银杏叶复方制剂对实验性脾虚证模型小鼠内脏器官发育及其抗氧化酶活性的影响研究

采用利血平复制脾虚证小鼠模型,观察银杏叶复方制剂对实验性脾虚证模型小鼠内脏器官发育及其抗氧化酶活性的影响。结果表明,①银杏叶复方组小鼠胃、肾的指数较脾虚模型组有所提高但差异不显著(P>0.05);银杏叶复方组小鼠小肠、脾的指数显著高于脾虚模型组(P<0.05),与对照组差异不显著(P>0.05);脾虚模型组小鼠的肝、肺指数显著高于银杏叶复方组(P<0.05),银杏叶复方组小鼠的肝、肺指数与对照组差异不显著(P>0.05),提示银杏叶复方有促进脾虚小鼠脾胃发育和促进肝脏的解毒作用,对脾虚模型小鼠的肾、肺功能亦有改善作用。②银杏叶复方组小鼠脾脏、肾脏中MDA含量较脾虚模型组显著降低(P<0.05),而肝脏组织中SOD和GSH-Px含量较脾虚模型组显著提高(P<0.05),同时脾脏、肾脏和肝脏中T-AOC含量较脾虚模型组显著提高(P<0.05)。提示银杏叶复方对脾虚小鼠的脾脏、肾脏和肝脏的功能有良好的保护作用。

新型兽医人才培养模式的探究与实践

针对动物医学专业人才培养中存在的问题,龙岩学院立足专业特点,提出应与企业深度紧密合作培养新型兽医人才,校企双方共同制订人才培养方案,实行"双导师制",构建教学、科研、生产、培训为一体的"3+1"复合型、应用型人才培养模式。实践证明,学生的学习积极性明显增强,实践能力、就业能力和综合素质明显提高,社会认可度不断提升,同时,还促进了"双师型"教师的培养,实现了学校、学生和企业的共赢。

茶树精油对断奶仔猪生长性能、抗氧化能力、免疫功能以及肠道屏障功能的影响

本试验旨在研究茶树精油(TTO)对断奶仔猪生长性能、抗氧化能力、免疫功能及肠道屏障功能的影响。选取21日龄断奶仔猪150头,随机分为5组,每组3个重复,每个重复10头。对照组饲喂基础饲粮,各TTO组分别在基础饲粮中添加25、50、100、200 mg/kg TTO,饲喂28 d后测定其生长性能指标、血浆抗氧化和免疫指标。而后根据生长性能与血浆抗氧化和免疫指标结果选择对照组和50 mg/kg TTO组进行肠黏膜抗氧化与免疫指标的检测,苏木精-伊红(HE)染色切片观察肠道组织结构,16S rDNA测序分析肠道菌群结构。结果显示:1)各TTO组的料重比均极显著低于对照组(P<0.01),各TTO组间无显著差异(P>0.05),但以50 mg/kg TTO组料重比最低。2)与对照组相比,25、50、100、200 mg/kg TTO组血浆中谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)的含量极显著升高(P<0.01),丙二醛(MDA)的含量极显著降低(P<0.01)。3)50、100、200 mg/kg TTO组血浆中免疫球蛋白G(IgG)的含量极显著高于对照组(P<0.01);25、200 mg/kg TTO组血浆中免疫球蛋白M(IgM)的含量极显著高于对照组(P<0.01),同时100 mg/kg TTO组显著高于对照组(P<0.05)。4)与对照组相比,50 mg/kg TTO组回肠绒毛隐窝比极显著升高(P<0.01)。5)与对照组相比,50 mg/kg TTO组十二指肠、回肠黏膜中还原型谷胱甘肽(GSH)的含量极显著升高(P<0.01),十二指肠、空肠黏膜中GSH-Px的含量极显著升高(P<0.01),回肠黏膜中超氧化物歧化酶(SOD)的含量极显著升高(P<0.01),空肠、回肠黏膜中MDA的含量极显著降低(P<0.01)。6)50 mg/kg TTO组十二指肠及回肠黏膜中分泌型免疫球蛋白A(sIgA)的含量极显著高于对照组(P<0.01)。7)在门水平上,50 mg/kg TTO组十二指肠中厚壁菌门(Firmicutes)的相对丰度显著高于对照组(P<0.05),变形菌门(Proteobacteria)的相对丰度显著低于对照组(P<0.05);在属水平上,50 mg/kg TTO组十二指肠和回肠中梭状芽孢杆菌属(Clostridium)的相对丰度极显著高于对照组(P<0.01),十二指肠、回肠和盲肠中克雷伯氏菌属(Klebsiella)的相对丰度均显著低于对照组(P<0.05);50 mg/kg TTO组在氨基酸代谢、辅因子和维生素代谢、萜类化合物和聚酮酸的代谢等功能上较对照组极显著增强(P<0.01)。综上可知,在饲粮中添加TTO可以提高断奶仔猪的生长性能,提升机体的抗氧化能力和免疫功能,增强肠道屏障功能,提升仔猪的健康水平。

