谷氧还蛋白2对高氧诱导的人晶状体上皮细胞过度迁移的抑制作用

目的研究高氧环境对人晶状体上皮细胞(HLECs)迁移能力的影响及谷氧还蛋白2(Grx2)对高氧诱导的HLECs迁移的抑制作用。方法将HLECs分为高氧模型组和常氧对照组,高氧模型组采用含氧体积分数80%的混合气体培养HLECs2d,构建体外高氧诱导的HLECs氧化损伤模型,常氧对照组常氧条件下培养HLECs。利用细胞划痕试验观察各组细胞迁移情况;用鬼笔环肽染色法评估细胞骨架形态变化;采用实时荧光定量PCR法检测细胞中Grx2mRNA的表达变化。分别将高氧模型组和常氧对照组细胞再分为空质粒转染组和Grx2质粒转染组,通过转染不同质粒,观察不同转染组高氧模型细胞的迁移行为和骨架形态变化,并利用MitoSOX法流式细胞仪检测不同转染组细胞线粒体活性氧簇(ROS)含量;采用JC-1染色法测定不同转染组细胞线粒体膜电位的变化并用激光扫描共焦显微镜进行观察。结果常氧对照组和高氧模型组细胞培养过程中,生长状态良好。细胞划痕后24h和48h,高氧模型组划痕距离小于常氧对照组,差异均有统计学意义(均P<0.05);高氧模型组细胞周长长于常氧对照组,差异有统计学意义(t=-2.254,P<0.05)。细胞培养后2d,高氧模型组细胞中Grx2mRNA相对表达量为0.54±0.11,低于常氧对照组的1.00±0.00,差异有统计学意义(t=7.128,P<0.01)。Grx2质粒转染组细胞转染效率高于90%。高氧环境下,划痕后24h和48hGrx2质粒转染组细胞划痕距离宽于空质粒转染组,差异均有统计学意义(均P<0.05);Grx2质粒转染组细胞中Grx2mRNA相对表达量高于空质粒转染组,差异有统计学意义(P<0.01);Grx2质粒转染组细胞线粒体ROS平均相对荧光强度弱于空质粒转染组,差异有统计学意义(P<0.05)。高氧条件下,Grx2质粒转染组细胞红/绿荧光强度比高于空质粒转染组,差异有统计学意义(P<0.01)。结论Grx2可能通过对高氧下HLECs线粒体氧化应激的调控来抑制HLECs的过度迁移。