电针抑制局灶性脑缺血损伤大鼠皮质细胞自噬的实验研究

目的:观察电针"曲池"、"足三里"穴对缺血再灌注(MCAO)大鼠皮质神经细胞PI3K-mTOR信号通路的影响。方法:参考Koizumi线栓法构建MCAO大鼠模型,电针"曲池"、"足三里"穴干预后,TTC染色观察梗死体积,采用Western blot检测细胞自噬标志蛋白Atg4、LC3B,以及自噬相关信号分子PI3K、mTOR蛋白的表达水平。结果:TTC染色显示电针减少了MCAO大鼠脑梗死体积;电针抑制了LC3BⅠ向LC3BⅡ的转化;与模型组相比,电针组Atg4表达下降,而PI3K和mTOR蛋白表达水平升高。结论:电针"曲池"、"足三里"治疗3天抑制细胞自噬相关分子,其可能机制电针激活了PI3K-mTOR信号分子。

腰椎导引术治疗腰椎间盘突出症康复期患者30例临床观察

目的观察腰椎导引术治疗腰椎间盘突出症康复期患者的临床疗效。方法 60例患者用随机数字表法分为治疗组和对照组,每组各为30例,治疗组采用腰椎导引术,对照组采用十一五规划教材中推拿手法。疗效评价方法:①视觉模拟测试表(VAS);②JOA评定量表。结果①1个疗程后,2组VAS评分治疗前后比较均有显著差异(P<0.05),组间比较无显著性差异;3个月后电话随访,2组VAS比较有显著疗效(P<0.05);②1个疗程,JOA评分比较2组治疗前后比较均有显著的疗效(P<0.05),治疗组优于对照组(P<0.05)。结论腰椎导引术明显改善腰椎间盘突出症康复期患者疼痛症状,提高生活能力。

芍药苷促椎间盘纤维环细胞增殖的作用

背景:芍药在颈椎病治疗中使用频率超过30%,其主要单体之一芍药苷具有抗炎、抗凋亡等作用,芍药苷对椎间盘纤维环细胞是否有保护作用,国内外未见报道。目的:探讨芍药苷对椎间盘纤维环细胞的增殖和保护作用。方法:采用酶消化法体外培养椎间盘纤维环细胞。取第3代纤维环细胞,培养过程中加入20μg/LFas配体诱导建立纤维环细胞凋亡模型,通过MTT法测定芍药苷干预纤维环细胞的最适宜浓度,AnnexinV/FITC-PI法观察芍药苷对椎间盘纤维环细胞的保护作用。结果与结论:芍药苷浓度20.8和2.08μmol/L对椎间盘纤维环细胞具有明显的促增殖作用。20μg/LFas配体能诱导细胞凋亡,20.8μmol/L芍药苷对Fas配体诱导椎间盘纤维环细胞有保护作用。

桂枝加葛根汤对大鼠颈椎间盘纤维环细胞超微结构的影响

目的观察桂枝加葛根汤对大鼠颈椎间盘纤维环细胞超微结构的影响。方法采用贴壁筛选法分离培养大鼠颈椎间盘纤维环细胞,通过桂枝加葛根汤进行干预,利用光镜和电镜观察未干预和桂枝加葛根汤含药血清不同浓度干预后纤维环细胞的细微和超微结构变化特点。结果光镜观察显示纤维环细胞大部分不规则多角形,少量呈星形,表面突起丰富;细胞核大而完整,为椭圆形;电镜观察结果显示:经不同浓度含药血清干预后,空白组细胞形态各异,大多呈椭圆形;细胞核大,偏位且不规则,异染色质散在,部分线粒体空泡化,粗面内质网扩张;中药低剂量组见线粒体增多、浓缩密度增高,胞质内粗面内质网扩张,偶见脂滴或糖原;中药中剂量组见内质网扩张增多,密度增高,可见较多中等密度的蛋白质沉淀,线粒体增多,密度增高呈不规则囊状,细胞核大小不一;中药高剂量组见粗面内质网增多,扩张明显,镜下见较多高电子密度的蛋白质沉淀,核偏位,可见较多线粒体和分泌颗粒。结论纤维环细胞经过不同浓度桂枝加葛根汤含药血清干预后的超微结构表现为:(1)中药中、高剂量组细胞内粗面内质网较空白组及低剂量组明显增多,出现电子密度较大的蛋白质沉淀,以高剂量组最为明显;(2)桂枝加葛根汤在防止因纤维环细胞退变而引起的超微结构改变中起重要的作用。

