迟缓爱德华菌鞭毛蛋白FliC原核表达及免疫试验

为了解迟缓爱德华菌鞭毛蛋白FliC的免疫特性,从迟缓爱德华菌基因组中克隆出鞭毛基因fliC,并将其构建到原核表达载体上,用原核表达的方法获得大量重组蛋白,将蛋白纯化后,通过动物模型确定该蛋白的免疫特性。结果表明,迟缓爱德华菌鞭毛蛋白FliC具有较强的免疫原性,对免疫动物应对强毒株感染具有一定保护效果。将FliC与牛血清白蛋白(BSA)混合免疫小鼠能够刺激机体产生较高水平抗BSA抗体,说明其佐剂特性。研究表明,迟缓爱德华菌鞭毛蛋白FliC具有优良的免疫原性和佐剂特性,是迟缓爱德华菌的保护性抗原,具有潜在的应用价值。

沙门氏菌丝氨酸蛋白酶YihE的原核表达及多克隆抗体制备

为研究沙门氏菌抗吞噬细胞杀伤机制,试验以沙门氏菌抗应激相关的丝氨酸蛋白酶YihE为研究对象,应用原核表达系统进行表达,利用镍离子亲和层析方法纯化YihE蛋白,采用Western-blot方法进行检测。结果表明:成功利用原核表达系统表达YihE蛋白,所得His-YihE重组蛋白主要以包涵体形式存在;利用镍离子亲和层析方法纯化蛋白,以纯化蛋白免疫小鼠证实其具有优良的免疫原性;采用Western-blot方法进行验证,证实所得多克隆抗体能够识别沙门氏菌内源YihE蛋白。

OmpD对肠炎沙门菌生物学特性影响的研究

为研究外膜孔蛋白Omp D在肠炎沙门菌致病中的作用,本研究利用λ-Red同源重组技术构建了肠炎沙门菌(C50336)omp D基因缺失突变株(C50336Δomp D)。测定了C50336,缺失株C50336Δomp D,回补株p BR322-omp D/C50336Δomp D各菌株在LB和M9培养基中的生长情况,结果显示,缺失株C50336Δomp D与野生型菌株和回补菌株相比,其生长速度无明显差异。利用结晶紫染色方法观察和测定生物被膜(BF)表达量,结果显示,C50336Δomp D与野生型菌株和回补菌株相比,其BF形成受到明显抑制;利用刚果红培养基和荧光剂培养基分析细菌BF成分变化,结果显示C50336Δomp D构成BF的主要成分卷毛和纤维素的表达量明显减少。通过K-B药敏试验结果显示,C50336Δomp D菌株与野生型菌株和回补菌株相比,其对包括多黏菌素B在内的多种抗生素的敏感性显著增强。利用小鼠模型评估omp D基因缺失对肠炎沙门菌致病力的影响,结果显示,omp D基因缺失突变株对小鼠的LD50相较野生菌株提高约20倍,表明Omp D蛋白与肠炎沙门菌致病力密切相关,毒力基因检测结果显示缺失株BF调控基因均转录水平下调。本研究为进一步阐释肠炎沙门菌致病机制奠定基础。

中草药对狐狸源腐生葡萄球菌的体外抑菌试验

为了探讨中草药对狐狸源腐生葡萄球菌的体外抑菌效果,筛选出针对腐生葡萄球菌具有较好抑菌作用的药物,试验以临床分离的狐狸源腐生葡萄球菌为试验菌株,采用水煎法提取中草药有效成分,琼脂平板打孔法测定中草药抑菌圈直径,试管二倍稀释法测定中草药的最小抑菌浓度(MIC)和最小杀菌浓度(MBC)。结果表明:苏木和诃子对腐生葡萄球菌的抑菌效果最好,抑菌圈直径分别为28mm、23mm;苏木和诃子对腐生葡萄球菌的MIC均为3.91mg/mL,MBC分别为3.91mg/mL、7.81mg/mL,相对其他中草药来说这二种药物的MIC和MBC均较小。说明日常常用的中草药具有一定的抑菌作用,而苏木和诃子的抑菌、杀菌效果相对较好。

中药对鲍曼不动杆菌的体外抑菌试验

为了探讨中药对鲍曼不动杆菌的体外抑菌效果,筛选出针对鲍曼不动杆菌具有较好体外抑制作用的中药。以临床分离的鲍曼不动杆菌为试验菌株,试验采用水煎法提取中药的有效成分,牛津杯法测定中药对该菌的抑菌圈大小,肉汤二倍稀释法测定中药对该病原菌的最小抑菌浓度(MIC)和最小杀菌浓度(MBC)。结果表明,鲍曼不动杆菌对苏木、连翘、夏枯草、乌梅、紫花地丁高度敏感;鲍曼不动杆菌对黄芩和青皮中度敏感;鲍曼不动杆菌对诃子、女贞子、板蓝根、苦参、马齿苋、桔梗、防风、郁金香、蒲公英、厚朴、香附、荆芥、石榴皮、艾叶、知母、龙胆草、栀子耐药;苏木对该菌的抑菌效果最好,MIC和MBC均为31.3 mg/mL。本结果为开发中药相关产品以及防治由鲍曼不动杆菌引起的细菌性疾病提供了参考。

