多重基因重组型HH9N2亚型AIV福建分离株全基因组的分子特征

为从分子水平上了解福建省活禽市场H9N2亚型禽流感病毒的遗传演化情况及其与其他亚型禽流感病毒之间的遗传进化关系,对2015年分离自福州市某活禽市场的一株鸡源H9N2亚型禽流感病毒A/chicken/Fujian/05/2015(H9N2)进行了全基因组扩增、克隆、测序,并对所获得的全序列与参考株进行了8个基因片段的同源性比较和遗传进化分析。结果显示:该分离株的HA基因与鸡源病毒A/chicken/Zhejiang/SIC40/2015(H9N2)的核苷酸同源性最高,裂解位点处氨基酸序列为-PSRSSR↓GLF-,符合低致病性裂解位点序列特征,其226位氨基酸为L,具有与哺乳动物唾液酸α,2~6受体结合的特性;NA基因颈部63、64和65位点氨基酸有缺失,与鸡源病毒A/chicken/Zhejiang/SIC32/2014(H9N2)的核苷酸同源性最高;M2基因的31位氨基酸为N,表明该病毒已经对金刚烷胺类药物产生耐药性;分离株的基因组由3个亚系的基因重组产生,其中HA和NA基因来源于BJ/94亚系,PB2和M基因来源于G1亚系,PB1、PA、NP和NS基因来源于F98亚系;该分离株的6个内部基因PB2、PB1、PA、NP、M、NS与H7N9、H10N8、H5N6亚型禽流感病毒的内部基因存在复杂的交叉重组现象。因此需加强对H9N2亚型禽流感病毒的流行病学监测。

转移因子联合La Sota株免疫对NDV F_(48)E_(9)株强毒重复感染鸡的保护作用

为了解猪脾转移因子(transfer factor,TF)对新城疫病毒(Newcastle disease virus,NDV)La Sota弱毒疫苗株免疫效果的影响,本研究采用10^(5.17)EID_(50)La Sota株单独免疫(单独免疫1组)或与TF联合免疫(联合免疫1组)SPF鸡,14 d后以10^(4.7)ELD_(50)F_(48)E_(9)株首次攻毒,设立对照1组(非免疫/首次攻毒),首次攻毒14 d后以10^(9.1)ELD^(50)F_(48)E_(9)株二次攻毒,设立对照2组(非免疫/非首次攻毒/二次攻毒)和空白1组(非免疫/非攻毒),通过淋巴细胞增殖率测定法、血凝抑制试验、荧光定量RT-PCR方法检测T淋巴细胞转化水平(PHA-P SI)、B淋巴细胞转化水平(LPS SI)、新城疫(ND)抗体效价、病毒血症、排毒与主要组织的F48E9株感染情况。结果显示:首次攻毒后,单独和联合免疫1组保护率均为100%,对照1组病死率为100%;二次攻毒后,单独和联合免疫1组保护率分别为20%和50%、病死率分别为60%和40%,对照2组病死率为100%。免疫后14 d,联合免疫1组的PHA-P SI、LPS SI和抗体效价均极显著高于单独免疫1组(P<0.01)。首次攻毒后7~14 d,联合免疫1组的PHA-P SI、LPS SI和抗体效价均极显著高于单独免疫1组(P<0.01),首次攻毒后单独和联合免疫1组均没有检测出病毒血症、泄殖腔和口咽排毒。二次攻毒后3~7 d,联合免疫1组的PHA-P SI、LPS SI和抗体效价均极显著高于单独免疫1组(P<0.01),二次攻毒后联合免疫1组鸡病毒血症率、病毒血症时间、鸡泄殖腔和口咽排毒时间、排毒鸡比例、鸡肝、脾、肺、肾、法氏囊、盲肠扁桃体、脑等主要组织NDV F_(48)E_(9)株感染阳性率均明显低于单独免疫1组。结果表明,TF可提高La Sota株攻毒保护率,提高La Sota株、NDV F_(48)E_(9)株接种后鸡T、B淋巴细胞转化水平和ND抗体效价,降低攻毒后病毒血症率、病毒血症时间、鸡排毒时间、排毒鸡比例和NDV F_(48)E_(9)株在鸡体内的复制。