双氢青蒿素、焦孔素E对喉癌细胞增殖、转移及焦亡的影响

目的探讨双氢青蒿素(DHA)、焦孔素E(GSDME)对喉癌细胞增殖、转移及焦亡的影响及相关机制。方法取人喉鳞状细胞癌Hep-2细胞,将其分为空白组(未干预的Hep-2细胞)、DHA组(采用50μmol/L DHA处理的Hep-2细胞)、GSDME-siRNA组(转染GSDME-siRNA的Hep-2细胞)、DHA+GSDME-siRNA组(采用50μmol/L DHA培养并转染GSDME-siRNA的Hep-2细胞)。采用四甲基偶氮唑盐(MTT)法检测DHA对Hep-2细胞增殖能力的影响,计算细胞增殖抑制率及半数抑制浓度(IC 50);流式细胞术检测细胞焦亡率;Transwell法检测细胞侵袭能力;蛋白质印迹法检测焦亡相关蛋白GSDME、caspase-3及己糖激酶Ⅱ(HK-Ⅱ)、亲环素D、电压依赖性阴离子通路(VDAC)蛋白的相对表达水平。结果10、20、40、80、160μmol/L DHA作用Hep-2细胞48 h的细胞增殖抑制率均高于相应浓度作用24 h的细胞增殖抑制率(均P<0.05);DHA作用Hep-2细胞24、48 h的IC 50值分别为57.20、43.50μmol/L,故选择50μmol/L DHA进行后续实验。空白组、DHA组、GSDME-siRNA组及DHA+GSDME-siRNA组细胞焦亡率分别为(6.5±0.8)%、(22.7±2.5)%、(3.1±0.6)%及(7.0±1.0)%,差异有统计学意义(F=221.20,P<0.05);细胞侵袭数分别为(153±14)个、(95±10)个、(205±16)个及(148±16)个,差异有统计学意义(F=56.89,P<0.05)。蛋白质印迹法检测结果显示,DHA组GSDME、caspase-3相对表达水平均高于空白组(均P<0.05);GSDME-siRNA组GSDME、caspase-3相对表达水平均低于DHA组(均P<0.05);DHA+GSDME-siRNA组GSDME、caspase-3相对表达水平均高于GSDME-siRNA组(均P<0.05);DHA组HK-Ⅱ、亲环素D、VDAC相对表达水平均低于空白组(均P<0.05);GSDME-siRNA组HK-Ⅱ、亲环素D、VDAC相对表达水平均高于DHA组(均P<0.05);DHA+GSDME-siRNA组HK-Ⅱ、亲环素D、VDAC相对表达水平均低于GSDME-siRNA组(均P<0.05)。结论双氢青蒿素可增加喉癌细胞焦亡,降低细胞增殖及转移能力,可能与抑制线粒体HK-Ⅱ表达相关。