玳玳果黄酮降脂提取物4个效应组分的含量测定研究

目的建立HPLC法同时测定玳玳果黄酮降脂提取物4个效应组分新橙皮苷、柚皮苷、橙皮内酯水合物、枳属苷的含量。方法采用高效液相色谱法,色谱柱Lichrocart C18 柱(250 mm×4.6 mm,5 μm),以乙腈-0.2%醋酸水溶液为流动相;程序洗脱;检测波长284 nm;流速1.0 mL/min;柱温30 ℃;进样量10 μL。外标法同时测定提取物效应组分新橙皮苷、柚皮苷、橙皮内酯水合物、枳属苷的含量。结果玳玳果黄酮降脂提取物新橙皮苷、柚皮苷、橙皮内酯水合物、枳属苷的质量浓度分别在76.365~1 491.482 μg/mL(r=0.999 4),49.155~1 024.283 μg/mL(r=0.999 7),5.134~61.151 μg/mL(r=0.999 5),1.771~40.962 μg/mL(r=0.999 8)范围内呈良好的线性关系;平均回收率(n=6)分别为100.3%,102.2%,97.98%及95.16%;相对标准偏差分别为1.50%,1.79%,1.70%及2.42%。结论所建立的HPLC法同时测定提取物4个效应组分群含量的方法,可用于多指标定量监控玳玳果黄酮降脂提取物的质量。

玳玳果黄酮降脂提取物效应组分大鼠肝肠微粒体代谢特性研究

该文比较玳玳果黄酮降脂提取物效应组分新橙皮苷、柚皮苷在大鼠肝脏及肠道微粒体中的代谢差异,探讨效应组分在肝脏及肠道的Ⅰ相代谢特性。采用UPLC-MS/MS技术建立效应组分在肝肠微粒体Ⅰ相代谢孵育体系中的定量分析方法,并以差速离心法制备大鼠肝、肠微粒体,构建Ⅰ相代谢孵育体系,通过将各时间点药物剩余百分率的自然对数ln(X)对时间t作图计算代谢消除半衰期,比较效应组分的代谢特征。结果表明,所建立的UPLC-MS/MS定量分析方法专属性、标准曲线及线性范围良好,方法准确度与精密度、定量下限均符合规定,该方法能够满足大鼠肝肠微粒体Ⅰ相代谢孵育体系下效应组分的定量检测需要;大鼠肝微粒体Ⅰ相孵育体系中新橙皮苷代谢消除半衰期为(2. 20±0. 28) h,大于柚皮苷的底物消除半衰期(1. 97±0. 28) h,但差异无统计学意义;大鼠肠微粒体Ⅰ相孵育体系中新橙皮苷的代谢消除半衰期为(3. 68±0. 54) h,大于柚皮苷的底物消除半衰期(2. 26±0. 13) h,且差异有统计学意义(P<0. 05);提取物效应组分在肝微粒体中的消除半衰期均小于肠微粒体。该研究发现,玳玳果黄酮降脂提取物效应组分在大鼠肝、肠微粒体Ⅰ相代谢孵育体系中具有不同的消除半衰期,提示二者在大鼠肝脏及肠道中具有不同的代谢特征,肝脏可能为玳玳果黄酮降脂提取物效应组分的主要代谢部位,且提取物效应组分柚皮苷的Ⅰ相代谢强度大于新橙皮苷的代谢强度,推测导致该代谢特征差异的原因可能与黄酮苷B环羟基结合位点及甲氧基数量有关。为进一步指导玳玳果黄酮降脂提取物制剂的深度开发及临床开发应用等提供重要的实验依据。

玳玳果黄酮降脂提取物效应组分血浆蛋白结合特性研究

该文研究玳玳果黄酮降脂提取物效应组分与血浆蛋白的结合能力,并探讨通过改进传统超滤法计算血浆蛋白结合率的公式,提高试验结果的稳定性及可靠性。研究采用UPLC-MS/MS建立同时测定超滤液中提取物效应组分新橙皮苷和柚皮苷含量的定量分析方法;在优化的离心条件及孵育条件下,以超滤法传统公式计算血浆蛋白结合率,另引入校正因子(F)计算,比较经校正因子计算所得的血浆蛋白结合率结果的异同,评价提取物与大鼠血浆蛋白的结合能力。所建立的UPLC-MS/MS定量分析方法具备良好的专属性,标准曲线与线性范围、方法准确度与精密度、定量下限均符合有关规定,该方法能够满足大鼠血浆在经超滤管滤过后超滤液中的效应组分的定量检测需要。实验发现,效应组分新橙皮苷及柚皮苷与大鼠血浆蛋白结合率均在90%以上,且二者血浆蛋白结合表征出浓度依赖性,同时二者与大鼠血浆蛋白的结合能力无显著性差异。此外,在传统超滤法计算蛋白结合率时引入校正因子,可以较为有效地反映中药提取物多组分群影响误差,这一校正方式可为超滤法测定中药血浆蛋白结合能力方法学改进提供一个可参考的思路与实践方法。

玳玳果黄酮降脂提取物体内效应组分排泄动力学研究

目的建立同时测定大鼠尿液及粪便中提取物效应组分新橙皮苷和柚皮苷含量方法,研究大鼠口服玳玳果黄酮降脂提取物后的尿药排泄动力学及排泄特征。方法采用UPLC-MS/MS建立效应组分新橙皮苷及柚皮苷在大鼠尿液及粪便的定量分析方法,计算口服玳玳果黄酮降脂提取物后不同时间点新橙皮苷及柚皮苷在尿液及粪便中的排泄率,并以亏量法计算尿液中的消除半衰期及消除速率常数,评价大鼠口服玳玳果黄酮降脂提取物后尿药排泄动力学及排泄特征。结果所建立的UPLC-MS/MS定量分析方法专属性良好、标准曲线及线性范围良好,方法准确度与精密度、定量下限均符合有关规定,该方法能够满足大鼠尿液及粪便中效应组分的定量检测需要;口服72 h后,大鼠尿液中新橙皮苷、柚皮苷的平均累计排泄率分别为(1.76±0.76)‰和(1.39±0.57)‰;大鼠粪便中新橙皮苷、柚皮苷的平均累计排泄率分别为(52.45±6.30)%和(51.57±4.80)%;口服后效应组分新橙皮苷及柚皮苷在尿液及粪便中的排泄量分别在24~36 h和4~8 h达到峰值;72 h后仍有药物经尿液排泄,给药后24 h粪便累计排泄率便达坪值;亏量法计算得新橙皮苷消除速率常数为(0.080±0.021)·h-1,消除半衰期为(9.41±3.22)h,柚皮苷消除速率常数为(0.077±0.017)·h-1,消除半衰期为(9.51±2.97)h,新橙皮苷及柚皮苷的动力学参数间差异无统计学意义。结论口服给药后效应组分原形即通过粪便较快地排出体外,粪便排泄是效应组分排出体外的主要途径,新橙皮苷及柚皮苷经尿液排泄的特征无明显差异。