Duchenne型肌营养不良症与正常肌组织体外成肌过程的对比研究

应用Ｄｅｓｍｉｎ免疫细胞化学和透射电镜观察体外培养肌管，发现其胞浆Ｄｅｓｍｉｎ染色阳性，肌丝分化形成肌节，表明肌管是体外培养肌细胞的成熟阶段。对９例Ｄｕｃｈｅｎｎｅ型肌营养不良症（ＤＭＤ）患者和５例正常人肌组织体外培养肌细胞成肌过程进行动态观察，发现ＤＭＤ体外培养肌细胞有一定的生长、成熟能力，９例均能形成肌管，但分裂增殖期明显长于正常人组（Ｐ＜０．０５），分裂增殖晚期细胞明显退变，初生肌管不能进一步成熟。以培养５周为界，ＤＭＤ组所形成的肌管较正常组瘦短且核数少（Ｐ＜０．０５）。ＤＭＤ体外培养肌细胞存在肌管形成的延缓和分化成熟的障碍。

差速贴壁及克隆化培养人胚成肌细胞及其移植恒河猴的实验性研究

６个水囊引产４～５个月龄人胚肢体肌组织，采用０．１％Ⅱ型胶原酶和０．１２５％胰蛋白酶二步消化法，分离肌卫星细胞，在含胎肌条件培养液（ＨＦＭＥ）的培养基中，差速贴壁及克隆纯化，电镜及Ｄｅｓｍｉｎ免疫细胞化学鉴定纯度后，Ｒｕｂｂｅｒｐｏｌｉｃｅ刮除收集，按１．６×１０６个细胞／ｋｇ体重，间隔０．５ｃｍ点均匀移植于恒河猴肱二头肌组织中。结果表明，该方法培养的成肌细胞纯度达９６％以上，移植后血清肌浆酶ＬＤＨ及ＣＰＫ与移植前相近（Ｐ＞０．０５），肌组织活检未见明显坏死，表明成肌细胞移植无宿主肌纤维损伤作用；移植后１周ＣＤ４／ＣＤ８比值大于２，补体Ｃ４短暂下降，但Ｔａｃ各值未超过移植前，２周后ＣＤ４／ＣＤ８比值恢复到正常水平，表明恒河猴对移植人的成肌细胞有排异反应，但可以耐受。移植后１周肌组织中可以检出Ｄｅｓｍｉｎ（＋）成肌细胞生长及移植后２周的ＡＯ（＋）的嗜碱性再生肌纤维，此后早期呈ＨＬＡ－ＤＲ（＋）的ＣＤ３（＋）、ＣＤ８（＋）细胞几尽消退。