小鼠肝再生过程中MnSOD作用的初步研究

目的:研究肝切除术后小鼠肝再生过程中锰超氧化物歧化酶(MnSOD)的表达及其活性的变化,探讨MnSOD在肝再生中的作用。方法:采用经典小鼠肝切除模型,将38只雄性BALB/c小鼠,随机分为30%肝切除组(30%PH组)18只,70%肝切除组(70%PH组)18只,以及对照组2只。2个肝切除组分别于术后6 h和1、2、3、5、7 d这6个时间点随机各抽取3只小鼠处死,对照组小鼠在行假手术后即处死。取肝组织,制备冰冻切片使用DHE染色法在激光共聚焦显微镜下检测活性氧(ROS)水平,实时荧光定量PCR检测小鼠肝组织中MnSOD mRNA表达水平,Western blot检测小鼠肝组织中MnSOD蛋白的表达水平,采用MnSOD试剂盒检测小鼠肝组织中的MnSOD活性。结果:肝切除术后,与对照组相比,30%PH组小鼠肝组织ROS水平在术后6 h和1 d增加,MnSOD mRNA表达水平增加(P<0.05),MnSOD蛋白含量无显著变化(P>0.05);MnSOD的活性在术后第1和2天较高,第3和5天较低,第7天恢复。70%PH组小鼠肝组织ROS水平在术后第1～5天均升高,MnSOD mRNA的水平先下降后逐渐恢复,MnSOD的蛋白含量降低,MnSOD的活性在术后第6小时和1天增加,第2～7天均处于降低状态(P均<0.05)。结论:在肝切除术后小鼠的肝再生过程迅速启动,尤其是在70%PH后肝细胞迅速增殖,并在术后一段时间逐渐恢复到静息状态,其机制可能与MnSOD含量和活性的下调从而导致ROS升高有关。

TGF-β1诱导上皮间质转化过程中线粒体合成与功能的改变

目的:研究在转化生长因子-β1(TGF-β1)诱导上皮间质转化过程中线粒体合成与功能的改变。方法:体外培养人肺癌A549细胞,经不同浓度(0、2.5、5、10、20、40 ng/m L)TGF-β1处理24和48 h后观察其形态变化;采用CCK-8法检测经TGF-β1处理48 h后A549细胞的活力;流式细胞术检测细胞凋亡、活性氧(ROS)、线粒体活性氧及线粒体膜电位的变化;酶标仪检测ATP含量;Western blot分别检测细胞中上皮间质转化(EMT)相关标记物(E-cadherin和α-SMA)及线粒体合成相关蛋白(NRF-1及mt-TFA)的表达水平。结果:与对照组相比,随着TGF-β1浓度增加,A549细胞活力逐步上升,呈剂量-效应关系(r=0.941,P<0.05);5~20 ng/m L TGF-β1处理组凋亡率明显升高(P均<0.05);不同浓度TGF-β1处理A549细胞48 h后大部分细胞呈现明显的间质细胞形态,出现上皮间质转化;Western b lot结果显示,与对照组比较,经TGF-β1处理48 h后上皮标记物E-cadherin蛋白表达水平逐渐降低(P<0.05),间质标记物α-SMA表达水平逐渐升高(P<0.05);流式细胞术检测结果显示,5~20 n g/m L T GF-β1处理后细胞内ROS含量上升(P<0.05),线粒体活性氧上升(P<0.05),线粒体膜电位荧光强度下降(P<0.05),ATP含量降低(P<0.05),线粒体合成相关蛋白NRF-1和mt-TFA表达水平均下调(P均<0.05)。结论:TGF-β1诱导细胞发生上皮间质转化过程中线粒体的合成与功能受到影响,并由此促进了EMT的发生。