增强反应性星形胶质细胞Wnt/β-catenin信号改善小鼠脑创伤后焦虑

目的:探索脑创伤(TBI)后焦虑的发生机制及干预策略。从星形胶质细胞中Wnt/β-catenin信号活化的角度探索脑创伤后焦虑的分子机制,并通过调节Wnt/β-catenin信号探索干预策略。方法:采用可控性颅脑打击模型(CCI)制作小鼠颅脑冲击伤。利用旷场、高架十字迷宫法研究小鼠颅脑创伤后焦虑的发生;采用Wnt信号报告基因Topgal小鼠、免疫组化、TUNEL染色、Western Blot等方法研究Wnt信号及细胞凋亡的改变;利用Nestin-CreER:β-catenin EX3^(loxp/+)(Nestin-CreER/EX3)基因修饰小鼠研究条件性激活反应性星形胶质细胞中的Wnt信号对脑创伤后细胞凋亡及小鼠焦虑行为的影响。结果:与正常对照组小鼠相比,CCI组小鼠在脑创伤后2周出现明显焦虑样行为。Wnt信号报告基因β-gal在损伤区星形胶质细胞表达上调。采用Nestin-CreER/EX3基因修饰小鼠,在CCI损伤后激活Wnt信号,可显著减轻损伤区的细胞凋亡,并改善小鼠的焦虑行为。结论:脑创伤可激活反应性星形胶质细胞中Wnt/β-catenin信号并可减轻CCI后的细胞凋亡,改善小鼠的焦虑行为。

两种人胚胎干细胞系向神经元方向诱导分化的比较研究

目的:比较研究两种人胚胎干细胞系H8和H9在维持培养、向神经前体细胞和神经元方向分化的特性。方法:采用mTeSR1做为基本培养基,Matrigel做为基质胶,进行无滋养层的维持培养。采用白细胞抑制因子1(Smad-1)双抑制剂的神经前体细胞诱导,和含B27的Neurobasal联合脑源性神经营养因子(BDNF)、胶质细胞源性神经营养因子(GDNF)的神经元诱导方案。采用免疫荧光化学染色检测胚胎干细胞标记蛋白(Nanog和OCT4)、神经前体细胞标记蛋白(Nestin、Sox2和Pax6)、神经元标记蛋白Tuj-1的表达。结果:在维持培养和神经诱导的早期:H8和H9细胞在胚胎干细胞标记蛋白表达及类胚体形成方面无显著差异。神经前体细胞阶段:诱导分化相同时间(诱导14 d),两种细胞系的玫瑰花环样结构形成,及巢蛋白(Nestin)、SRY转录因子2(Sox2)的表达均无显著差异;相对而言,更高比例的H9细胞表达神经前体细胞标记蛋白成对同源基因盒6(Pax6)。神经元阶段:诱导相同时间(诱导30 d),约89%的H9细胞表达神经元标记蛋白Tuj-1,而仅约34%的H8细胞表达Tuj-1。结论:H8、H9细胞的胚胎干细胞特性相似。与H8相比,H9细胞的神经元方向分化效率更高,更适合进行神经系统疾病机制及转化研究。