人外周血巨噬细胞培养及功能鉴定

目的：从人外周血单个核细胞（PBMC）中分离单核细胞,诱导分化成巨噬细胞并鉴定其功能。方法：应用免疫磁珠法从人外周血单个核细胞中分选CD14^＋单核细胞,分离后的细胞用流式细胞仪检测其纯度,用含有10%人AB血清和10 ng/ml人M-CSF的IMDM培养基体外培养CD14^＋单核细胞,诱导分化成巨噬细胞,并进行形态特征和吞噬功能鉴定。结果：免疫磁珠法能从外周血中分离到高纯度的CD1^4＋单核细胞,分选前CD14阳性率为10%,分选后CD14阳性率为85.8%。诱导培养7天后巨噬细胞的直径最大可达40~45μm,大部分细胞呈煎蛋状,能有效地吞噬淋巴瘤Raji细胞。结论：从外周血中分离了高纯度的CD14^＋单核细胞,诱导形成的巨噬细胞具有吞噬淋巴瘤细胞的功能。

某规模化猪场猪伪狂犬gE和gB抗体的检测与分析

[目的]了解龙岩市某规模化猪场猪伪狂犬野毒感染状况和免疫抗体水平.[方法]采用ELISA法对2010～2013年该场采集的种猪和育肥猪群的血清样品共1 217份进行猪伪狂犬野毒（gE）抗体和免疫（gB）抗体检测.[结果]种猪与育肥猪猪伪狂犬野毒总样品阳性率分别为13.5％和28.4％,其中60～ 100日龄的育肥猪总样品阳性率为5.2％,100 ～210日龄的总样品阳性率为42.1％;种猪伪狂犬免疫抗体总样品阳性率分别为92.2％,60 ～160日龄的育肥猪猪伪狂犬免疫抗体阳性率呈波动变化,血清样品总阳性率为50％.[结论]该猪场育肥猪群野毒感染率较种猪群高,且100日龄以后的育肥猪群野毒感染率较高,种猪群的免疫抗体水平高于育肥猪群,80～130日龄育肥猪免疫抗体水平较低.

副猪嗜血杆菌PCR检测方法的建立与初步应用

针对副猪嗜血杆菌(Haemophilus parasuis,HPS)16 S rRNA序列设计1对特异性引物,能扩增出821 bp的特异性DNA片段,并据此建立了快速准确鉴定副猪嗜血杆菌PCR方法,临床试验证明该方法具有很好的特异性和敏感性。13份疑似病料检测结果表明,PCR检测结果与传统生化鉴定结果符合率为100%。结果表明已成功建立了副猪嗜血杆菌PCR检测方法,并可应用于临床副猪嗜血杆菌的检测。

