浅谈八年制《分子生物学》实验课程“实战化”改革

目的分析八年制《分子生物学》实验课程"实战化"改革的利与弊。方法尝试将原本分散在2 w内的"模块化"的教学内容集中在3 d之内按照更接近实验室实际操作的"实战化"方式连续授课,以问卷调查、课程考试的成绩和主观题中实验设计题的得分率来评价改革的效果。结果《分子生物学》实验课程"实战化"改革显著提高了学员总体的考试成绩和主观题中实验设计题的得分率。此外,问卷调查结果也表明学员总体上拥护改革。但同时改革也对学员的注意力、准备试剂教员的工作强度等提出了新的更高的要求。结论《分子生物学》实验课程"实战化"改革利大于弊,其能够在增加可控风险的前提下大幅提高教学效果,有望成为将来实验课教学的方向之一。

构建稳定表达病毒相关RNA的真核细胞株及其对抗肿瘤免疫促凋亡分子的影响

目的:构建稳定表达病毒相关RNA(virus-associated RNA,VA RNA)的293F-VA细胞株,并探讨其对靶向HER2阳性肿瘤的免疫促凋亡分子表达水平的影响。方法:采用PCR方法,扩增含VA RNA的功能序列,克隆入Piggy Bac转座系统质粒,将VA RNA编码序列转入293F细胞中,经过抗性筛选和流式细胞仪鉴定,得到293F-VA细胞株。将萤光素酶、红色荧光蛋白及免疫促凋亡分子编码质粒分别转入293F-VA细胞株或亲本293F细胞株,通过萤光素酶活力检测和Western Blot实验,比较两种细胞株对外源目的蛋白表达水平的影响。结果:成功构建了Piggy Bac-VA质粒。共转染Piggy Bac-VA质粒可以明显提高细胞内Fluc蛋白的表达水平(P <0. 05)。VA RNA编码序列通过Piggy Bac转座系统转入293F细胞中,获得293F-VA细胞株。与293F亲本细胞相比,293F-VA细胞株将萤火虫萤光素酶Fluc蛋白的表达水平提高363. 9%(P<0. 05);对海肾萤光素酶Rluc蛋白及红色荧光蛋白m Cherry的表达均表现出3倍左右的提高(P <0. 05)。293F-VA细胞株不仅能够提高免疫促凋亡分子e23-Fc-Fdt-t Bid在细胞内的表达水平,并且显著增加目的蛋白向细胞外分泌的水平,较293F亲本细胞提高4. 2倍(P <0. 05)。结论:建立了稳定表达VA RNA的细胞株293F-VA,该细胞株能够显著提高抗肿瘤免疫促凋亡分子的表达水平。

MS-EEPO有效教育教学法在医学院校《生物化学》实验课中的探索和应用

MS-EEPO的英文全称为Meng Shi-Effective Education in Participatory Organizations,其核心理念为"有效教育是通过组织和参与来实现的"。不同于以知识灌输为主要教学手段的传统教育理念,MS-EEPO有效教育强调"以学生为主体,向课堂要效率",给传统课堂带来了较大的冲击与挑战。为医学生开展的《生物化学》实验课具有鲜明的特点和独立性,旨在锻炼学生理论联系实践的动手能力和解决临床问题的思考能力。本文基于MS-EEPO有效教育教学法的理念和主要教学手段,结合作者本人在医学生《生物化学》实验课的教学经验和成果,简单探讨了MS-EEPO有效教育教学法在医学生《生物化学》实验课中的优势和可行性,为促进生物化学教学改革提供参考。

阿司匹林通过诱导乳腺癌细胞凋亡及自噬从而抑制细胞增殖

目的探讨阿司匹林对人表皮生长因子受体2(HER2)阳性乳腺癌AU-565细胞和三阴性乳腺癌MDA-MB-231细胞凋亡及自噬的影响。方法采用MTT法检测阿司匹林对细胞增殖的影响,流式细胞术检测阿司匹林对细胞凋亡的影响,Western blot法检测Bcl2、裂解型胱天蛋白酶3(c-caspase-3)、裂解型多腺苷二磷酸核糖聚合酶(c-PARP)及自噬相关基因3(ATG3)、微管相关蛋白1轻链3A(LC3A)、LC3B的蛋白水平。结果阿司匹林可抑制AU-565细胞和MDA-MB-231细胞增殖,使细胞凋亡率明显增加,促凋亡蛋白c-caspase-3、c-PARP表达上调,凋亡抑制蛋白Bcl2表达降低,细胞自噬相关蛋白ATG3、LC3A、LC3B表达显著上调。结论阿司匹林可通过诱导AU-565细胞和MDA-MB-231细胞凋亡及自噬,抑制细胞增殖。

