miR-142-3p通过调控ELAVL1表达影响过氧化氢诱导的心肌细胞损伤的分子机制

目的探讨微小RNA-142-3p(miR-142-3p)对过氧化氢诱导的心肌细胞损伤的影响及其作用机制。方法构建氧化应激损伤模型,以H9C2心肌细胞为研究对象,实验将心肌细胞转染后分为正常对照组、 H2O2组、H2O2+miR-142-3p组、H2O2+miR阴性对照组、H2O2+si-ELAVL1组、H2O2+siRNA对照组、H2O2+miR-142-3p+pc DNA-ELAVL1组、H2O2+miR-142-3p+pcDNA组。分别采用qRT-PCR与Western Blot检测细胞中miR-142-3p与ELAVL1表达;检测各组活性氧(ROS)生成水平;MTT检测细胞存活率,流式细胞术检测细胞凋亡。双荧光素酶报告实验验证miR-142-3p与ELAVL1的靶向作用。Western Blot检测细胞中Cleaved Caspase-3、STAT3、Caspase-3、p-STAT3蛋白表达。两组间比较采用两样本t检验;多组间比较采用单因素方差分析,两两比较采用LSD-t检验。结果 H2O2组心肌细胞中miR-142-3p(0.26±0.06)、p-STAT3表达水平(0.36±0.04)、细胞存活率(61.73±6.48)%与正常对照组相比下降(P均<0.01),而ROS水平(1 566.38±121.57)、细胞凋亡率(27.46±1.73)%、Cleaved Caspase-3(0.68±0.08)及ELAVL1表达水平(4.23±0.31)均升高(P均<0.01);双荧光素酶报告实验证实ELAVL1是miR-142-3p的靶基因;miR-142-3p过表达或沉默ELAVL1表达可明显促进心肌细胞存活、上调p-STAT3表达,而抑制细胞凋亡及Cleaved Caspase-3表达;ELAVL1过表达可逆转mi R-142-3p对过氧化氢处理H9C2细胞的保护作用。结论 miR-142-3p可通过抑制ELAVL1表达进而减轻过氧化氢诱导的心肌细胞损伤,其可能通过影响STAT3信号通路而保护心肌细胞。

miR-652-3p靶向同源异型核基因1对血管紧张素Ⅱ诱导的心肌细胞凋亡的影响

目的探讨miR-652-3p靶向同源异型核基因1(PRRX1)对血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)诱导的心肌细胞凋亡的影响。方法大鼠心肌细胞H9c2细胞采用正常培养基培养为对照组细胞,用含1μmol/L AngⅡ的培养基培养为AngⅡ组细胞;分别转染miR-652-3p阳性对照序列(NC)和转染miR-652-3p mimics后用含1μmol/L AngⅡ的培养基培养为AngⅡ+NC组和AngⅡ+miR-652-3p组细胞;将miR-652-3p mimics分别与PRRX1阳性对照质粒和PRRX1过表达质粒转染至H9c2细胞中用含1μmol/L AngⅡ的培养基培养,分别为AngⅡ+miR-652-3p+Vctor组和AngⅡ+miR-652-3p+PRRX1组细胞。实时荧光定量PCR(RT-qPCR)检测H9c2细胞中miR-652-3p表达水平,流式细胞术检测细胞凋亡,用Western blot检测细胞中PRRX1、Bax和Bcl-2蛋白表达水平。双荧光素酶报告基因实验验证H9c2细胞中miR-652-3p与PRRX1调控关系。两组间比较采用独立样本t检验,多组间比较采用单因素方差分析,组间两两比较采用SNK-q检验。结果与对照组比较,AngⅡ组H9c2细胞中miR-652-3p水平(1.00±0.08比0.21±0.05)、Bcl-2蛋白水平(0.83±0.08比0.40±0.04)均较低,而PRRX1蛋白水平(0.06±0.01比0.41±0.04)、凋亡率(5.02﹪±1.41﹪比25.33﹪±3.75﹪)、Bax蛋白水平(0.46±0.05比0.96±0.10)均较高,差异具有统计学意义(P均<0.05)。与AngⅡ+NC组比较,AngⅡ+miR-652-3p组H9c2细胞中miR-652-3p的表达水平(0.24±0.06比0.98±0.07)、Bcl-2蛋白水平(0.38±0.04比0.72±0.07)均较高,而PRRX1蛋白水平(0.39±0.04比0.13±0.01)、凋亡率(27.02﹪±4.11﹪比12.19﹪±1.63﹪)、Bax蛋白水平(0.95±0.09比0.53±0.05)均较低,差异具有统计学意义(P均<0.05)。与AngⅡ+miR-652-3p+Vctor组比较,AngⅡ+miR-652-3p+PRRX1组H9c2细胞凋亡率(12.88﹪±1.84﹪比25.45﹪±3.58﹪)、PRRX1蛋白水平(0.13±0.01比0.35±0.04)和Bax蛋白水平(0.54±0.05比0.82±0.08)均较高,差异具有统计学意义(P均<0.05),而Bcl-2蛋白表达水平(0.72±0.07比0.46±0.05)降低,差异具有统计学意义(P<0.05)。结论AngⅡ能够下调心肌细胞中miR-652-3p的表达,上调miR-652-3p可通过靶向抑制PRRX1的表达减少AngⅡ诱导的H9c2细胞凋亡。