人碱性成纤维细胞生长因子真核表达质粒的构建及其在犬牙龈成纤维细胞中的表达

目的:构建pIRES2-EGFP-bFGF真核表达质粒并检测其在Beagle犬牙龈成纤维细胞(GFs)中的表达。方法:双酶切获得bFGF片段并克隆到真核表达载体pIRES2-EGFP中,HindⅢ单酶切、序列分析鉴定获得的质粒;脂质体介导转染Beagle犬GFs;免疫组织化学,RT-PCR,ELISA检测bFGF基因的表达。结果:bFGF成功插入真核表达载体pIRES2-EGFP中,转染GFs 12 h后即可观察到转染的GFs表达绿色荧光蛋白,48 h后转染效率达到20%。免疫组织化学,RT-PCR,ELISA证实重组pIRES2-EGFP-bFGF在GFs中的表达。结论:成功构建真核表达质粒pIRES2-EGFP-bFGF,并可在GFs中表达。