猪瘟与高致病性蓝耳病混合感染的诊断及病原特性分析

[目的]诊断由猪瘟病毒(CSFV)、猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)和猪伪狂犬病毒(PRV)引发的猪疫病,并分析病原。[方法]采集福建某猪场发病猪的组织器官,提取病毒DNA或RNA,PCR检测病毒感染。采用ELISA方法检测CSFV、PRRSV和PRV的感染情况。[结果]测序分析和ELISA结果表明,猪场存在PRRSV、CSFV、PRV3种病毒感染。[结论]该次猪病疫情主要是由CSFV和高致病性PRRSV混合感染引起。

仔猪先天性震颤的病原学调查及其病原特性分析

应用PCR方法对临床收集的8个猪场仔猪先天性震颤病例8例进行CSFV、PCV-2和PPV检测,结果 CSFV阳性率为87.5%,PCV-2阳性率为87.5%,PPV阳性率为37.5%。其中CSFV、PCV-2和PPV混合感染率为25.0%,CSFV和PCV-2混合感染率为50.0%,CSFV和PPV混合感染率为12.5%。序列分析结果显示:7株CSFV的E2基因之间核苷酸序列差异很小,同源性为99.0%～100%,与Alfort株同源性为95.1%～96.2%,与猪瘟兔化弱毒株(HCLV)和石门株(Shimen)的同源性为83.3%～84.7%。5株PCV-2 Cap基因之间核苷酸序列差异很小,分离的同源性为98.9%～100%,与Genbank发布的标准序列的同源性为98.7%～99.4%;3株PPV VP2基因之间核苷酸序列差异也很小,同源性为99.4%～99.6%,与Genbank发布的标准序列的同源性为99.0%～99.8%。PRV动物接种试验结果显示:8个病例的病料组织悬液接种家兔,家兔表现正常,PRV野毒感染试验阴性。

猪瘟继发感染猪链球菌病的诊断

上杭某规模化猪场出现产房仔猪和保育仔猪发病,发病率高达50%。通过对送检的6头活体病猪剖检,采集病猪的病料组织进行实验室的PCR诊断及细菌分离,确诊该病例为猪瘟继发猪链球菌病。同时检测该猪场20份母猪血清和发病仔猪的猪瘟抗体和伪狂犬野毒抗体,结果母猪和仔猪的伪狂犬野毒抗体都阴性,但母猪的猪瘟抗体合格率只有70%,仔猪只有2头猪瘟抗体合格,表明母猪群体低水平猪瘟抗体无法对仔猪提供足够的保护力,导致仔猪易发生猪瘟,并继发感染其他疫病。

鹰嘴豆芽素A通过PPARα/γ抑制脂多糖诱导猪外周血单个核细胞炎性细胞因子的分泌

目的:研究鹰嘴豆芽素A对脂多糖(Lipopolysaccharide,LPS)诱导猪外周血单个核细胞分泌炎性细胞因子的影响。方法:用鹰嘴豆芽素A(50,100μmol/L)处理猪外周血单个核细胞,采用ELISA方法检测其对LPS刺激后细胞分泌肿瘤坏死因子(Tumor necrosis factor-α,TNF-α)、白介素6(Interleukin-6,IL-6)的影响,并用RT-PCR法检测这些细胞因子mRNA的表达,用Western blot法检测核因子κB(Nuclear factorκB,NF-κB)由细胞浆移位至细胞核内情况以判断NF-κB活性变化;同时分别用过氧化物酶体增殖物激活受体(PPAR)α的拮抗剂MK886和PPARγ的拮抗剂GW9662与鹰嘴豆芽素A共同处理猪外周血单个核细胞,观察鹰嘴豆芽素A在PPARα或PPARγ的活性被抑制时对NF-κB活性的影响。结果:鹰嘴豆芽素A能显著降低LPS诱导猪外周血单个核细胞的TNF-α、IL-6的分泌和mRNA的表达;同时鹰嘴豆芽素A显著抑制了LPS诱导猪外周血单个核细胞NF-κB的激活,而此抑制作用均被MK886或GW9662减弱。结论:鹰嘴豆芽素A可通过PPARα和PPARγ抑制LPS诱导猪外周血单个核细胞NF-κB的活化,从而下调LPS诱导的TNF-α、IL-6的生成。

