乙型肝炎病毒X蛋白通过DNMT3A诱导肝癌细胞RUNX3基因高甲基化

目的研究肝癌细胞中乙型肝炎病毒X蛋白(HBx)对抑癌基因Runt相关转录因子3(RUNX3)表达的影响及相关作用机制,探讨乙肝病毒促肝癌发生的表观遗传调控。方法HBx重组表达载体转染5-aza-CdR处理或未处理的Huh7、HepG2肝癌细胞,Western Blot及RT-qPCR检测RUNX3的表达,分析RUNX3基因启动子CpG岛甲基化水平。合成DNA甲基转移酶3A的小干扰RNA(siRNA_3A)单独转染或与HBx共转染,检测RUNX3的表达。PCR检测21例手术切除的肝细胞癌新鲜组织标本HBx表达情况,比较HBx阴性与HBx阳性组织样本间RUNX3的表达差异以及启动子甲基化程度。结果过表达HBx可导致肝癌细胞内RUNX3表达下调,且甲基转移酶抑制剂5-aza-CdR可完全阻断HBx对RUNX3的抑制作用。HBx诱导RUNX3基因启动子CpG岛发生高甲基化,但不影响DNA甲基转移酶的表达。siRNA_3A转染肝癌细胞后,RUNX3 mRNA与蛋白表达均显著上调;其与HBx共转染后,逆转了单独HBx对RUNX3的抑制作用。HBx阳性的肝癌组织中RUNX3mRNA表达水平较HBx阴性组低,且RUNX3启动子甲基化程度也相对较高。结论 HBx通过促进RUNX3启动子区域发生高甲基化而抑制其表达,且这一过程是由DNMT3A所介导的。

FERMT2在肝癌组织中的表达及其对肝癌细胞生长的调控

目的:观察fermitin家族同源蛋白2(FERMT2)在肝细胞癌(HCC)组织中的表达,并以体外实验分析FERMT2基因敲除对肝癌细胞生长及相关调控分子表达的影响。方法:采用real-time PCR及免疫组化实验检测FERMT2在HCC及癌旁正常肝组织中的表达情况;采用CRISPR/Cas9技术构建FERMT2基因敲除的稳定MHCC97H细胞系,通过WST-1法和流式细胞术比较其与野生型MHCC97H细胞活力、细胞周期和凋亡状态的改变,并采用Western blot检测相关调控蛋白的表达变化。结果:FERMT2在HCC组织中的mRNA和蛋白表达水平均显著高于癌旁组织,且FERMT2蛋白的高表达与HCC患者术后复发有关(P<0.05);成功构建了FERMT2基因敲除的稳定MHCC97H细胞系;与野生型细胞相比,FERMT2基因敲除后细胞活力明显减弱,S期细胞数量明显减少,细胞凋亡增加,且细胞内增殖细胞核抗原、细胞周期蛋白及细胞周期蛋白依赖性激酶2的表达均显著降低(P<0.05);细胞凋亡抑制因子survivin及Bcl2的表达也明显下降(P<0.05),并可检测到cleaved caspase-3。结论:FERMT2在肝癌组织中呈高表达,它可能通过调控细胞周期调节蛋白及抗凋亡蛋白的表达影响肝癌细胞的活力、细胞周期及凋亡,进而在肝癌形成及发展过程中发挥促癌作用。

先天性肾盂输尿管交界处梗阻术后肾脏形态及功能恢复的研究

目的 通过先天性肾盂输尿管交界处梗阻（UPJO）术后患儿的随访,了解患儿肾脏功能及形态的恢复情况,同时对随访应持续的时间,可能影响肾脏恢复的潜在因素进行探讨.方法 回顾性分析2012至2015年于我院行Anderson-Hynes术的病例42例,其中男30例,女12例,左侧35例,右侧7例,手术年龄2个月至10岁,平均手术年龄38.5个月,随访时间36～48个月,平均随访时间38个月.分析术后患儿病理学检测结果、彩超及利尿肾图结果.结果 肾实质梗阻性损伤病理分级：术前DRF＜35％患儿以Ⅱ级到Ⅲ级为主,Ⅰ级较少,DRF≥35％患儿中以Ⅰ级为主,Ⅱ级到Ⅲ级较少,术后1年Ⅰ级患儿DRF提高13.03％,Ⅱ级到Ⅲ级DRF提高7.97％.肾脏形态：肾皮质厚度、肾盂前后径（APD）、肾积水最深直径、肾脏最大纵截面面积等各项指标,术后6个月变化较术前差异有统计学意义（P＜0.001）,但术后第12个月还未达到稳定高峰,12～24个月之间有反复波动,予保守观察,未进行进一步处理,随后各项指标稳定提升,直至第36个月达到最高峰水平.肾脏功能：术后1年除了DRF有所提升外,GFR、半排时间、达峰时间、利尿肾图曲线变化较术前差异同样具有统计学意义.结论 对于UPJO术后患儿的随访时间建议应持续3年以上.肾实质的梗阻性损伤病理分级与残留的DRF具有一定相关性,可以作为预测肾脏恢复潜能指标.对于术后患儿恢复情况,除了APD、DRF外,还可以结合彩超及利尿肾图的其他指标进行综合判断.

腺苷酸环化酶相关蛋白2在肝细胞癌中的表达及意义

目的探讨腺苷酸环化酶相关蛋白2（CAP-2）在肝细胞癌（HCC）中的表达及其在HCC发生发展中的作用。方法采用逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）、蛋白免疫印迹（Western blot）和免疫组织化学染色方法检测CAP2在正常肝脏、肝硬化、早期HCC及进展期HCC组织中的表达情况。结果RT—PCR及Western blot显示，HCC组织中CAP2的表达明显升高，且进展期HCC较早期HCC升高的更为明显，而在正常肝及肝硬化组织中CAP2几乎不表达或仅有微弱表达。免疫组化染色检查结果与此相同，并且中低分化HCC的CAP2表达较高分化的HCC强。结论CAP2在HCC中是一个上调表达的基因，可能参与了HCC的多步骤发展过程，有望成为今后HCC诊断的一个有价值的分子标记物。