高表达骨形态发生蛋白2小鼠骨髓间充质干细胞体系的构建及基因表达的研究

目的建立稳定高表达骨形态发生蛋白2(BMP-2)的小鼠骨髓间充质干细胞(BMSCs)体系。方法利用重组腺病毒载体Ad5-BMP-2-GFP将BMP-2基因转染到小鼠BMSCs中,倒置荧光显微镜下观察转染后细胞形态及生长情况,钙结节茜素红染色观察钙化斑的形成,RT-PCR检测转染后BMSCs中BMP-2基因的表达。结果重组腺病毒转染效率达80%,Ad5-BMP-2-GFP组21天后形成矿化钙结节,有明显目的基因(BMP-2)条带。结论建立了稳定高表达BMP-2的小鼠BMSCs体系,为后续研究BMP-2在小鼠BMSCs向成骨细胞分化过程中的作用提供了坚实基础。

TiO_2纳米管阵列/介孔分子筛药物载体的构建及体内外缓释性能的测定

目的构建新型TiO_2纳米管阵列/介孔分子筛药物载体,考察负载利福平(RFP)在家兔体内及模拟体液中的缓释性能。方法采用阳极氧化法及溶胶-凝胶法制备TiO_2纳米管阵列/介孔分子筛药物载体并对其进行表征,将60只家兔随机分成A组(口服药物组)、B组(TiO_2纳米管阵列载体载药组)、C组(TiO_2纳米管阵列介孔分子筛药物载体载药组),用柱前衍生化HPLC法检测负载药物在家兔体内和体外模拟体液中的释放性能。结果 TiO_2纳米管阵列介孔分子筛药物载体的孔容、载药量、比表面积较TiO_2纳米管阵列载体都有所提升。在体外环境下,TiO_2纳米管阵中的RFP在1～4d内释放率为91.71%,TiO_2纳米管阵列/分子筛复合型药物载体中的RFP在1～4d释放79.96%,6d后的释放率达到92.53%;在家兔体内环境下TiO_2纳米管阵列/分子筛复合型药物载体较TiO_2纳米管阵列载体中的RFP释放趋势更加平缓。结论一种新型的TiO_2纳米管阵列/介孔分子筛药物载体成功构建,具有良好的体内体外缓释性能及持久给药能力。

强直性脊柱炎患者骨代谢生化指标与BMP-2、RUNX-2基因表达的相关性研究

目的探讨强直性脊柱炎(AS)患者中骨代谢指标和骨形态发生蛋白2(BMP-2)、人类相关转录因子2(RUNX-2)对骨量减少或骨质疏松的内在机制。方法通过检测AS患者与健康对照组的骨密度(BMD),骨代谢指标[骨吸收指标骨钙素(BGP)I型强胶原羧基肽(PICP)、骨碱性磷酸酶(BALP)、抗酒石酸酸性磷酸酶(TRAP)],BMP-2及RUNX-2的水平,采用直线相关性分析骨代谢指标与BMP-2、RUNX-2表达的相关性。结果不同部位的骨密度发生不同程度的骨量减少和骨质疏松,除BGP外的AS患者血清中骨代谢指标及BMP-2、RUNX-2的表达较正常对照组比较,差异有统计学意义(P<0.05)。患病组转子间的BMD与BGP、BMP-2负相关(r=-0.369,P=0.017;r=-0.103,P=0.016),BMP-2、RUNX-2与腰椎BMD均呈现负相关(r=-0.143,P=0.011;r=-0.132,P=0.011),PICP与腰椎密度呈现正相关(r=0.365,P=0.024)。BMP-2与RUNX-2存在正相关(r=0.354,P=0.023),与TRAP存在负相关(r=-0.248,P=0.036),RUNX-2与BGP、BALP存在正相关(r=0.417,P=0.046;r=0.205,P=0.027),与TRAP存在负相关(r=-0.264,P=0.038)。结论 BMP-2、RUNX-2或许通过影响骨代谢过程,改变骨密度,导致AS的发生,为AS的治疗和预防提供深层的理论依据和临床基础。