%之间,相对标准差(RSD%)在0.9%~9.6%之间;检出限(LOD)在0.08μg/kg^1.1μg/kg之间。该方法简便快捷,易于实现大规模在线分析。

餐饮及相关食品中病原菌活菌多重实时荧光PCR检测方法的研究与开发

为了应对餐饮等食品中病原菌快速检测的需求、研究建立病原菌筛查方法,选取痢疾志贺氏菌(Shigella dysenteriae)、金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)、副溶血性弧菌(Vibrio parahaemolyticus)、阴沟肠杆菌(Enterobacter cloacae)、产气肠杆菌(Enterobacter aerogenes)、沙门氏菌(Salmonella)、蜡样芽胞杆菌(Bacillus cereus)、大肠埃希氏菌O157∶H7(Escherichia coli O157∶H7)、单核细胞增生李斯特氏菌(Listeria monocytogenes)等9种病原菌开展多重实时荧光PCR方法研究工作。为了节约预增菌时间与提升检测效率,研发了适用于多种病原菌预增菌的通用型培养基,采取高温裂解法提取菌液核酸,利用PMA染料灭活死亡细菌DNA,筛选出活菌DNA,采用多重实时荧光PCR技术检测目标菌,该方法可在16 h内完成检测,对于目标病原菌的检测低限可达103 CFU·mL^-1。

餐饮食品中蜡样芽孢杆菌的实时荧光PCR检测方法研究

文章研究开发了一种可在18 h内完成餐饮食品中蜡样芽孢杆菌检验的方法。本研究采用胰酪胨大豆多黏菌素肉汤培养基培养蜡样芽孢杆菌,通过热裂解法提取菌液DNA,运用实时荧光PCR法检测样液中的蜡样芽孢杆菌基因成分,建立了完整系统的餐饮食品中蜡样芽孢杆菌的检测方法,方法的检出限达0.01 ng/μL的蜡样芽孢杆菌DNA,整个检测过程在18 h内完成。文章将方法应用于市场售卖餐饮食品中蜡样芽孢杆菌的筛查检测,结果表明,在抽样检验的315份餐饮食品中有25份样品(25/315,检出率为7.93%)中检测出蜡样芽孢杆菌特异性基因成分。该方法具有检测时间短、效率高,一次PCR反应可同时检测90份样本,方法适合于餐饮食品等食品中蜡样芽孢杆菌的高通量筛查检测。

食品接触材料表面细菌生物被膜形成能力的研究进展

食品接触材料的安全性是食品安全领域的重要问题,材料表面的粗糙度、电荷、亲水性能都可影响食源性致病菌的粘附,而细菌粘附往往是生物被膜形成的第1个阶段。文章主要从玻璃、不锈钢、纸质材料等常用食品接触材料表面细菌生物被膜形成能力方面进行了综述,为进一步预防控制食源性疾病提供理论依据。

超高效液相色谱-串联质谱法同步检测食品中的2-甲基咪唑及4-甲基咪唑

建立了超高效液相色谱-串联质谱（UPLC-MS/MS）同步检测食品中2-甲基咪唑（2-MEI）和4-甲基咪唑（4-MEI）的分析方法。大多数食品超声提取后可直接进样,基质极其复杂的样品（如酱油、咖啡、茶叶等）需经强阳离子交换柱（PCX）萃取净化,采用同位素内标法定量。在优化条件下,2-MEI和4-MEI的检出限分别可达0.5 ng/g和1.4 ng/g,回收率分别为82.6%～98.1%和89.5%～108.1%,日内相对标准偏差（RSD）分别为1.3%～4.5%和1.0%～5.0%,日间RSD分别为2.0%～5.4%和1.9%～6.5%。采用该方法对市售90余种加工食品进行抽样检测,结果发现2-MEI仅在少量食品中存在且含量较低,而4-MEI在多种食品中存在,含量较高的食品包括老抽酱油（3 224.20～18 795.93 ng/g）、咖啡（0～5 554.35 ng/g）、曲奇（63.48～584.78 ng/g）、焦糖色素饼干（373.12～1 899.60 ng/g）、可乐（44.13～342.77 ng/g）、大麦茶（3131.05～3 335.60 ng/g）等。该文还首次报道了不同品种茶叶（16～761.89 ng/g）中4-MEI的含量。

