非结核分枝杆菌病的实验室诊断技术进展

目前,非结核分枝杆菌(NTM)病的发病率在全球逐年提高,NTM与结核分枝杆菌均可引起肺部以及其他部位病变,而且临床症状相似,鉴别诊断困难,所以分枝杆菌菌种鉴定对于疾病的诊断、治疗及预后意义重大。传统生化鉴定方法费力耗时,不能很好地满足临床需要。近年来,以免疫层析技术为基础的MPB64抗原胶体金法、以色谱技术为基础的气相及高效液相色谱法、以基因探针、限制性片段长度多态性聚合酶链反应(PCR-RFLP)及PCR-基因测序方法为代表的分子生物学技术等各种新技术的引入,为NTM的菌种鉴定提供了更为科学的方法。作者就上述3种技术为基础开展的菌种鉴定方法,综合国内外近年来的文献,介绍了各种方法的原理、应用情况、性能指标等,同时对方法的优点及局限性进行初步评价。相信随着新技术不断完善,能够逐步形成快速可靠、成本低廉的标准化NTM菌种鉴定体系。

荧光探针熔解曲线法检测结核患者N-乙酰基转移酶2基因型分布的应用评价

目的 评价荧光探针熔解曲线法检测结核病患者芳基胺N-乙酰基转移酶2（arylamine N-acetyltransferases 2,NAT2）基因多态性的性能。方法 选取于2015—2016年到福州肺科医院和北京胸科医院确诊的初治结核病患者作为研究对象,分别为371例和355例。收集研究对象外周血标本。应用荧光探针熔解曲线法[分析NAT2基因rs1801280（341T→G）、rs1799929（481C→T）、rs1799930（590G→A）和rs1799931（857G→A）等4个单核苷酸多态性（SNP）]和DNA测序分析法[分析NAT2基因的rs1801279 （191G→A）、rs1041983 （282C→T）、rs1801280（341T→C）、rs1799929 （481C→T）、rs1799930 （590G→A）、rs1208 （803A→G）和1799931 （857G→A）的7个SNP位点]对研究对象进行NAT2基因型分析,并根据NAT2基因型进行NAT2代谢类型的推断分析。结果 荧光探针熔解曲线法分析4个SNP位点与DNA测序分析法分析7个SNP位点推断NAT2代谢类型的结果完全一致。荧光探针熔解曲线法从DNA制备、PCR扩增和熔解曲线分析的整个检测过程需要2.5 h。共检测到NAT2 ＊4/＊4、NAT2 ＊5/＊4、NAT2 ＊6/＊4、NAT2 ＊7/＊4、NAT2 ＊5/＊11、NAT2 ＊6/＊11、NAT2 ＊7/＊11、NAT2 ＊5/＊6、NAT2 ＊6/＊7、NAT2 ＊5/＊5、NAT2 ＊6/＊6、NAT2 ＊7/＊7、NAT2 ＊5/＊7等13种NAT2基因型。福州肺科医院的结核病患者NAT2基因快乙酰化、中间乙酰化和慢乙酰化类型分别占37.20%（138/371）、42.32%（157/371）和20.49%（76/371）;北京胸科医院的结核病患者中,快乙酰化、中间乙酰化和慢乙酰化类型分别占27.89%（99/355）、54.65%（194/355）、17.46%（62/355）;两组人群的乙酰化类型分布差异有统计学意义（χ2=11.37,P=0.003）。所有的快乙酰化代谢人群均携带NAT2 ＊4/＊4基因型[100.00%（237/237）],而慢乙酰化代谢人群主要携带NAT2 ＊6和NAT2 ＊7的单倍型[90.22% （249/276）]。结论 荧光探针熔解曲线法分析4个SNP位点检测NAT2基因型具有结果判读简便、准确、快速的优点,适用于中国地区人群的NAT2基因型的检测。

荧光探针熔解曲线法检测结核患者N-乙酰基转移酶2基因型分布的应用评价

目的评价荧光探针熔解曲线法检测结核病患者芳基胺N-乙酰基转移酶2（arylamine N-acetyltransfcrases 2，NAT2）基因多态性的性能。方法选取于2015—2016年到福州肺科医院和北京胸科医院确诊的初治结核病患者作为研究对象，分别为371例和355例。收集研究对象外周血标本。应用荧光探针熔解曲线法[分析NAT2基因rs1801280（341T→G）、rs1799929（481C→T）、rs1799930（590G→A）和rs1799931（857G→A）等4个单核苷酸多态性（sNP）]和DNA测序分析法[分析NAT2基因的rs1801279（191G→A）、rs1041983（282C→T）、rs1801280（341T→C）、rs1799929（481C→T）、rs1799930（590G→A）、rs1208（803A→G）和1799931（857G→A）的7个SNP位点]对研究对象进行NAT2基因型分析，并根据NAT2基因型进行NAT2代谢类型的推断分析。结果荧光探针熔解曲线法分析4个SNP位点与DNA测序分析法分析7个SNP位点推断NAT2代谢类型的结果完全一致。荧光探针熔解曲线法从DNA制备、PCR扩增和熔解曲线分析的整个检测过程需要2．5h。共检测到NAT2＊4／＊4、NAT2＊5／＊4、NAT2＊6／＊4、NAT2＊7／＊4、NAT2＊5／＊11、NAT2＊6／＊11、NAT2＊7／＊11、NAT2＊5／＊6、NAT2＊6／＊7、NAT2＊5／＊5、NAT2＊6／＊6、NAT2＊7／＊7、NAT2＊5／＊7等13种NAT2基因型。福州肺科医院的结核病患者NAT2基因快乙酰化、中间乙酰化和慢乙酰化类型分别占37．20％（138／371）、42．32％（157／371）和20．49％（76／371）；北京胸科医院的结核病患者中，快乙酰化、中间乙酰化和慢乙酰化类型分别占27．89％（99／355）、54．65％（194／355）、17．46％（62／355）；两组人群的乙酰化类型分布差异有统计学意义（χ^2=11．37，P=0．003o所有的快乙酰化代谢人群均携带NAT2＊4／＊4基因型[100．00％（237／237）]，而慢乙酰化代谢人群主要携带NAT2＊6和NAT2＊7的单倍型[90．22％（249／276）]。结论荧光探针熔解曲线法分析4个SNP位点检测NAT2基因型具有结果判读简便、准确、快速的优点，适用于中国地区人群的NAT2基因型的检测。