人iPSC源性肝细胞抗体药物肝毒性评价研究

目的 用人诱导多能干细胞(induced pluripotent stem cells,iPSC)源性肝细胞评估抗体药物的肝细胞毒性。方法 qPCR、Western blot、细胞免疫荧光检测肝细胞特征性表型分子白蛋白、尿素氮及药物代谢酶的表达;MTT法检测肝细胞生长情况;ELISA检测肝细胞白蛋白、尿素氮分泌水平;过碘酸-雪夫染色、油红O染色检测肝细胞储存糖原、脂滴的能力。结果 HcHAb18、Hab18、5A12单抗处理后人iPSC源性肝细胞生长和分泌功能并未发生明显改变;然而,肝细胞特征性表型分子表达降低,糖原和脂滴储存能力抑制,药物代谢酶表达相应改变。结论 3株单抗虽不影响人iPSC源性肝细胞的生存,但改变其表型和代谢;人iPSC源性肝细胞可用于抗体药物的肝细胞毒性评估。

铁死亡相关基因ACSL4、TFRC及Hippo通路关键分子YAP在间皮瘤组织中的表达及意义

目的:分析铁死亡相关基因长链酯酰辅酶A合成酶4(acyl-CoA synthetase long chain family member 4,ACSL4)、转铁蛋白受体(transferrin receptor, TFRC)及Hippo通路关键分子Yes相关蛋白(Yes-associated protein,YAP)在间皮瘤组织中的表达水平、相关性及意义,观察YAP活化对间皮瘤细胞系211H侵袭转移能力及铁死亡敏感性的影响。方法:应用组织芯片技术和免疫组化法观察ACSL4、TFRC及YAP在30例间皮瘤组织和10例正常组织中的表达,分析蛋白水平及分布的相关性。GEPIA数据库分析基因ACSL4、TFRC和YAP在间皮瘤组织中的m RNA水平相关性。应用逆转录病毒载体于211H细胞中过表达活化型YAP S127A (serine-127突变为alanine),利用实时荧光定量PCR检测ACSL4及TFRC表达;利用划痕实验和transwell侵袭实验检测211H细胞迁移及侵袭能力;利用erastin刺激及SYTOX Green染色检测铁死亡敏感性。结果:间皮瘤组织中YAP细胞核表达、ACSL4及TFRC阳性表达率显著高于正常组织,差异均有统计学意义(P<0.001,P<0.001,P<0.0001)。经Spearman秩相关检验,ACSL4及TFRC蛋白在间皮瘤中的表达呈正相关(Spearman r=0.61,P=0.0003);YAP在细胞核中的表达与ACSL4表达呈正相关(Spearman r=0.4872,P=0.0063)。GEPIA数据库分析发现,YAP与ACSL4、ACSL4与TFRC在间皮瘤中的m RNA表达水平均呈正相关(Spearman r=0.33, P=0.0019;Spearman r=0.52,P=0.0000)。表达活化型YAP的211H细胞,ACSL4与TFRC m RNA水平与对照细胞相比均上调;迁移侵袭能力增强;铁死亡敏感性增强。结论:YAP、ACSL4及TFRC在间皮瘤组织中表达具有正相关性;YAP活化促进间皮瘤细胞侵袭转移能力,同时通过ACSL4及TFRC提高细胞对铁死亡诱导的敏感性。YAP、ACSL4及TFRC有望成为预测间皮瘤铁死亡敏感性的潜在生物学标志物。