双酶水解-高效液相色谱法测定肉松中淀粉含量的研究

本文采用双酶水解-高效液相色谱法，建立了一种肉松中淀粉含量的测定方法。研究结果表明，在选定条件下，α-淀粉酶和淀粉葡萄糖苷酶可将肉松中淀粉专一彻底水解成葡萄糖，采用高效液相色谱法测定样品中葡萄糖含量，在0．5—50．0mg／mL浓度范围内呈现良好的线性关系，线性相关系数为0．9999。采用不同浓度加标所得回收率为93．7％-99．8％，方法检出限为0．36％，定量限为1．2％，相对标准偏差（RSD）均小于5％。

水热法合成氮、钴双掺杂的荧光碳点及其性能研究

以维生素B12(VB12)为碳源、氮源和钴源,采用一步水热法制备氮、钴双掺杂荧光碳点,探究了水热温度和水热时间对碳点荧光性能的影响,利用紫外-可见吸收光谱(UV-vis)、荧光光谱(MFS)、傅里叶红外光谱(FTIR)、X-射线光电子能谱(XPS)与高分辨透射电镜(HRTEM)等方法对合成碳点的光学性能、元素组成、表面官能团及其形貌等进行了表征,结果表明所制备的水溶性荧光碳点表现出蓝色荧光,具有良好的水溶性和稳定性,平均粒径为3.26nm。最后将碳点溶液与肝癌细胞共同孵育,对其细胞毒性进行了检测。

超高效液相色谱-串联质谱法同时测定水产品中6种丁香酚类物质的残留量

建立同时测定水产品中丁香酚、异丁香酚、甲基丁香酚、甲基异丁香酚、乙酸丁香酚酯、乙酰基异丁香酚的超高效液相色谱-串联质谱(ultra-high performance liquid chromatography-tandem mass spectrometry,UPLC-MS/MS)方法,并应用于实际样品的测定。样品加入无水硫酸钠进行基质分散后以乙腈振荡提取,提取液经HLB固相萃取柱净化,浓缩后,以Shim-pack GIST(2.1 mm×50 mm,2μm)为色谱柱,甲醇-水作为流动相进行梯度洗脱分离,UPLC-MS/MS进行分析。方法学验证表明,在1.00~500 ng/mL范围内,6种丁香酚类物质线性关系较好(R>0.999);检出限在0.1~0.3μg/kg之间;定量限在0.3~1.0μg/kg之间;以3种不同基质进行2.00、5.00、10.0μg/kg的加标回收实验,每种加标水平平行实验6次。结果显示6种丁香酚类物质平均回收率在83.9%~105.4%之间,相对标准偏差在1.8%~6.9%之间,符合痕量分析的要求。该法简便、结果准确可靠、灵敏度高、检出限低,适用于水产品中6种丁香酚类物质的测定。

羊乳制品中动植物源性成分多重RT-PCR方法研究

羊乳制品因其营养丰富的特点受到消费者的青睐,但也容易成为乳制品掺假的主要目标。通过合成羊源性、牛源性、植物源性成分特异性的引物和探针,建立羊-牛-植物3种源性成分的双重和三重实时荧光PCR检测体系,并设计相应的特异性试验保证检测体系的准确性。本检测体系对羊源性、牛源性、植物源性成分的检测灵敏度可达0.1 ng/μL;羊乳中掺入牛乳的检测限可达到0.1%(体积分数);羊乳中掺入纯豆奶的检测限可达到0.5%(体积分数)。本研究建立的多重实时荧光PCR检测方法可实现准确快速、高特异性、高灵敏度检测羊乳制品中掺假掺杂的动植物源性成分。

HPLC-MS/MS快速测定婴幼儿食品中丙烯酰胺含量

建立高效液相色谱-串联质谱仪测定婴幼儿食品中丙烯酰胺含量的方法。以13C3-丙烯酰胺为同位素内标,4%三氯乙酸水溶液作为提取液,经Na Cl盐析,乙腈萃取净化,通过高效液相色谱-串联质谱仪多反应监测模式进行测定,内标法定量。该方法的线性范围为12.24 ng/m L^612 ng/m L,相关系数r2>0.999 9,检出限为7μg/kg,定量限22μg/kg。3种婴幼儿食品及辅助食品中丙烯酰胺的加标回收率为96.5%~104.2%,相对标准偏差为0.9%~2.5%。本方法具有操作简便、准确率高、重现性好等优点,可应用于多种婴幼儿食品中丙烯酰胺含量的测定。