2016—2019年福建省结核病耐药监测结果分析

目的了解2016—2019年福建省结核病耐药监测点分离的MTB的耐药情况,分析耐药变化趋势,为结核病防控工作提供依据。方法收集2016—2019年全省9个耐药监测点培养阳性的分枝杆菌临床分离株,采用对硝基苯甲酸/噻吩-2-羧酸肼(PNB/TCH)生长试验法进行菌种初步鉴定。对MTB菌株进行异烟肼(INH)、利福平(RFP)、链霉素(Sm)、乙胺丁醇(EMB)、卡那霉素(Km)、氧氟沙星(Ofx)、卷曲霉素(Cm)、丙硫异烟胺(Pto)、对氨基水杨酸(PAS)共9种抗结核药品的敏感性试验,描述耐药谱和耐药水平。结果 1434株MTB菌株中有1261株分离自初治患者,173株分离自复治患者。总耐药率为19.04%(273/1434),单耐药率为11.65%(167/1434),多耐药率为3.56%(51/1434),耐多药率为3.84%(55/1434)。复治患者的总耐药率(28.90%,50/173)和耐多药率(12.14%,21/173)均明显高于初治患者[总耐药率为17.68%(223/1261),耐多药率为2.70%(34/1261)],差异均有统计学意义(χ^(2)=12.419,P=0.000;χ^(2)=36.775,P=0.000)。耐药谱有42种,耐药菌株对9种抗结核药品的任一耐药率依次为:Sm(9.90%,142/1434)>INH(8.30%,119/1434)>RFP(5.93%,85/1434)>Ofx(3.63%,52/1434)>EMB(2.30%,33/1434)>Km(0.98%,14/1434)>Cm(0.77%,11/1434)、PAS(0.77%,11/1434)>Pto(0.63%,9/1434)。2016—2019各年度的总耐药率分别为17.69%(66/373)、22.34%(63/282)、20.31%(78/384)、16.71%(66/395),差异无统计学意义(χ^(2)_(趋势)=0.248,P=0.619)。结论福建省耐药处于较低水平,耐药呈复杂性和多样性,应重视患者的耐药筛查,加强耐药患者的治疗管理。

福建省耐多药结核分枝杆菌对氟喹诺酮类药物表型耐药与gyrA基因突变特征分析

目的了解福建省耐多药(Multi-drug resistant,MDR)结核分枝杆菌(Mycobacterium tuberculosis,Mtb)氟喹诺酮类药物(Fluoroquinolones,FQs)的gyrA基因突变特征,为FQs耐药菌株的快速分子药敏检测提供基础科学数据。方法收集来自福建省2010-2011年和2008-2009年耐药监测点的所有MDR Mtb临床菌株,采用常规比例法进行FQs敏感性试验。PCR扩增包含gyrA耐药决定区的基因片段,测序后比对分析。结果共收集到MDR结核分枝杆菌临床菌株119株,经常规药敏试验,氧氟沙星(Ofloxacin,Ofx)的耐药率为26.89%,左氧氟沙星(Levofloxacin,Lfx)耐药率为25.21%,莫西沙星(Moxifloxacin,Mfx)耐药率为11.76%。FQs敏感株gyrA基因未检测到突变。gyrA基因在Ofx耐药菌株的突变率为84.38%(27/32),Lfx耐药菌株的突变率为83.33%(25/30),Mfx耐药菌株的突变率为92.86%(13/14)。gyrA基因突变为点突变,共发现有5种突变类型,以Asp94Gly,Asp94Asn和Ala90Val为主。结论福建省MDR-Mtb对FQs耐药的主要原因是gyrA基因突变,最常见的突变位于第94位,第90位和第91位密码子。

福建省耐多药结核分枝杆菌对吡嗪酰胺的耐药水平与基因型特征分析

目的 了解福建省耐多药结核分枝杆菌（MDR-MTB）对吡嗪酰胺（PZA）的耐药水平及基因型分布情况,分析PZA耐药水平及基因型之间的关系。方法 收集2007—2008年和2010—2011年福建省耐药监测点共119株MDR-MTB临床分离株,采用WHO推荐的方法进行耐药性检测,应用间隔区寡核苷酸分型技术（Spoligotyping）进行基因分型,对分型结果上传至SpolDB4.0数据库,并进行聚类分析。结果 119株MDR-MTB菌株对PZA的耐药率为36.97%（44/119）。耐PZA菌株对链霉素（Sm）的耐药率为70.45%（31/44）,高于PZA敏感菌株对Sm的耐药率[50.67%（38/75）],差异有统计学意义（χ 2=4.45,P=0.035）;耐PZA菌株对乙胺丁醇（EMB）的耐药率为81.82%（36/44）,高于PZA敏感菌株对EMB的耐药率[52.00%（39/75）],差异有统计学意义（χ 2=1.58,P=0.001）。北京基因型菌株占67.23%（80/119）;非北京基因型菌株占32.77%（39/119）,共有16个基因型（含8个新发现的基因型）,其中常见的是H家族（含H和H3）和T家族（含T1、T2、T3和T5）。北京基因型菌株对PZA的耐药率（38.75%,31/80）与非北京基因型菌株对PZA的耐药率（33.33%,13/39）间差异无统计学意义（χ 2=0.33,P=0.566）。 结论 福建省耐多药结核病患者临床分离株对PZA耐药的问题应引起重视,对PZA耐药与对Sm和EMB耐药有关;MDR-MTB菌株主要为北京基因型,北京基因型与非北京基因型菌株对PZA的耐药率未见差异。

