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鸭骨形态发生蛋白SYBR GreenⅠ荧光定量RT-PCR检测方法的建立
1
作者
刘鸿威
林昶
+6 位作者
王劭
肖世峰
程晓霞
郑敏
陈少莺
曾显成
陈仕龙
《福建农业学报》
CAS
CSCD
北大核心
2022年第12期1509-1518,共10页
【目的】旨在建立一种检测鸭骨形态发生蛋白(BMPs)mRNA转录水平的SYBR GreenⅠ实时荧光定量RTPCR检测方法。【方法】根据GenBank中BMP1、BMP2、BMP3、BMP4、BMP5、BMP6、BMP7、BMP8a、BMP10和BMP15的核苷酸序列设计并合成特异性引物进行...
【目的】旨在建立一种检测鸭骨形态发生蛋白(BMPs)mRNA转录水平的SYBR GreenⅠ实时荧光定量RTPCR检测方法。【方法】根据GenBank中BMP1、BMP2、BMP3、BMP4、BMP5、BMP6、BMP7、BMP8a、BMP10和BMP15的核苷酸序列设计并合成特异性引物进行PCR扩增,产物回收后克隆至pMD-18-T载体,构建阳性重组质粒作为标准品,优化SYBR GreenⅠ荧光定量PCR反应条件,建立其标准曲线,对建立的方法进行特异性、敏感性和重复性试验。【结果】建立的BMP1、BMP2、BMP3、BMP4、BMP5、BMP6、BMP7、BMP8a、BMP10和BMP15基因实时荧光定量检测方法特异性强,无引物二聚体及非特异性产物,熔解曲线为单峰,相关系数R2均大于0.998,组间和组内变异系数均小于1%。应用该方法检测BMPs基因在半番鸭组织中的表达水平,结果显示,BMP1、 BMP2、 BMP5和BMP7基因在心脏中表达量较高,分别为5.5×10^(4)、 1.1×10^(5)、 5.1×10^(5)和7.7×10^(5)拷贝·μL^(-1);BMP6和BMP10基因在肝脏中表达量较高,分别为7.5×10^(4)和7.6×10^(3)拷贝·μL^(-1);而BMP3、 BMP4、BMP8a和BMP15分别在法氏囊、胸腺、喙和脾脏中表达量最高,分别为1.5×10^(5)、2.1×10^(4)、1.8×10^(3)和3.3×10^(3)拷贝·μL^(-1)。【结论】本研究建立的实时荧光定量PCR方法特异性强、重复性好,为检测鸭BMPs表达水平提供了技术手段。
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关键词
鸭
骨形态发生蛋白(BMPs)
荧光定量PCR
SYBR
GreenⅠ
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职称材料
题名
鸭骨形态发生蛋白SYBR GreenⅠ荧光定量RT-PCR检测方法的建立
1
作者
刘鸿威
林昶
王劭
肖世峰
程晓霞
郑敏
陈少莺
曾显成
陈仕龙
机构
福建
农林大学动物
科学
学院
(蜂学
学院
)
福建省农业科学院
畜牧兽医研究所
福建省农业科学院莆田分院
出处
《福建农业学报》
CAS
CSCD
北大核心
2022年第12期1509-1518,共10页
基金
福建省农业科学院科技创新团队建设项目(CXTD2021034)
福建省农业高质量发展超越“5511”协同创新工程项目(XTCXGC2021018、 XTCXGC2021012)
中央引导地方科技发展专项(2022L3019)。
文摘
【目的】旨在建立一种检测鸭骨形态发生蛋白(BMPs)mRNA转录水平的SYBR GreenⅠ实时荧光定量RTPCR检测方法。【方法】根据GenBank中BMP1、BMP2、BMP3、BMP4、BMP5、BMP6、BMP7、BMP8a、BMP10和BMP15的核苷酸序列设计并合成特异性引物进行PCR扩增,产物回收后克隆至pMD-18-T载体,构建阳性重组质粒作为标准品,优化SYBR GreenⅠ荧光定量PCR反应条件,建立其标准曲线,对建立的方法进行特异性、敏感性和重复性试验。【结果】建立的BMP1、BMP2、BMP3、BMP4、BMP5、BMP6、BMP7、BMP8a、BMP10和BMP15基因实时荧光定量检测方法特异性强,无引物二聚体及非特异性产物,熔解曲线为单峰,相关系数R2均大于0.998,组间和组内变异系数均小于1%。应用该方法检测BMPs基因在半番鸭组织中的表达水平,结果显示,BMP1、 BMP2、 BMP5和BMP7基因在心脏中表达量较高,分别为5.5×10^(4)、 1.1×10^(5)、 5.1×10^(5)和7.7×10^(5)拷贝·μL^(-1);BMP6和BMP10基因在肝脏中表达量较高,分别为7.5×10^(4)和7.6×10^(3)拷贝·μL^(-1);而BMP3、 BMP4、BMP8a和BMP15分别在法氏囊、胸腺、喙和脾脏中表达量最高,分别为1.5×10^(5)、2.1×10^(4)、1.8×10^(3)和3.3×10^(3)拷贝·μL^(-1)。【结论】本研究建立的实时荧光定量PCR方法特异性强、重复性好,为检测鸭BMPs表达水平提供了技术手段。
关键词
鸭
骨形态发生蛋白(BMPs)
荧光定量PCR
SYBR
GreenⅠ
Keywords
Duck
bone morphogenetic proteins
qRT-PCR
SYBR GreenⅠ
分类号
S834 [农业科学—畜牧学]
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职称材料
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
鸭骨形态发生蛋白SYBR GreenⅠ荧光定量RT-PCR检测方法的建立
刘鸿威
林昶
王劭
肖世峰
程晓霞
郑敏
陈少莺
曾显成
陈仕龙
《福建农业学报》
CAS
CSCD
北大核心
2022
0
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