黏质沙雷氏菌胞外几丁质酶的纯化及特性

黏质沙雷氏菌几丁质酶发酵上清液经硫酸铵沉淀、透析、DEAE-琼脂糖凝胶阴离子交换层析和苯基-琼脂糖凝胶疏水层析,得到电泳纯的几丁质酶和几丁质结合蛋白CBP21。该几丁质酶和CBP21分子质量分别约为58 ku和21 ku,CBP21对该几丁质酶水解几丁质增效明显。几丁质酶反应最适温度为50℃,最适pH约为6.5～7.0。该酶在55℃以下、pH 4.5～8.0范围内稳定。酶的Km值为0.22 mg/mL,Vm为1.26μmol/(min.mg)。金属离子K+、Sn2+、Mn2+对酶有一定激活作用,而Pb2+、Hg2+和Cu2+则强烈抑制其活性。该几丁质酶的糖基含量约为3.3%。EDTA和2-ME可分别提高酶活力65%和105%。H2O2强烈抑制酶活力,提示其活性中心可能存在硫氢基。

地衣芽胞杆菌α-淀粉酶酸性pH稳定性提升突变体的生化特征

地衣芽胞杆菌α-淀粉酶(Bacillus licheniformisα-amylase,BLA)的pH稳定性在提升发酵生产过程特别是后提取工段的操作稳定性,提高产品得率,弱化酶成品贮存条件和延长货架期等方面具有重要价值。该研究对1株能够合成更好pH稳定性BLA的地衣芽胞杆菌B186 1-1的BLA进行了分子克隆、序列分析及性质研究,与模式菌株ATCC14580来源的BLA氨基酸序列相比发现,有4个位点的差异,包括:N4K、R134L、E243D和S320A。进一步克隆表达与纯化了该菌株的BLA,重组酶在80℃、pH 6.0~7.5下显示最高活性;在pH 5.0下放置1 h,该酶保留80%以上酶活力,而来源于菌株ATCC14580的BLA在此相同条件下仅保留约10%酶活力;通过3D结构模拟分析显示BLA中的差异性碱基与其pH稳定性存在相关关系。