猪繁殖与呼吸综合征病毒诱导巨噬细胞糖酵解促进病毒复制

为探究糖酵解对猪繁殖与呼吸综合征病毒(porcine reproductive and respiratory syndrome virus,PRRSV)在猪肺泡巨噬细胞(porcine alveolar macrophages,PAMs)中复制的作用,以PRRSV感染PAMs为研究对象,采用酶联免疫吸附法(enzyme linked immunosorbent assay,ELISA)、实时荧光定量PCR、病毒滴度测定和蛋白质免疫印迹试验(Western blotting)检测PAMs感染PRRSV后糖代谢的变化,PRRSV蛋白和病毒滴度及细胞相关基因和蛋白的表达水平;并应用靶向低氧诱导因子-1(hypoxia inducible factor-1α,HIF-1α)特异性siRNA分析HIF-1α在病毒复制中的作用。结果显示,PRRSV感染增强PAMs糖酵解,上清液葡萄糖摄取和乳酸含量显著升高(P<0.05或0.01),细胞内ATP显著降低(P<0.05),己糖激酶2(hexokinase 2,HK2)、6-磷酸果糖-2-激酶/果糖-2,6-二磷酸酶3(6-phosphofructo-2-kinase/fructose-2,6-biphosphatase3,PFKFB3)和丙酮酸激酶M2型(pyruvate kinase isozyme type M2,PKM2)含量显著升高(P<0.05或0.01);抑制糖酵解会显著降低PRRSV蛋白表达和病毒滴度(P<0.01);特异性siRNA敲低HIF-1α的表达后,糖酵解和PRRSV滴度显著降低(P<0.05);抑制糖酵解过程后逆转了PRRSV抑制干扰素信号通路。本研究为探索糖酵解在PRRSV复制过程中的功能提供了理论支持。

猪圆环病毒2型通过外泌体miR-125a-5p靶向Bcl-2诱导淋巴细胞凋亡

为研究miR-125a-5p在猪圆环病毒2型(porcine circovirus type 2,PCV2)诱导淋巴细胞凋亡中的作用及其作用机制,以PCV2感染PK-15细胞外泌体孵育的淋巴细胞为研究对象,采用流式细胞术、蛋白质免疫印迹试验(Western blotting)和实时荧光定量PCR,检测淋巴细胞凋亡率及凋亡相关miRNA表达;合成miR-125a-5p模拟物和抑制物转染PK-15细胞,检测miR-125a-5p过表达或抑制表达后细胞凋亡率;采用生物信息学方法预测miR-125a-5p的靶基因,双荧光素酶报告基因检测miR-125a-5p对靶基因的调控;Western blotting检测外泌体孵育淋巴细胞的线粒体凋亡信号通路相关蛋白Bcl-2、Bax、细胞色素C和caspase-3的表达。结果显示,感染PCV2的PK-15细胞分泌的外泌体极显著提高淋巴细胞凋亡率,在一定浓度范围内呈剂量依赖性;与PCV2诱导细胞凋亡相关的miRNA中,miR-125a-5p表达量极显著升高,miR-125a-5p模拟物转染细胞后极显著提高细胞凋亡率;利用TargetScan预测发现,miR-125a-5p与Bcl-23′UTR区有结合位点,miR-125a-5p模拟物极显著抑制pmir-Bcl-23′UTR-WT荧光素酶活性,对pmir-Bcl-23′UTR-MuT的荧光素酶活性无明显改变;外泌体孵育的淋巴细胞Bcl-2表达量显著降低,Bax、细胞色素C的释放和caspase-3表达量显著升高,Bcl-2/Bax的比值极显著降低。这表明,PCV2通过外泌体诱导淋巴细胞上调miR-125a-5p的表达,进而抑制Bcl-2 mRNA和蛋白表达,激活淋巴细胞线粒体凋亡通路诱导细胞凋亡。