miR-182通过靶向抑制腺瘤性息肉病基因(APC)促进宫颈癌细胞增殖

目的探讨microRNA-182(miR-182)在宫颈癌细胞增殖中的作用及其机制。方法使用脂质体介导的瞬时转染法增加或降低宫颈癌细胞系He La和Si Ha细胞中miR-182水平,利用CCK-8法和平板克隆形成实验观察miR-182对宫颈癌细胞增殖能力的影响,使用生物信息学预测、实时定量PCR和双荧光素酶报告基因等实验明确miR-182对腺瘤性息肉病基因(APC)的转录后基因表达调控的作用以及对Wnt下游经典信号分子c-Myc和细胞周期蛋白D1(cyclin D1)水平的影响。结果过表达miR-182明显促进宫颈癌细胞的增殖,抑制miR-182的表达则显著抑制肿瘤细胞的增殖;过表达miR-182抑制宫颈癌细胞中APC的表达,调控miR-182的表达水平影响肿瘤细胞中经典Wnt信号通路下游的表达。结论 miR-182通过抑制APC的表达激活经典Wnt信号通路的活性,提高宫颈癌细胞增殖能力。

自噬在前列腺癌发生发展和治疗中的研究进展

自噬是真核细胞通过溶酶体对其自身生物大分子和细胞器回收再利用的过程,其在维持细胞稳态中发挥重要作用,并参与多种病理生理过程。在肿瘤的发病过程中,自噬发挥“双面作用”,既可以抗癌也能促癌。前列腺癌是老年男性最常见的恶性肿瘤,研究表明前列腺癌的发生发展与自噬作用密切相关,放化疗、内分泌治疗等对肿瘤细胞造成的应激可通过自噬得以缓解,抵抗治疗,因而自噬抑制剂对于放化疗等具有协同促进作用。本文就自噬在前列腺癌中发病和治疗进行综述,以期为前列腺癌的诊治提供一些新的思路。

研究性学习在基础医学教学中的探索实践

近年来,研究性学习模式越来越被高等教育界认可。我们把研究性学习引入基础医学教学,采用“专题式”讨论课、“病例式”讨论课,和“开放式”综述撰写的教学形式,构建了“细胞与分子基础”跨学科模块课程。学生的课堂及考核反馈显示,模块课程和研究性学习显著提升了教学效果,同时体现出传统教学与研究性学习评价体系的差异,并呼唤配套研究性学习的信息资源中心的建立。

四环素诱导的YAP1敲减系统的建立及其对胃癌细胞功能的影响

目的建立一种四环素(tetracycline,DOX)诱导的基因敲减系统,并利用此系统研究YAP1对胃癌细胞功能的影响。方法构建pLKO.1-tetON-YAP1敲减的慢病毒载体,酶切和测序方法检测载体构建成功与否;慢病毒感染胃癌细胞系SGC-7901和MKN-28,建立DOX诱导的YAP1敲减的胃癌细胞系;RT-PCR检测YAP1 mRNA相对表达量,Western blotting检测YAP1蛋白水平变化;平板克隆实验检测细胞增殖情况;划痕实验和Transwell实验检测细胞迁移的情况。结果构建四环素诱导的YAP1敲减的病毒质粒,酶切鉴定结果显示,在6000 bp和3000 bp处各有一条带,测序结果与设计的shRNA序列一致。包装慢病毒并感染胃癌细胞系SGC-7901和MKN-28,DOX诱导组中,感染pLKO.1-tetON-YAP1的病毒的细胞中YAP1 mRNA的相对表达量和蛋白水平明显下调;而未诱导组则无明显变化。平板克隆形成实验结果显示,DOX诱导后shYAP1组克隆形成数明显降低;未诱导组无明显变化。划痕实验和Transwell迁移实验结果显示,DOX诱导后shYAP1组表达后细胞迁移能力受到抑制,未诱导组无明显变化。结论成功建立了四环素诱导的慢病毒系统,利用此系统敲减胃癌细胞YAP1基因,胃癌细胞增殖和迁移能力受到抑制。