纤维对白羽肉鸡生长性能、生理生化、胃肠结构和盲肠微生物的影响

本试验旨在探究不同纤维种类和添加水平对白羽肉鸡生长性能、鸡粪中氮代谢和粪纤维含量、血清生化指标、胃肠结构和盲肠微生物的影响,为肉鸡日粮中纤维的合理利用提供理论依据。研究选用体重为(47.07±0.26)g的1日龄圣泽“901”白羽肉鸡公雏360羽,随机分成6组,每组6个重复,每个重复10羽。各组饲粮情况分别为基础饲粮+1.5 kg·t^(-1)纤维样品1(T1组)、基础饲粮+2.5 kg·t^(-1)纤维样品1(T2组)、基础饲粮+150 g·t^(-1)纤维样品2(T3组)、基础饲粮+2 kg·t^(-1)纤维样品3(T4组)、基础饲粮+3 kg·t^(-1)纤维样品3(T5组)和基础饲粮(T6组)。试验分1~21 d和22~42 d两阶段,共42 d。结果表明:与T6组相比,1)T2组22~42 d平均日采食量和1~42 d料重比分别显著提高了5.04%和3.07%(P<0.05),T3组22~42 d和1~42 d料重比分别显著提高了4.16%和3.68%(P<0.05),T5组21 d和42 d平均体重、1~21 d和1~42 d平均日增重以及22~42 d平均日采食量分别显著提高6.26%和4.93%、6.70%和5.02%以及4.87%(P<0.05);2)T1组21 d氮的摄入量和氮存留量、T4组21 d氮存留率、T5组21 d氮存留率和42 d氮存留量分别显著提高了11.24%和16.77%、6.18%、7.65%和9.95%(P<0.05),T5组21 d粪氮含量显著降低了6.87%(P<0.05);3)T1组42 d尿素氮和总抗氧化能力分别显著提高333.33%和57.14%(P<0.05),T2组21 d和42 d尿素氮含量分别显著提高375.00%和466.67%,21 d丙二醛含量显著降低17.69%(P<0.05),T3组21 d和42 d尿素氮分别显著提高350.00%和233.33%,21 d丙二醛含量显著降低15.58%,42 d总蛋白和低密度脂蛋白分别显著降低15.34%和20.00%,谷丙转氨酶显著提高了102.70%(P<0.05),T4组42 d葡萄糖含量显著提高35.36%(P<0.05),T5组21 d白蛋白、甘油三酯和丙二醛分别显著降低10.79%、25.45%和33.60%,42 d高密度脂蛋白和谷丙转氨酶分别显著提高25.32%和62.16%(P<0.05);4)T1组42 d回肠长度、T2组空肠重量和回肠长度、T3组空肠和回肠长度以及T5组回肠长度分别显著提高了5.04%、13.71%和19.26%、19.38%和21.84%以及23.18%(P<0.05);5)T3组42 d回肠绒毛高度显著降低29.20%(P<0.05),T5组42 d十二指肠和空肠隐窝深度分别显著提高116.67%和73.33%,十二指肠绒隐比显著降低48.02%(P<0.05);6)Alpha和Beta多样性分析各组间盲肠微生物种群结构有明显差异,21 d肠道微生物OTU种类和数量增加,其中以Bacteroides和Allstilpes中的Bacteroides fragilis A和Alistipes finegoldii丰富度最高,为优势属种,21 d Bacteroides和Bacteroides fragilis A丰富度最高,42 d Allstilpes和Alistipes finegoldii丰富度最高;KEGG通路功能预测分析其主要在碳水化合物代谢和氨基酸代谢中发挥功能作用,其次是转运和复制与修复。由此可见,基础饲粮添加纤维可促进肉鸡的肠道发育、改善和稳定肠道菌群结构,提高营养物质利用率,从而提高日增重和采食量。在本试验条件下,添加3 kg·t^(-1)木之纤产品效果最佳。

复合酶在白羽肉鸡低蛋白日粮中的应用效果研究

试验旨在研究低蛋白日粮中添加复合酶对白羽肉鸡生长性能、血清生化和抗氧化指标、免疫功能和消化器官的影响。将288只1日龄白羽肉鸡随机分为6组,试验期42 d,试验配方设计1~21日龄和22~42日龄两阶段。对照组(CK组)饲喂常规蛋白日粮(两阶段粗蛋白水平分别为21.28%和19.04%);试验组均饲喂低蛋白日粮(两阶段粗蛋白水平较CK组分别降低0.97%和0.94%),试验1、2、3组全程分别添加200 mg/kg复合酶A(T1组)、200 mg/kg复合酶B(T2组)、300 mg/kg复合酶B(T3组),试验4组两阶段分别添加复合酶B 100、300 mg/kg;另设低蛋白日粮组(T0组)。试验结束时进行生长性能、血清生化和抗氧化指标、免疫功能和消化器官发育情况的测定分析。结果表明:T2、T3组21日龄活体重、42日龄活体重和欧洲生产效率指数均较高,T3组1~42日龄料重比低于其他组;CK组和T3组血清中尿素(UREA)含量显著低于T4组(P<0.05),T2组血清谷草转氨酶(AST)活性显著高于T1组外的其他组(P<0.05),T0、T1和T2组血清超氧化物歧化酶(SOD)含量显著低于T4组(P<0.05);T4组IgA、IgG和IgE显著高于T0组(P<0.05)。综上所述,在低蛋白日粮中添加复合酶能够提高白羽肉鸡指标和抗氧化能力,促进免疫器官和消化器官发育,提高免疫力。

