中国水仙FOMT2基因及启动子的克隆与分析

为探究花色基因FOMT2在中国水仙(Narcissus tazetta var.chinensis)类黄酮代谢途径中的功能作用,以期明确小分子化合物甲基化修饰在水仙类黄酮代谢中的作用,本研究以多花水仙"金盏银台"(Narcissus tazetta var.chinensis‘jinzhanyintai’)不同时期的花器官为材料,提取总RNA,采用RACE与RT-PCR结合的方法,克隆得到NtFOMT2基因的cDNA全长。结果表明:NtFOMT2基因的cDNA全长为1 404 bp,其中5′UTR长度为33 bp,3′UTR长度为279 bp,开放阅读框为1 092 bp,共编码363个氨基酸。定量PCR分析结果表明,NtFOMT2基因表达水平在水仙花器官的不同时期差异很大,其表达模式表现为Ⅱ>Ⅰ>Ⅲ>Ⅳ。此外,为分析水仙花色素基因的调节因素,以基因组DNA为模板,采用染色体步移法,成功克隆并分析NtFOMT2基因的5’端调控序列。结果表明,NtFOMT2基因启动子序列除包含起始转录位点(transcription start site,TSS)TATA-box、CAAT增强子外,还包含多个顺式作用元件,如ACE、ATCT-motif、G-box、Sp1等多个光响应元件。此外,该启动子序列还含有MYB参与抗旱诱导的结合位点MBS元件、MYB转录因子结合位点等。