MicroRNAs:过敏性疾病的潜在新靶点

过敏性疾病包括过敏性哮喘、过敏性皮炎、过敏性鼻炎等,是一种多基因病,涉及环境、基因及免疫之间的相互作用,在过去几十年中发病率明显上升,严重影响人们的生活质量。寻求防治过敏性疾病的新靶点及不良反应少的药物成为研究者关注的热点。MicroRNAs(miRNAs)是一类单链非编码小分子RNA,通过在转录后水平降解靶位基因或抑制蛋白的翻译来调控靶位基因的表达,广泛参与细胞的增殖、分化、免疫反应及肿瘤的发生等多种生物学过程。研究发现miRNAs可调控过敏性疾病的发生发展。深入探讨miRNAs在过敏性疾病中的作用,对进一步揭示其病理机制及发现新的药物治疗靶点具有重要意义。

卡泊三醇诱导小鼠特应性皮炎模型的最适条件探索

目的探讨卡泊三醇(MC903)致小鼠特应性皮炎模型的建立方法。方法诱导剂量探索实验:从d 0起,于各剂量组BALB/c小鼠右耳分别涂布0.33、1、3 nmol MC903,连续诱导7 d。每天观察小鼠耳肿胀程度并测量双耳耳厚,分别于d 3、7取材分析。诱导时间探索实验:从d 0起,于BALB/c小鼠右耳涂布2 nmol·ear-1MC903,连续诱导至d14。每天观察小鼠耳肿胀程度并测量双耳厚,分别于d 3、7、11、15获取小鼠右耳组织进行病理组织学检查。制备小鼠右耳耳组织匀浆,检测匀浆中胸腺基质淋巴细胞生成素(TSLP)、IL-33、IL-4、IFN-γ表达水平以及外淋巴结中DC细胞表面标记分子CD40+、CD86+和ILC2细胞百分含量的变化。结果 1每耳1、3 nmol MC903诱导的小鼠耳肿胀度从d 3开始显著增加,TSLP、IL-4水平明显增加,每耳3 nmol MC903剂量组IL-33水平于d 7明显增加。2每耳2 nmol MC903诱导的特应性皮炎小鼠从d 3起,小鼠右耳耳肿胀明显,耳厚逐渐增加,并于d 14达到峰值;小鼠耳组织病理组织学检查显示,从d 7起,小鼠右耳耳组织红肿,毛细血管扩张,炎性细胞浸润明显,耳部炎性症状维持并逐渐加重至d15;与正常小鼠相比,MC903使右耳组织匀浆中TSLP水平于d 3明显升高,随后逐渐下降,IL-4、IL-33水平于d 7明显升高,随后逐渐降低。外淋巴结中DC的表面标记分子CD40+、CD86+和ILC2的含量在d 7和d 15均有上升。结论每耳2 nmol MC903诱导小鼠7 d可成功建立小鼠特应性皮炎模型,TSLP较适检测点为d 3,IL-4、IL-33较适检测点为 d 7。

升麻素在大鼠体内的药代动力学研究

目的建立升麻素（cimifugin）血药浓度的高效液相色谱（HPLC）测定方法,研究其在大鼠体内的药代动力学特点.方法大鼠灌胃给予升麻素,取各时间点大鼠血浆,采用乙腈蛋白沉淀法,运用内标法进行HPLC检测,并用DAS2.1软件计算药代动力学参数.结果升麻素血药浓度的回归方程为Y=0.187X-0.0236,R^2=0.9982,其中升麻素在1～70mg·L^-1范围内线性关系良好,药时曲线符合二室开放模型,主要药代动力学参数Tmax、Cmax、T1/2α、T1/2z、Vd、AUC（0-t）、AUC（0-∞）分别为80min、10.359mg·L^-1、47.597min、93.131min、2.179L·kg^-1、1946.085mg·L^-1·min、2138.57mg·L^-1·min.结论建立了升麻素血药浓度方法,该方法专属性强,灵敏度高,可用于该药的体内定量分析.升麻素在大鼠体内被快速吸收达最大浓度,并发挥作用。

小鼠变应性接触性皮炎模型各时期IL-33水平探索

IL-33通过与二型固有淋巴细胞（group 2 innate lymphoid cells，ILC2s）。上的ST2和IL-1受体辅助蛋白（IL-1 RAcP）结合，参与多种过敏性疾病发病机制，是引发过敏性疾病的关键因素。上皮细胞可经刺激产生IL-33，作用于ILC2s并使其产生Th2型细胞因子，促进Th2型过敏性疾病的发生，如过敏性皮炎吲、哮喘㈨、过敏性鼻炎等。

