热休克肿瘤细胞抗原负载的树突状细胞对结肠癌小鼠的治疗作用

背景与目的:目前通过树突状细胞诱导机体抗肿瘤免疫已经成为肿瘤免疫治疗的一种重要途径,热休克处理肿瘤细胞可提高肿瘤细胞抗原负载的树突状细胞分化成熟,增强其体内抗肿瘤作用。本实验研究热休克肿瘤细胞抗原负载的骨髓来源的树突状细胞(dendritic cell,DC)对结肠癌小鼠的治疗作用。方法:20只小鼠随分为4组,将小鼠结肠癌细胞CT26热休克处理后超声破膜,以其细胞裂解液负载BALB/c小鼠骨髓来源的DC,观察DC诱导肿瘤特异性细胞毒性T淋巴细胞(cytotoxic Tlymphocyte,CTL)杀伤活性;并将DC接种于荷瘤小鼠皮下,观察其对肿瘤生长的抑制作用及对荷瘤小鼠生存期的影响。结果:与冻融抗原-DC组、DC组、PBS组相比,热休克抗原-DC诱导的CTL对CT26肿瘤细胞具有显著的杀伤作用,相同效靶比(P=0.00)下其肿瘤特异性细胞毒活性强于前者{(0.99±0.19)g vs.[(1.27±0.28)g、(2.19±0.35)g、(2.14±0.27)g],P均=0.00};用其进行免疫后对小鼠肿瘤的生长具有显著的抑制作用[(128±18)mm3vs.(313±52)mm3,P=0.04],并能显著延长荷瘤小鼠的生存时间{(57±7)d vs.[(40±3)d、(25±3)d、(24±3)d],P均=0.00}。结论:热休克肿瘤细胞抗原负载的树突状细胞对结肠癌小鼠具有显著的治疗效果。

CIK与DC细胞联合治疗145例晚期恶性实体瘤

目的研究细胞因子诱导的杀伤细胞(CIK)和树突状细胞(DC)联合治疗晚期肿瘤。方法从外周血分离单个核细胞,体外经GM-CSF和白细胞介素4(IL-4)诱导产生DC细胞,淋巴细胞经干扰素γ(IFN-γ)、IL-2、CD3单抗和IL-1α体外诱导产生CIK细胞,采用流式细胞术检测CIK的表型,并回输患者进行治疗,至少接受3次治疗。结果82例可评价病灶的患者中,3例完全缓解(CR),7例部分缓解(PR);31例不可评价病灶的患者中,7例患者胸腹水消失,与治疗前相比,治疗后患者CD3+和CD8+明显升高(P<0.05)。结论CIK细胞治疗晚期恶性实体瘤有一定的临床疗效,为该类患者的治疗提供一种有效的免疫治疗手段。

乳腺癌患者循环肿瘤细胞检测的临床意义

目的探讨流式细胞术检测乳腺癌患者外周血循环肿瘤细胞(circulating tumor cells,CTCs)的临床意义。方法经梯度稀释后的乳腺癌细胞SKBR-3加入到正常人外周血单个核细胞中,以检验流式细胞术检测CTCs的敏感性。取福建省肿瘤医院2012-03-27-2012-12-26收治的62例乳腺癌患者和同期体检的20名健康女性志愿者7.5mL外周血,分离其单个核细胞,应用流式细胞术进行CTCs检测。结果流式细胞术检测CTCs的敏感性为10-6,特异性为100%。62例乳腺癌患者外周血CTCs阳性率为53.2%(33/62),20名健康女性志愿者CTCs均为阴性,差异有统计学意义,χ2=17.814,P<0.001。乳腺癌患者外周血CTCs阳性率与TNM分期(χ2=9.637,P=0.002)、Ki-67(χ2=7.839,P=0.005)和人类表皮生长因子受体2(human epidermal growth factor receptor 2,HER-2,χ2=7.629,P=0.006)表达与否相关,而与月经状态、雌激素受体(estrogen receptor,ER)、孕激素受体(progestrone receptor,PR)表达与否无关。CTCs阳性率与乳腺癌患者分子亚型相关,χ2=16.862,P=0.001。化疗前乳腺癌患者CTCs阳性率为72.7%(24/33),化疗后CTCs阳性率为30.3%(10/33),差异有统计学意义,P=0.003。结论应用流式细胞术检测乳腺癌患者外周血CTCs具有较高的敏感性和特异性。乳腺癌患者外周血CTCs的阳性率与临床TNM分期、HER-2及Ki-67相关。乳腺癌分子亚型可能与外周血微转移的风险有关。

小鼠脾脏自然杀伤性树突细胞纯化方法的比较

目的比较流式细胞分选技术(FACS)及免疫磁珠分选技术(MACS)对小鼠脾脏自然杀伤性树突细胞NKDC分选纯化的效率,为自然杀伤性树突细胞的深入研究创造基本条件。方法 制备小鼠脾脏单细胞悬液,细胞悬液经70μm细胞滤膜过滤,离心滤液,用红细胞裂解液裂解沉淀中的红细胞,用缓冲液洗涤两次后通过FACS和MACS分选方法各自分选其脾脏表型为NK1.1+CD11c+的自然杀伤性树突细胞NKDC。结果 分选之前小鼠脾脏NK1.1+CD11c+自然杀伤性树突细胞占3.3%。单细胞悬液经FACS分选的NKDC纯度为(90.2±2.0)%,回收率为(91.3±1.8)%,细胞活力(82.5±1.2)%;经MACS分选纯度为(70.5±3.0)%,回收率为(80.5±1.7)%,细胞活力为(60.2±0.8)%。两种方法分选NKDC细胞纯度差异有统计学意义(P=0.03),回收率差异也有统计学意义(P=0.02)。结论 FACS较MACS可更高效、快捷、简便地纯化小鼠脾脏自然杀伤性树突细胞。

热处理肿瘤细胞抗原负载树突细胞抗小鼠结肠癌效应

研究了热处理肿瘤细胞抗原负载骨髓来源的树突细胞(dendritic cell,DC)对结肠癌小鼠的治疗作用.将小鼠结肠癌细胞CT26热处理后超声破膜,以其细胞裂解液负载BALB/c小鼠骨髓来源的DC,观察DC诱导肿瘤特异性细胞毒性T淋巴细胞(cytotoxic T lymphocyte,CTL)杀伤活性;并将DC接种于荷瘤小鼠皮下,观察其对肿瘤生长的抑制作用及对荷瘤小鼠生存期的影响.发现致敏DC诱导的CTL对CT26肿瘤细胞具有显著的杀伤作用.用致敏DC免疫小鼠后,对小鼠肿瘤的生长具有显著的抑制作用,并能显著延长荷瘤小鼠的生存时间.热处理肿瘤细胞抗原负载的树突细胞对结肠癌小鼠具有显著的治疗效果.