福建省耐多药结核分枝杆菌VNTR和Spolilgotyping基因多态性分析

目的了解福建省耐多药结核分枝杆菌的基因多态性和主要流行基因型,为耐多药结核病的传播防控提供参考。方法回顾性分析福建省耐药监测数据,收集标本并采用WHO推荐的方法进行药敏试验检出的耐多药结核分枝杆菌119株,采用24位点VNTR(24-VNTR)和间隔区寡核苷酸分型技术(Spoligotyping)进行基因分型,实验数据及结果数字化后录入Excel,在网站http://www.miru-vntrplus.org进行比对,分型结果通过BioNumerics5.0软件进行聚类分析。结果 119株MDR菌株经24-VNTR分型呈现112种基因型(105个独特基因型,7个基因簇),成簇率为11.76%。24-VNTR对119株菌的分辨力(HGDI)为0.999。经Spoligotyping分型,北京基因型占67.23%,非北京基因型占32.77%,以H家族,T家族常见。共26个基因型(19个独特基因型和7个簇),成簇率为84.03%(每簇含2～75株)。Spoligotyping对119株菌的Hunter-Gaston指数为0.597。结论福建省耐多药结核分枝杆菌主要流行型为北京基因型,具有基因多态性。

福建省耐多药结核病分枝杆菌非北京基因型耐药性及相关基因突变分析

目的了解福建省耐多药结核分枝杆菌非北京基因型的多态性及分布,探讨非北京基因型对11种其他抗结核药物的耐药性,分析其与耐药相关基因突变的关系。方法收集两次耐药监测点来源结核杆菌菌株进行一线抗结核药物的耐药性检测,选取耐多药菌株进行其他抗结核药物的耐药性测定,应用间隔区寡核苷酸分型技术进行基因分型,采用PCR扩增耐药相关基因rpoB、KatG、inhA基因并进行测序分析。结果 119株MDR菌株经Spoligotyping基因分型,其中非北京基因型39株,占32.77%,以H家族(14株,占11.76%)和T家族(含T1、T2、T3和T5,14株占11.76%)为主要流行型。非北京基因型与北京基因感染者性别、年龄组、职业、文化、登记分类及地区分布差异均无统计学意义(均P>0.05)。非北京基因型菌株对11种抗结核药物的耐药率与北京基因型的耐药率差异均无统计学意义(P均>0.05)。测序分析非北京基因型菌株rpoB、KatG、inhA基因突变率分别为96.64%、77.31%和12.61%。非北京基因型菌株在rpoB基因531位密码子、516位密码子和在katG基因315位密码子的突变率均低于北京基因型菌株(P<0.05);非北京基因型耐药相关基因的其他位点突变率与北京基因型的差异均无统计学意义(P>0.05)。结论福建省非北京基因型的主要流行家族是H家族和T家族,非北京基因型与耐药性无关,其rpoB基因531位密码子、516位密码子和katG基因315位密码子的突变率均低于北京基因型菌株。

125株耐多药结核分枝杆菌的吡嗪酰胺耐药及pncA基因突变分析

目的了解125株耐多药结核分枝杆菌对吡嗪酰胺(PZA)的耐药水平和pncA基因的突变特征,为PZA耐药的快速诊断提供依据。方法通过简单随机抽样方法选取2010—2019年福建省9个耐药监测点的125株耐多药菌株,采用BACTEC MGIT 960液体培养进行PZA药物敏感性试验(简称"药敏试验"),通过PCR扩增pncA目的基因,分析耐多药菌株对PZA的耐药性及pncA基因突变情况。结果 50株耐多药菌株对PZA耐药,PZA耐药率为40.0%(50/125)。男性患者PZA耐药率为39.0%(37/95),女性患者PZA耐药率为43.3%(13/30),差异无统计学意义(χ^(2)=0.183,P=0.669);15~25岁、26~45岁、46~60岁、61~80岁患者PZA耐药率分别为58.3%(7/12)、32.7%(16/49)、39.5%(17/43)、47.6%(10/21),PZA耐药率在年龄组之间的差异无统计学意义(χ^(2)=3.294,P=0.348);初治患者PZA耐药率为41.5%(21/65),复治患者PZA耐药率为38.3%(23/60),差异无统计学意义(χ^(2)=0.134,P=0.715)。30株PZA耐药菌株检出pncA基因突变,突变类型22种,突变检出率为60.0%(30/50);PZA耐药株的pncA基因突变检出率[60.0%(30/50)]高于PZA敏感株的pncA基因突变检出率[5.3%(4/75)],差异有统计学意义(χ^(2)=45.276,P=0.000)。结论福建省耐多药结核分枝杆菌的PZA耐药率较高,且pncA基因突变检出率较高,临床上应关注PZA的耐药问题。