葛根素保护大鼠颈椎间盘纤维环细胞的最佳浓度

背景:葛根素能抑制椎间盘纤维环细胞凋亡,在一定程度上延缓椎间盘退变。目的:观察最佳浓度葛根素对大鼠颈椎间盘纤维环细胞的保护作用。方法:用不同质量浓度Fas配体(5,20,50μg/L)诱导大鼠颈椎间盘纤维环细胞凋亡,用流式细胞仪Annexin V–FITC-PI双染法检测纤维环细胞凋亡情况,通过MTT法和流式细胞仪观察不同质量浓度葛根素(0.01,0.1,1g/L)对纤维环细胞的保护作用。结果与结论:5μg/LFas配体诱导的纤维环细胞存活率及早期凋亡率与胎牛血清对照组比较差异无显著性意义(P>0.05),20μg/L及50μg/LFas配体组纤维环细胞存活率及早期凋亡率高于胎牛血清对照组(P<0.01),且随着Fas配体质量浓度的增加,大鼠成熟纤维环细胞活性比例逐渐降低,而早期凋亡率逐渐增加。3种浓度的葛根素作用20μg/LFas配体诱导的纤维环细胞,随着葛根素质量浓度的增加,纤维环细胞存活比例逐渐增加,而早期凋亡率逐渐减少(P<0.01)。结果提示:①Fas配体能够诱导大鼠颈椎间盘纤维环细胞凋亡,增加大鼠成熟颈椎间盘纤维环细胞的凋亡率。②3种质量浓度葛根素均有抑制椎间盘纤维环细胞死亡作用,且呈剂量依赖型。③葛根素对大鼠颈椎间盘纤维环细胞有明显保护作用。

复方三七消痛软膏超声导入对兔膝骨性关节炎治疗作用及机制研究

目的:探讨复方三七消痛软膏用超声波(US)导入对兔KOA疗效及其作用机制。方法:将4月龄新西兰大白兔40只按随机数字表法分为复方三七消痛软膏超声波导入组(A组)、普通US组(B组)、舒筋止痛水外擦组(C组)、假US组(D组)和正常对照组(E组)各8只,除E组外各组动物均行双侧前交叉韧带离断术造模。6周后A、B、C、D组分别给予复方三七消痛软膏超声波导入普通US、假US、舒筋止痛水外擦干预10 d,E组不给予任何干预。干预后软骨切片HE染色光镜观察形态结构及Mankin评分;采用TUNEL法检测软骨细胞凋亡阳性比率;采用TUNEL法检测软骨细胞凋亡阳性率,Western-blot技术检测软骨细胞caspase-9、caspase-3蛋白水平表达。结果:A组关节软骨病变明显轻于B、C、D组但较E组严重;A组Mankin评分低于B、C、D组、高于E组,差异有统计学意义。干预后A组软骨细胞凋亡阳性率以及caspase-9和caspase-3蛋白表达均低于B、C、D组,高于E组,差异有统计学意义。结论:复方三七消痛软膏超声波导入能更好地延缓KOA软骨退变,其机制可能是通过抑制caspase-9和caspase-3表达从而抑制软骨细胞凋亡实现。

电针对大鼠早期局灶性脑缺血再灌注损伤细胞凋亡机制的研究

目的:探讨电针刺激对大鼠早期局灶性脑缺血再灌注损伤细胞凋亡的机制。方法:选用96只雄性SD大鼠,随机分为假手术组、模型组、电针组各32只。采用改良Longa线栓法制作缺血再灌注大脑中动脉闭塞(MCAO)大鼠模型,电针组于脑缺血再灌注2h后开始电针患侧"曲池"、"足三里"穴。各组于术后24h行神经行为学评分,TUNEL法检测脑组织细胞凋亡,免疫印迹法及逆转录PCR法检测脑组织细胞凋亡相关蛋白Bcl-2,Bax的表达,ELISA检测血清BDNF的变化。结果:脑缺血再灌注24h后,电针组大鼠神经行为学评分较模型组差异有显著性,且脑组织中TUNEL阳性细胞数明显降低(P<0.05);与模型组相比,电针组Bcl-2表达增高,Bax表达下降;模型组与电针组血清脑源性神经营养因子(BDNF)水平较假手术组相比均明显下降,但电针组较模型组有进一步的升高,差异有显著性意义(P<0.05)。结论:电针刺激可抑制脑组织中Bax的表达,提高Bcl-2,BDNF的作用,对抗脑缺血再灌注损伤所致的细胞凋亡,达到加速神经功能恢复的目的。