肠炎沙门菌sufB基因缺失株的构建及其相关生物学特性研究

为了解铁硫簇蛋白对肠炎沙门菌致病作用的影响,本研究利用λ-Red同源重组系统构建了肠炎沙门菌(C50336) suf B基因缺失突变株(C50336Δsuf B),并对其生物学特性进行分析,探究Suf B蛋白在肠炎沙门菌致病过程中的作用。结果显示,缺失株C50336Δsuf B与野生型菌株和回复菌株相比,其生长速度、生化特性无明显差异,但其对酸性应激、H2O2处理和高渗环境的适应能力显著下降,在血清中存活率明显降低。动物实验结果显示,suf B基因缺失突变株的毒力和体内存活能力均严重下降。本研究证实suf B基因与肠炎沙门菌毒力密切相关,为进一步阐释肠炎沙门菌感染致病机制奠定基础。

自血与大剂量乙肝疫苗穴位注射联合苦参素治疗慢性丙型肝炎疗效观察及护理

目的:观察自血与大剂量乙肝疫苗穴位注射联合苦参素治疗慢性丙型肝炎的治疗效果。方法:将30例慢性丙型肝炎患者随机分为观察组(20例)和对照组(10例),对照组应用干扰素,同时服用肌苷、维生素C6个月。观察组应用自血与大剂量乙肝疫苗穴位注射联合苦参素口服,0.2g/次,3次/d,疗程6个月。结果:观察组HCV-RNA转阴率明显高于对照组(P﹤0.05、P﹤0.01)。结论:自血与大剂量乙肝疫苗穴位注射联合苦参素治疗慢性丙型肝炎效果明显,同时做好相应护理也十分重要。

狐肺炎大肠杆菌HtrA蛋白原核表达及多抗血清制备

利用PCR方法从银狐大肠杆菌基因组中克隆出htra基因,测序无误后将其构建到pET32a原核表达载体上,重组载体转化BL21大肠杆菌诱导重组蛋白表达,通过SDS-PAGE和Western blot方法验证重组蛋白得到很好表达;用亲和层析方法纯化蛋白,纯化的蛋白免疫小鼠,所得的多抗血清能够特异性识别大肠杆菌HtrA蛋白,为研究HtrA蛋白的作用机制奠定基础。

1株致水貂败血症粘质沙雷菌的分离鉴定

粘质沙雷菌是一种重要的条件致病菌，多造成医院感染，引起伤口感染、肺炎、脑膜炎和败血症。目前，关于人粘质沙雷菌感染的报道较多，在其他动物上报道较少。本研究从秦皇岛市昌黎县某水貂养殖场患病水貂心血内分离到1株细菌，经过生理生化特性和16SrDNA序列分析，鉴定为粘质沙雷菌，并命名为Sm-1，在国内尚属首次。通过耐药性分析，确定了Sm-1对左氧氟沙星、头孢曲松钠、新诺明高度敏感，为本病的防治提供了理论依据。

致泥鳅点状出血征温和气单胞菌的分类鉴定

温和气单胞菌是一种重要的水产病原,给水产养殖造成巨大的经济损失。本研究从秦皇岛市昌黎县某水产养殖场患斑点出血病泥鳅体内分离到1株细菌,经过生理生化特性鉴定和16S rDNA序列分析,鉴定为温和气单胞菌,并命名为AersQHD-1。通过耐药性分析,确定了AersQHD-1对环丙沙星、恩诺沙星、头孢拉定、左氧氟沙星和新诺明高度敏感,用新诺明治疗辅以对养殖坑塘进行彻底消毒,取得了良好的治疗效果。

迟缓爱德华菌菌毛蛋白原核表达及多抗血清制备

为研究迟缓爱德华菌菌毛蛋白PILI的功能和免疫原性,本研究利用PCR方法从迟缓爱德华菌基因组中克隆出pili基因,并将其构建到pET-32a原核表达载体上,重组载体转化BL21大肠杆菌诱导重组蛋白表达,通过SDSPAGE和Western blot方法验证重组蛋白表达。用亲和层析方法纯化蛋白,纯化的蛋白免疫小鼠,所得的多抗血清能够特异性识别迟缓爱德华菌PILI蛋白,为研究PILI蛋白奠定基础。