基于Th2型过敏性炎症的胸腺基质淋巴细胞生成素产生小鼠模型的建立

近年研究发现，胸腺基质淋巴细胞生成素（thymicstro—mallymphopoietin，TSLP）是过敏性炎症一个重要的启动因子，触发DCs介导的Th2型炎症反应。本课题组前期试图从TSLP的角度研究药物抗过敏作用的机制，但发现在现有的过敏性炎症模型中，过敏原攻击后产生明显的炎症反应时，往往TSLP水平已开始降低，难以用于评价药物影响。因此本研究建立了致敏初期TSLP产生的模型，可为探索药物对过敏性疾病初期的作用及其机制提供合适的方法。

过敏性疾病关键启动因子在人角质形成细胞中表达的适宜刺激方法探索

目的研究不同刺激条件对人角质形成细胞Ha Ca T细胞中TSLP、IL-33表达水平的影响,探讨过敏性疾病中关键启动因子TSLP、IL-33体外表达细胞模型的最佳刺激方法。方法应用角质形成细胞无血清培养液(K-SFM)体外培养Ha Ca T细胞,给予不同刺激剂,筛选出明显促进Ha Ca T细胞中TSLP和IL-33表达的刺激剂。进而考察单独与联合刺激剂时的量效关系,最后对选出的刺激剂进行时效关系考察。TSLP和IL-33表达水平采用ELISA和免疫荧光法检测。结果 (1)Poly(I:C)与TNF-α两种刺激剂单独使用时均能明显刺激Ha Ca T细胞分泌TSLP和IL-33,其余刺激剂在本实验浓度范围内未见明显差异。(2)Poly(I:C)100 mg·L-1与TNF-α20μg·L-1联合刺激对Ha Ca T细胞表达TSLP和IL-33的促进作用最为明显。(3)对Poly(I:C)100 mg·L-1与TNF-α20μg·L-1联合刺激Ha Ca T细胞的时效关系考察发现,刺激12 h Ha Ca T细胞中TSLP和IL-33的表达水平最高。结论不同刺激剂和刺激时间对体外刺激Ha Ca T细胞表达细胞因子TSLP和IL-33的效应不同,其中以Poly(I:C)100 mg·L-1与TNF-α20μg·L-1联合刺激Ha Ca T细胞12 h后,TSLP和IL-33的表达水平升高最为明显。该结果为过敏性疾病的病理机制及药物作用研究提供了合适的方法。

动脉粥样硬化中DNA甲基化与微小RNA的相互作用

动脉粥样硬化是心脑血管病的重要发病机制,能侵袭全身血管,其发病机制至今尚未完全阐明。DNA甲基化和微小RNA都属于表观遗传的重要内容,两者在动脉粥样硬化中都有重要作用。目前在动脉粥样硬化中已发现多种微小RNA出现异常表达,可能受甲基化的调节。DNA甲基化可以通过对微小RNA启动子区Cp G岛的甲基化修饰,直接调控微小RNA的表达;或通过改变转录因子甲基化状态,间接调节与其相关的微小RNA表达。微小RNA也可以通过调节甲基转移酶的表达进而调节DNA甲基化。两者相互调节机制构成了基因表达的复杂网络,为动脉粥样硬化发病的分子机制研究提供了新思路。

上皮间质转化与哮喘气道重塑的研究进展

支气管哮喘是一类以气道重塑为病理基础的呼吸道疾病,反复的炎性浸润与组织损伤修复可导致气道重塑,目前有关气道重塑形成的机制尚不全面。研究表明,上皮间质转化在气道重塑的发生和发展过程中发挥重要作用。气道上皮可通过分泌多种因子及信号通路诱发间质转化,进而导致哮喘气道重塑。该文对上皮间质转化与哮喘气道重塑之间的研究进行综述,为临床后续哮喘治疗和研究提供参考。