HDAC9基因SNPs与大动脉粥样硬化缺血性卒中的相关性研究

目的探讨组蛋白去乙酰化酶9(histone deacetylase 9,HDAC9)在动脉粥样硬化缺血性卒中易感区域单核苷酸多态性(single nucleotide polymorphisms,SNPs)与基因型和生物学表型的相关性。方法利用Haploview软件和千人基因组计划提供的遗传学数据,对HDAC9基因SNPs位点的最小等位基因频率(minor allele frequency,MAF)、单体域和单体型以及标签SNPs(haplotype tagging SNPs,ht SNPs)进行分析。结果在HDAC9基因Chr7:18930kb-19020kb区域共测定75个SNPs,其中Hardy-Weinberg平衡P>0.05,且MAF P>0.05的SNPs共51个。基于confidence intervals,four Gamete rule和solid spine of LD算法分别构建了11、14和8个单体域,其中rs2717356位点连锁不平衡程度低,且不在单体域内,属于HDAC9基因的重组热点区域。取r2≥0.8,且LOD值≥3.0确定30个SNPs为ht SNPs,且MAF均大于0.10;在ht SNPs中发现rs2526630位点[C/T]位于HDAC9的3'UTR区域,与hsa-mi R-545,hsa-mi R-616等micro RNAs结合。结论 30个标签ht SNPs作为人群HDAC9基因易感SNPs位点筛查和重复验证的依据。HDAC9基因rs2526630位点影响与mi RNA的结合在动脉粥样硬化缺血性卒中的发病中可能相关。

对大学生不同心理状态ERP P300成分差异性的调查研究

目的 :探讨大学生不同心理状态ERP(Event Related Potential,ERP,相关电位)中P300成分的差异,为防治大学生抑郁症提供依据。方法 :对我校2010级临床医学康复专业的122例大三学生的心理资料进行回顾性研究。我们使用汉密尔顿抑郁量表对这122例学生进行了心理状况调查,并将调查结果为患有抑郁症的22例学生作为抑郁组,同时随机选取22名调查结果为正常的学生作为对照组。使用GO-NO-GO刺激程序对这两组学生进行ERP P300成分测定,然后比较两组学生ERP P300成分的差异性。结果 :抑郁组大学生ERP P300成分的潜伏期显著高于正常组大学生(P<0.0.5),其ERP P300成分的峰值明显低于对照组大学生(P<0.0.5)。结论 :对大学生进行ERP P300成分检测可有效地发现其存在的抑郁心理状态,从而为对其进行早期治疗提供依据。

腰椎间盘退变动物模型的研究

腰椎间盘突出症是影响人类健康的常见病和多发病，其根本病理变化是椎间盘退变．椎间盘退变的确切病因及病理生理机制目前仍不十分清楚。为深人探讨椎间盘退变的病因及病理生理机制，有必要建立椎间盘退变动物模型，

桂枝加葛根汤对纤维环细胞的影响

目的：探讨颈椎病的发病机理及桂枝加葛根汤防治该病的作用机制。方法：采用自制桂枝加葛根汤大鼠含药血清，对培养的椎间盘纤维环细胞进行不同浓度的药物干预，光镜和电镜观察未干预和桂枝加葛根汤含药血清不同浓度干预后纤维环细胞的细微和超微结构特点，利用荧光定量PCR检测椎间盘纤维环中主要蛋白多糖AggreeanmRNA的表达变化情况。结果：电镜观察结果显示，空白组细胞形态各异，大多呈椭圆形，部分线粒体空泡化，粗面内质网扩张；低剂量组见线粒体增多、浓缩密度增高，胞质内粗面内质网扩张，偶见脂滴或糖原；中剂量组见内质网扩张增多，密度增高，可见较多中等密度的蛋白质沉淀，线粒体增多；高剂量组见粗面内质网增多，扩张明显，镜下见较多高电子密度的蛋白质沉淀，可见较多线粒体及分泌颗粒；荧光定量PCR检测结果显示，中、高剂量组AggrecanmRNA表达的Ct值明显高于空白组fP〈0．05），低剂量组Ct值与空白组比较无明显差异，而高剂量组Ct值明显高于中剂量组（P〈0．05）。结论：（1）中、高剂量组细胞内出面内质网较空白组及低剂量组明显增多，出现电子密度较大的蛋白质沉淀，以高剂量组最为明显；（2）中、高剂量组桂枝加葛根汤大鼠含药血清能增强纤维环细胞AggrecanmRNA的表达，高剂量组效果最为明显；（3）桂枝加葛根汤在防止因纤维环细胞而引起的椎间盘退变具有重要作用。