低蛋白饲粮添加复合酶对白羽肉鸡生长性能和氮代谢的影响

试验旨在研究低蛋白饲粮中添加复合酶对白羽肉鸡生长性能、血清生化指标、消化酶活性、养分表观代谢率和氮代谢的影响。试验选取288只1日龄白羽肉鸡随机分为6组,每组6个重复,每个重复8只。试验期42 d。试验配方设计1~21、22~42 d两阶段,对照组(T1组)饲喂基础饲粮(粗蛋白含量21.28%、20.09%),T2组为低蛋白饲粮组(粗蛋白含量20.24%、19.08%),T3和T4组在低蛋白饲粮中分别添加100、200 mg/kg复合酶A,T5和T6组在低蛋白饲粮中分别添加100、200 mg/kg复合酶B。结果显示:在22~42、1~42 d,T2组、T5组和T6组料重比低于T1组(P>0.05);42 d时,T4组十二指肠胰蛋白酶活性显著高于其他组(P<0.05),T6组干物质表观代谢率显著高于T1组、T3组和T4组(P<0.05),粗蛋白表观代谢率显著高于T1组和T4组(P<0.05),氮排放率显著低于T1组和T4组(P<0.05)。研究表明,复合酶可改善低蛋白饲粮对白羽肉鸡生长后期生长性能和消化酶活性的影响,提高了粗蛋白表观代谢率,减少氮排放,且T6组添加效果较好。

茶渣资源的开发与利用——茶渣中茶叶蛋白的酶法提取和酶法水解

关于茶叶蛋白的研究及其开发利用,目前研究得较多的主要为茶叶蛋白的工业化提取。本文在现有茶渣中茶叶蛋白提取工艺的基础上,采用新的复合酶酶法提取工艺(固液比1∶35,复合酶B加量0.5%,碱浓度0.1N,温度50℃(2h)→90℃(2h)),使蛋白提取率和蛋白纯度都有了较大的提高,分别可达到85.3%和82.4%。并对所提取的茶叶蛋白的酶法水解工艺进行了研究,通过试验,确定了酶法水解茶叶蛋白的最佳酶解工艺条件为:温度50℃、pH9.0、底物浓度10%、酶添加量2%、水解时间4hr;在此条件下,茶叶蛋白的水解度可达74.0%。水解产物中含有大量的小分子蛋白质和多肽,多肽含量可达到40.85%。本研究从根本上解决了茶渣资源开发与利用的主要限制性因素——茶叶蛋白高抗性,从而在一定程度上加大了茶渣资源应用的广泛性和可行性。

中温α-淀粉酶在地衣芽孢杆菌中的异源表达

提高中温α-淀粉酶生产菌株的发酵温度,对减少冷却水消耗降低生产成本有重要意义。本文利用基因删除技术删除了地衣芽孢杆菌CBBD302菌株α-淀粉酶的编码基因(amy L)获得突变株D402。将表达解淀粉芽孢杆菌中温α-淀粉酶基因Ba A的重组质粒p HY-WZX-Ba A转化D402,获得表达中温α-淀粉酶的重组地衣芽孢杆菌D402/p HY-WZX-Ba A。摇瓶发酵实验显示,重组菌最适发酵温度为42℃,比原生产菌株提高8℃,最高产酶水平达到301 U/m L。30 L发酵罐发酵试验,78 h达到最高酶活531 U/m L。重组酶的最适作用温度为60℃,最适作用p H 6.5,在90℃保温20 min可以完全失活,保持了中温α-淀粉酶既能在淀粉糊化温度下保持稳定又便于灭酶的优良性能。

里氏木霉β-葡萄糖苷酶的研究进展

本文系统介绍里氏木霉β-葡萄糖苷酶的概况、酶学特性、结构、催化机理,以及近年国内外的应用现状和研究前景。

茶渣资源的开发与利用——茶叶蛋白肽的功能性研究

对茶渣中茶叶蛋白的酶水解产物——茶叶蛋白肽的功能性进行研究。实验结果表明,茶叶蛋白肽具有很强的抗氧化活性,且在较低浓度下就可起作用;其对羟自由基、超氧阴离子自由基和DPPH自由基的清除率最高可分别达到99%、100%和97%,且均显著高于维生素C。茶叶蛋白肽对亚硝酸根离子也有很强的清除效果,IC50为0.2 mg/mL,清除率最高可达100%。茶叶蛋白肽还具有很好的抗凝血作用,当其质量浓度为3 mg/mL时,抗凝血作用明显优于抗凝剂柠檬酸钠。当茶叶蛋白肽的剂量为0.75 g/kg时,可显著增强机体的非特异性免疫功能。