人脂肪干细胞膜片的构建及其生物学特性初探

目的利用分离纯化后的人脂肪干细胞(adipose-derived stem cells,ADSCs)构建ADSCs膜片,并探讨人ADSCs膜片的生物学特性。方法收集年轻女性腹部手术皮下脂肪组织,用酶消化法成功分离纯化人ADSCs,进行流式细胞学鉴定,使用含有活性因子的完全培养基诱导构建人ADSCs膜片后,扫描电镜观察细胞膜片组织形态,并采用q RT-PCR和ELISA检测人脂肪干细胞膜片相关促生长细胞因子及干性基因的表达水平。结果成功分离人ADSCs,流式细胞学鉴定发现其间充质干细胞表面标记分子CD29、CD44、CD90、CD105均为阳性,造血干细胞表面标记CD45分子为阴性,符合ADSCs表面分子表达特点;人ADSCs进行成脂和成骨诱导后,油红O与茜素红染色阳性,提示人ADSCs具有多向分化潜能;扫描电镜观察膜片中的细胞呈网格样叠加生长,细胞之间连接紧密;qRT-PCR检测结果显示人ADSCs膜片中TGF-β1、FGF2、HGF、VEGF、Col 1A1等促生长细胞因子和OCT4、NANOG等干性基因显著高表达。ELISA检测结果显示人ADSCs膜片上清液高表达促生长细胞因子TGF-β1、FGF、HGF、VEGF。结论我们成功利用人ADSCs诱导成人细胞膜片,该膜片可分泌更高含量的促生长细胞因子并表达更高水平的干性基因,为人ADSCs膜片应用于组织损伤修复提供了重要理论依据。

维生素D对小鼠卵母细胞发育潜能的影响

目的探讨维生素D对体外成熟小鼠卵母细胞发育潜能的影响。方法采集小鼠生发泡(GV)期卵母细胞进行体外成熟培养,根据培养液的不同分为对照组(采用IVM培养基,取卵数188个)和实验组(在对照组基础上添加固体维生素D,取卵数123个)。所有细胞体外进行培养,记录并分析不同条件下处理下两组卵母细胞成熟率、孤雌激活率、囊胚形成率以及表观遗传相关基因表达水平情况。结果两组MII卵母细胞率、孤雌激活率比较,差异无统计学意义(P>0.05)。实验组囊胚形成率显著高于对照组,差异具有统计学意义(P<0.05)。与对照组相比,实验组所选13个基因(Mat2a、Dnmt1、Dnmt3a、Dnmt3b、Dnmt3L、Mbd1、MeCP2、Mbd3、Ezh2、Suz12、Phc2、Rnf2和YY1)表达明显高于对照组,差异具有统计学意义(P<0.05)。结论维生素D可促进卵母细胞在体外成熟,可以提高卵母细胞的发育潜能。