应用逆向工程技术测量人膝关节内外侧间室间隙和体积

背景:膝关节是人体骨骼中形态及结构最为复杂的部分,临床上常使用X射线片反映膝关节间隙狭窄程度。但X射线片是将三维的关节结构进行二维投射,因此关节拍摄定位的不同会影响测量结果,很难保证重复测量的准确性。目的:建立膝关节间隙三维模型并测量其距离和体积,为后续的模型、生物力学及相关临床研究提供基础。方法:基于逆向工程原理,采用膝关节CT断层图像,使用Mimics进行膝关节和内侧间室三维结构重建,最后导入Geomagic Studio对模型进行光滑处理并计算膝关节内、外侧间室体积。结果与结论:利用膝关节CT断层图像分别重建出膝关节三维模型的骨性结构如股骨、胫骨、腓骨,并成功构建出膝关节间隙模型。构建的膝关节三维模型和间隙模型可以任意角度或单独观察,并可以进行体视学测量。发现膝关节内外侧间隙虽然距离有差异,但体积接近,说明通过计算膝关节内、外间室的体积,可以全面的反映膝关节间隙的狭窄程度。

葛根素对大鼠颈椎间盘纤维环细胞凋亡的影响

目的:观察不同浓度葛根素对白细胞介素-1β(IL-1β)诱导的大鼠颈椎间盘纤维环细胞凋亡率及凋亡因子B淋巴细胞瘤-2(B-cell lymphoma-2,Bcl-2)基因与胱天蛋白酶-3(Caspase-3)的影响。方法:对大鼠颈椎间盘纤维环细胞进行体外培养3代,鉴定成功后分为5组:对照组,模型组,葛根素低、中、高浓度组。除对照组外,其余4组均给予10ng/m L IL-1β诱导细胞凋亡,同时葛根素低、中、高浓度组分别予以125、250、500μmol/L的葛根素进行干预,24h后用流式细胞仪检测各组纤维环细胞凋亡率,Western blot检测凋亡调控基因Caspase-3和Bcl-2蛋白表达。结果:葛根素能抑制IL-1β诱导的椎间盘纤维环细胞凋亡。Caspase-3蛋白表达水平比较:与对照组比较,模型组显著升高(P<0.05);与模型组比较,3个给药组均显著降低(P<0.01,P<0.05),且随着葛根素浓度的提高表达减弱,葛根素高浓度组与葛根素低、中浓度组比较差异均有统计学意义(P<0.05)。3个给药组Bcl-2蛋白表达水平均显著高于对照组和模型组,差异具有统计学意义(P<0.01)。结论:一定浓度葛根素能够有效地抑制大鼠颈椎间盘纤维环细胞的凋亡,其途径可能是通过上调抗凋亡因子Bcl-2,下调促凋亡因子Caspase-3蛋白的表达。

针刺委中穴对慢性腰痛患者疼痛的疗效分析

目的：观察针刺委中穴对慢性腰痛患者疼痛症状的影响。方法：将福建中医药大学附属康复医院针灸科门诊自2014年2月～2015年1月就诊并确诊为慢性腰痛的患者90例随机分为试验组和对照组各45例，均给予针刺双侧肾俞及大肠俞，试验组加取双侧委中穴，对照组则加取双侧委中穴内侧旁开1．5cm处的非穴位点，观察两组患者VAS评分的变化情况。结果：治疗2周后，观察组VAS评分降低幅度显著大于对照组（P〈0．05）。结论：针刺委中穴可有效改善慢性腰痛患者的疼痛症状。