貉肠炎沙门菌htra基因缺失株的构建及其生物学特性

利用Red同源重组方法对HtrA蛋白编码基因htra进行敲除,并从生长特性、生化特性、耐pH应激与氧化应激、抗血清杀伤和菌株毒力等几方面对突变菌株进行评价。结果显示,与野生型菌株相比,htra基因缺失株生长特性和生化特性无明显差异,但其对酸性和碱性环境的敏感性增加,对血清的耐受力下降;动物试验结果显示,htra基因缺失后肠炎沙门菌对小鼠半数致死量有显著提高。本试验成功构建了貉肠炎沙门菌htra基因缺失株,为研究HtrA蛋白的作用机制奠定了基础。

狐源大肠杆菌HtrA基因缺失株的构建及生物学特性

HtrA是一种重要的抗应激蛋白,对细菌抵抗应激条件至关重要。为研究HtrA蛋白在狐源大肠杆菌致病过程中的作用,本研究利用λ-Red同源重组方法构建狐大肠杆菌HtrA基因缺失株,并从生长特性、生化特性、抗吞噬细胞吞噬能力、菌株毒力等几方面对突变菌株进行评价,结果表明:与狐源大肠杆菌野生型菌株相比,HtrA基因缺失株生长特性和生化特性无明显差异,但其抗吞噬细胞吞噬能力有明显下降,细菌半数致死量有显著提高。本研究成功构建狐源大肠杆菌HtrA基因缺失株,为研究HtrA蛋白的作用机制奠定了基础。

貉肠炎沙门菌htra基因缺失株的构建及生物学特性

为研究HtrA蛋白对貉源肠炎沙门菌毒力和生物学特性的影响,本试验利用Red同源重组方法对HtrA蛋白编码基因htra进行敲除,并从生长特性、生化特性、耐pH应激与氧化应激、抗血清杀伤和菌株毒力等方面对突变菌株进行评价,结果显示:与野生型菌株相比,htra基因缺失株生长特性和生化特性无明显差异,但其对酸性和碱性环境的敏感性增加,对血清的耐受力下降,动物实验结果显示htra基因缺失后肠炎沙门菌对小鼠半数致死量有显著提高。本试验成功构建貉肠炎沙门菌htra基因缺失株,为研究HtrA蛋白的作用机制奠定了基础。

狐肺炎大肠杆菌yihe基因缺失株的构建及致病性

为研究YihE蛋白在狐肺炎大肠杆菌致病过程中的作用,利用λ-Red同源重组方法构建狐源大肠杆菌yihe基因缺失株,并从生长特性、生化特性、抗吞噬能力、菌株毒力等几方面对突变菌株进行评价。结果表明:与狐肺炎大肠杆菌野生型菌株相比,yihe基因缺失株生长特性和生化特性无明显差异,但其抗吞噬细胞吞噬能力以及胞内存活能力有明显下降,细菌半数致死量有显著提高。本试验成功构建狐肺炎大肠杆菌yihe基因缺失株,为研究YihE蛋白的作用机制奠定基础。

肠炎沙门菌C50336ZinT基因缺失株构建及其相关生物学特性

为研究锌调控蛋白ZinT在肠炎沙门菌致病中的作用,本试验利用λ-Red同源重组系统构建了肠炎沙门菌(C50336)ZinT基因缺失突变株(C50336ΔZinT),并对其生物学特性进行分析。结果显示,与野生型菌株和回复菌株相比,缺失株C50336ΔZinT在LB培养基中生长速度无明显差异,生化特性亦无明显变化,但其在Minimal培养基中生长明显变慢。此外缺失株C50336ΔZinT对H2O2处理和高渗环境的适应能力显著下降,但在巨噬细胞内的存活率无明显降低。动物试验表明,ZinT基因缺失突变株的毒力和野生型菌株相比仅有轻微下降。本试验探讨了ZinT与肠炎沙门菌锌摄取和毒力间的联系,为进一步阐释肠炎沙门菌感染致病机制奠定基础。

狐肺炎大肠杆菌ybjX基因缺失株构建及其对小鼠致病性检测

为研究外膜蛋白YbjX对大肠杆菌致病作用的影响,本研究利用λ-Red同源重组系统构建了狐肺炎大肠杆菌(HBCLE-12)ybjX基因缺失突变株(HBCLEΔybjX),并对其生物学特性进行分析,探索YbjX蛋白在大肠杆菌致病过程中的作用。结果表明,缺失株HBCLEΔybjX与野生型菌株和回补菌株相比,其生长速度、生化特性无明显差异,但其运动能力和血清内存活能力显著下降,对多种抗生素的敏感性明显增强。动物试验表明,ybjX基因缺失突变株对小鼠的致病力显著下降。本研究为进一步阐释大肠杆菌致病机制和疫苗设计奠定基础。