siRNA干扰胰岛素样生长因子1受体表达对缺氧环境下肝癌HepG2细胞周期及凋亡的影响

目的:探讨siRNA技术干扰胰岛素样生长因子-1受体(insulin-like growth factors-1 receptors, IGF-1R)表达对缺氧环境下肝癌HepG2细胞周期和凋亡的影响。方法:采用氯化钴处理制备实验所需的肝癌缺氧细胞模型。设计并合成3对siRNA序列和1对阴性对照序列,转染缺氧的肝癌HepG2细胞24 h后以荧光显微镜观察转染效果,采用WB法检测IGF-1R蛋白表达筛选出干扰效率最高的siRNA序列。选用该序列再次转染缺氧肝癌细胞,以流式细胞术、MTT法检测细胞的周期、凋亡和增殖变化,以WB法检测HepG2细胞中CDK1、CDK2和Caspase-3蛋白的表达。结果:成功建立缺氧HepG2细胞模型,siRNA转染缺氧HepG2细胞后以IGF-1R-siRNA-2转染效率最高且敲减IGF-1R表达最明显(均P<0.01)。IGF-1R-siRNA-2转染的HepG2细胞的增殖被明显抑制(P<0.05或P<0.01)、细胞周期被阻滞在G0/G1(P<0.05)、细胞凋亡率明显增加至(25.3±1.3)%(P<0.01),同时发现敲减IGF-1R后缺氧HepG2细胞中CDK1、CDK2蛋白表达明显降低而Caspase-3表达则明显增加(P<0.05或P<0.01)。结论:siRNA干扰IGF-1R表达通过调控细胞周期和凋亡相关蛋白而抑制缺氧环境中HepG2细胞的恶性生物学行为,IGF-1R可能是HCC潜在的治疗靶点。