尿毒清颗粒治疗早期糖尿病肾病的疗效观察

目的:观察尿毒清颗粒治疗早期糖尿病肾病的临床疗效。方法:我院早期糖尿病肾病患者68例,随机分为对照组和治疗组各34例。两组均予ACEI(或ARB)降低尿蛋白,治疗组在ACEI(或ARB)基础上加用尿毒清颗粒。两组患者均治疗3个月。观察两组治疗前后糖化血红蛋白(Hemoglobin A1c,HbA1c)、血尿素氮(Blood urea nitrogen,BUN)、血肌酐(Serum creatinine,Scr)、尿白蛋白排泄率(Urine albumin excretion ratio,UAER)水平,并记录不良反应。结果:两组治疗后尿白蛋白排泄率较治疗前均显著下降,治疗组较对照组下降更明显,差别具有统计学意义(P<0.05)。两组治疗后HbA1c、BUN、Scr较治疗前下降,但差别无统计学意义。所有病例均无严重不良反应发生。结论:早期糖尿病肾病患者在常规西药治疗基础上,加用尿毒清颗粒治疗,可以延缓肾功能恶化,而且安全性好。

SIRT7对高糖环境下小鼠肾足细胞增殖、凋亡的影响及其机制

目的:探讨沉默信息调节因子7(SIRT7)对高糖环境下小鼠肾足细胞增殖、凋亡的影响及其机制。方法:在体外高糖条件下培养小鼠肾足细胞,构建SIRT7过表达载体(pcDNA3.1-SIRT7)和小干扰RNA-SIRT7(siRNA-SIRT7)干扰载体并转染小鼠肾足细胞,依据干预因素分组设计为空白对照组(Control)、高糖组(HG)、SIRT7过表达+高糖组(SIRT7 OE+HG)、SIRT7过表达阴性对照+高糖组(SIRT7 OE-NC+HG)、siRNA-SIRT7干扰+高糖组(siRNA-SIRT7+HG)、siRNA-SIRT7干扰阴性对照+高糖组(siRNA-SIRT7-NC+HG)。实时荧光定量RT-qPCR和免疫印迹验证SIRT7过表达和干扰效率。采用CCK-8法检测细胞的增殖活性,流式细胞术检测细胞凋亡,实时荧光定量RT-qPCR分析SIRT7的mRNA表达水平,免疫印迹检测小鼠肾足细胞功能蛋白Nephrin和Wnt/β-catenin信号通路相关蛋白的表达。结果:CCK-8检测结果显示,与Control组比较,HG组细胞的增殖活性下降(P<0.05),与HG组比较,siRNA-SIRT7+HG组细胞的增殖活性显著降低(P<0.05),而SIRT7 OE+HG组细胞的增殖活性增强(P<0.05);流式细胞术检测结果显示,与Control组比较,HG组细胞的凋亡率升高(P<0.05),与HG组比较,siRNA-SIRT7+HG组细胞的凋亡率显著升高(P<0.05),而SIRT7 OE+HG组细胞的凋亡率下降(P<0.05)。免疫印迹检测结果显示,与Control组比较,HG组Nephrin、Wnt5a和β-catenin蛋白表达下调(P均<0.05),与HG组比较,siRNA-SIRT7+HG组Nephrin、Wnt5a和β-catenin蛋白表达显著下降(P均<0.05),而SIRT7 OE+HG组Nephrin、Wnt5a和β-catenin蛋白表达显著升高(P均<0.05)。结论:高糖环境可抑制小鼠肾足细胞增殖并诱导凋亡、过表达SIRT7可逆转该作用,其机制可能与调控Wnt/β-catenin信号通路的活性有关。

脂联素调控微小RNA221／金属蛋白酶组织抑制因子3信号对高糖环境下小鼠肾系膜细胞增殖的抑制作用

目的探讨脂联素通过微小RNA221（miR-221）靶向调控金属蛋白酶组织抑制因子3（Timp3）基因对高糖诱导的小鼠肾系膜细胞增殖的影响及作用机制。方法在体外高糖条件下培养小鼠。肾系膜细胞，分别加入脂联素以及转染miR-221抑制物、miR-221模拟物、小干扰RNA-Timp3（Si—Timp3）等干预因素。根据实验目的及干预因素不同将细胞分组为：正常对照组、高糖组、高糖＋脂联素组、高糖＋miR-221抑制物转染组及转染对照组、Si-Timp3转染组及转染对照组、miR-221模拟物转染组及转染对照组、高糖＋脂联素＋miR-221模拟物转染组及转染对照组。噻唑蓝法检测细胞的增殖活性，实时荧光定量聚合酶链反应（RT—PCR）分析miR-221、Timp3的表达水平，Westernblotting法检测Timp3的蛋白表达，荧光素酶报告基因实验检测Timp3的3＇-UTR活性。两组间比较采用t检验。结果高糖组促进小鼠肾系膜细胞增殖明显，上调miR．221和抑制Timp3的表达（分别为3．20±0．28比1、0．67±0．07比1，t=13．69、8．35，均P〈0．05），而脂联素加人后该作用减弱（t=7．60、4．12，均P〈0．05）。与高糖＋miR-221抑制物对照组比较，转染miR-221抑制物后，Timp3的mRNA表达水平上调（0．78±0．03比0．38±0．04，t=14．57，P〈0．05），细胞增殖减弱。与Si．Timp3对照组比较，转染Si-Timp3后，细胞增殖活性增强（1．72±0．06比1．04±0．12，t=8．76，P〈0．05）。与高糖＋脂联素＋miR-221minie转染对照组比较，加入脂联素及转染miR-221模拟物后，Timp3的mRNA表达水平下降（O．72±0．09比1．40±0．06，t=10．93，P〈0．05），细胞增殖加强。结论高糖是诱导小鼠肾系膜细胞增殖、上调miR-221水平、抑制Timp3基因表达的重要因素，脂联素可逆转该作用，其机制可能是通过miR-221／Timp3途径，靶向负调控Timp3基因的表达来实现的。

腺苷酸活化的蛋白激酶通过SPl抑制下丘脑GT1—7神经元KiSS-1基因表达的机制研究

在GT1—7细胞用实时定量PCR检测腺苷酸活化的蛋白激酶（AMPK）对KiSS-1mRNA水平的影响．以报告基因技术检测KiSS-1基因启动子的活性，用Western印迹法检测AMPK对转录因子SPl蛋白表达及其在亚细胞中分布的影响。结果显示，AMPK能降低GT1-7细胞KiSS-1mRNA的表达水平，并能抑制KiSS-1基因的启动子活性；SP1能够增强KiSS-1基因的启动子活性；AMPK能够抑制SP1向细胞核的转位。提示AMPK可能通过抑制转录因子SP1的转位而降低KiSS-1基因的表达。