麻黄-甘草药对抑制Th2型变应性接触性皮炎的作用及机制探讨

目的研究麻黄-甘草药对对Th2型变应性接触性皮炎(Allergic contact dermatitis,ACD)的影响及机制。方法采用不同浓度异硫氰酸荧光素(FITC)诱导BALB/c小鼠建立Th2型ACD模型及诱导初期ACD模型。HE染色观察小鼠耳组织病理学变化,测量小鼠耳肿胀,ELISA法检测小鼠耳组织Th2细胞因子水平及胸腺基质淋巴细胞生成素(Thymic stromal lymphopoietin,TSLP)蛋白水平,用qPCR检测小鼠耳组织TSLP mRNA水平,Poly(I∶C)和TNF-α联合刺激HaCaT细胞,检测细胞分泌的TSLP蛋白水平。结果 Th2型ACD模型中,与模型组小鼠比较,麻黄-甘草2.34g/kg和7.02g/kg组均明显抑制小鼠耳肿胀,减少耳组织炎性细胞浸润;麻黄-甘草2个剂量组均显著降低耳匀浆中IL-4水平,麻黄-甘草7.02g/kg组明显降低IL-13水平。诱导初期Th2型ACD模型中,与模型组比较,麻黄-甘草药对显著降低耳匀浆TSLP的基因及蛋白表达,体外麻黄-甘草药对及其主要单体成分同样抑制TSLP的分泌。结论麻黄-甘草药对具有抑制过敏性炎症的作用,其作用机制可能是通过减少TSLP的分泌。

异黄酮类植物雌激素防治过敏性疾病研究进展

异黄酮类植物雌激素是生物黄酮中的一种,其对于机体免疫系统具有调节作用。研究表明,异黄酮类植物雌激素能够维持Th1/Th2平衡,调节免疫细胞及增加宿主对食物致敏原耐受等作用,从而改善过敏症状。该文对异黄酮类植物雌激素对过敏性疾病的作用及其机制做一综述,以期促进其研发利用。

锌指蛋白A20在过敏性哮喘中的研究进展

锌指蛋白A20(也称TNFAIP3)是一种可在多种炎症条件,如LPS、IL-1、TNF-α等刺激下,被激活的具有去泛素化和泛素化双重功能的胞质蛋白。目前,A20被认为是NF-κB的负调控因子,具有免疫调节作用。最新研究表明,A20参与了过敏性哮喘的发生和发展。因此,该文对A20的起源、结构、生物学功能及其在过敏性哮喘中的作用进行综述,以期为过敏性哮喘的治疗和预防提供新的方法和思路。

抗生素呼吸道给药加重小鼠过敏性哮喘模型的建立

目的中医药通过调节菌群治疗疾病的机制逐渐被发现,探索建立抗生素造成呼吸道菌群紊乱的哮喘模型,以期为研究中医药对呼吸道菌群及哮喘的作用提供合适的模型。方法40只SPF级雄性BALB/c小鼠随机分为以下4组:正常对照组、哮喘模型组、滴鼻抗生素哮喘模型组、腹腔注射给予抗生素哮喘模型组。采用屋尘螨(house dust mite,HDM)建立哮喘模型,分别通过滴鼻或腹腔注射给予抗生素头孢哌酮舒巴坦钠(cefoperazone sulbactam sodium,CFP),观察抗生素对HDM诱导的小鼠哮喘的影响。24d后小鼠眼眦取血,对各组小鼠的哮喘指标:血中嗜酸性粒细胞(eosinophils,EOS)进行计数,检测血清中IgE水平,小鼠肺泡灌洗液(bronchoalveolar lavage fluid,BALF)及肺组织匀浆中TH2型细胞因子IL-5和IL-13水平,小鼠肺组织进行HE、Masson、PAS染色,观察病理组织学变化。结果在哮喘模型组小鼠血中EOS、血清中IgE、BALF及肺组织匀浆中IL-5和IL-13水平较空白组显著升高(P<0.05),滴鼻给予抗生素组较哮喘模型组有更明显的上升(P<0.05),病理组织学观察也发现滴鼻给予抗生素造模组的炎症浸润、细胞外基质沉积及粘液分泌都更为严重,而腹腔注射抗生素组的相关哮喘指标较模型组无显著变化。结论利用抗生素头孢哌酮舒巴坦钠滴鼻给予小鼠能加重HDM诱导的小鼠哮喘,提示呼吸道给予抗生素可能会导致呼吸道菌群紊乱进而加重哮喘的发生,此模型可以作为不具备饲养GF小鼠的条件下研究中医药调节呼吸道菌群与哮喘的工具。

阿魏酸对损伤神经细胞的保护作用

目的:研究阿魏酸对谷氨酸诱导的PC12细胞损伤的保护作用。方法:体外培养PC12细胞,建立谷氨酸致神经细胞损伤的模型,MTT检测给予阿魏酸前后损伤PC12细胞增殖活性的变化,光镜观察给予阿魏酸前后损伤PC12细胞形态上的差异,并测定培养上清液中乳酸脱氢酶(LDH)的活性。结果:阿魏酸能明显改善谷氨酸诱损伤的PC12细胞的活力,对损伤的PC12细胞的形态有改善作用,并能使损伤细胞的培养上清液中的LDH含量明显减少。结论:阿魏酸可减轻兴奋性氨基酸所致的神经元损伤,对神经元具有保护作用。