LAMA3在泛癌中的表达水平及其与泛癌预后、免疫微环境的相关性分析

目的分析层粘连蛋白3(Laminin subunit alpha 3,LAMA3)在泛癌中的表达水平及其与泛癌患者预后、免疫微环境之间的关系。方法本研究从多个数据库中收集转录组、预后、免疫相关数据,可视化分析LAMA3在泛癌中的表达水平及其与泛癌预后、免疫微环境的相关性。结果与正常组织相比,LAMA3在11种肿瘤中显著高表达,如结肠癌(colon adenocarcinoma,COAD),肾透明细胞癌(kidney renal clear cell carcinoma,KIRC),胰腺癌(pancreatic adenocarcinoma,PAAD)等;在11种肿瘤中显著低表达,如胶质母细胞瘤(glioblastoma multiforme,GBM)、脑低级别胶质瘤(brain lower grade glioma,LGG)、皮肤黑色素瘤(skin cutaneous melanoma,SKCM)等。LAMA3表达水平不仅与包括PAAD在内的多种肿瘤预后显著相关,还与SKCM等多种肿瘤的肿瘤突变负荷(tumor mutation burden,TMB)、微卫星不稳定性(microsatellite instability,MSI)和肿瘤免疫浸润显著相关。此外,基因共表达分析结果表明LAMA3与多种常见的免疫基因表达显著相关。结论LAMA3可作为泛癌预后、免疫治疗反应评估的生物标志物。

原位回盲肠新膀胱术的初步研究

目的:探讨逆行全膀胱切除术后原位回盲肠新膀胱术的手术方式、近期疗效和尿流动力学特点。方法:回顾性分析2018年11月至2019年8月我科收治并行原位回盲肠新膀胱术膀胱癌患者4例,所有患者先行腹膜外逆行根治性全膀胱切除,截取回盲肠构建新膀胱,再将新膀胱与尿道吻合重建尿流通道。术后定期复查尿动力、肾功能、彩超等检查。结果:本组患者随访6~16个月,术后初期患者均有不同程度溢尿现象,3个月后逐步恢复并能良好控尿。1例术后出现尿道吻合口轻度狭窄并输尿管返流。新膀胱最大储尿容量(401.7±53.0)ml,储尿期膀胱内压(19.0±5.7)cmH2O,尿道闭合压(53.6±9.4)cmH2O,储尿期膀胱内压明显小于尿道闭合压,最大尿流率(18.7±1.5)ml/s,平均残余尿量(21.3±4.4)ml。结论:全膀胱切除术后原位回盲肠新膀胱术具有储尿囊容量大、压力低、可控性好、操作简单的优点,是一种较理想的尿流改道方式。

讨论课在本科生《细胞与分子基础》教学中的实践及分析

《细胞与分子基础》是空军军医大学新设立的一门医学类专业必修的专业基础模块课程。该模块打破了传统的学科界限,采取课堂授课与学员自学相结合、教员讲授与引导学员开展专题讨论的形式。模块教学中采用讨论式教学,教员在课前提前布置选题范围,学员根据自己的兴趣进行选题准备,课上分组讨论后教学组长点评并为获奖学员颁奖,学员课后对讨论课提出的问题进行总结和分析。讨论课激发了学员的学习兴趣,提高了独立思考能力和自我展示的能力,取得了良好的教学效果。

化疗诱导肿瘤细胞焦亡及其机制的研究进展

化疗是肿瘤治疗的传统手段，通过抑制肿瘤细胞增殖、诱导细胞死亡等多种机制发挥抗肿瘤效应。目前普遍认为，化疗药物诱导肿瘤细胞死亡的方式主要为凋亡。然而，某些肿瘤可以通过逃逸凋亡，产生对化疗的耐药。近期研究表明，一些化疗药物可以诱导肿瘤细胞发生焦亡，增强这种死亡效应有望为凋亡逃逸的肿瘤提供新的治疗思路。深入研究细胞焦亡的分子机制，对于开发新型抗肿瘤策略、探索化疗的增效减毒方法具有重要意义。对诱导肿瘤细胞焦亡的化疗药物种类及其下游效应途径进行了总结，并分析了焦亡用于抗肿瘤治疗的潜在副作用及其对策。

N-myc下游调节基因2在癫痫小鼠海马中的表达及对星形胶质细胞谷氨酸、葡萄糖摄取的影响

目的:探讨N-myc下游调节基因2(N-myc downstream regulated gene 2,NDRG2)在癫痫小鼠海马中的表达及其对小鼠脑星形胶质细胞谷氨酸和葡萄糖摄取的影响。方法:采用氯化锂-匹鲁卡品诱导法建立癫痫小鼠模型,在造模后1 d、7 d、15 d、6周处死小鼠取取海马区脑组织,Western blot检测NDRG2蛋白表达变化。原代培养野生型、NDRG2+/+和NDRG2-/-小鼠的星形胶质细胞并进行基因型鉴定。使用谷氨酸含量测定试剂盒及紫外分光光度计检测星形胶质细胞培养上清液中谷氨酸含量。流式细胞术检测2-NBDG荧光标记星形胶质细胞的阳性率。结果:(1)与对照组(0.25±0.07)比较,小鼠海马区NDRG2表达量在癫痫急性期1 d(0.45±0.06,t=-3.84,P<0.05)、7 d(0.54±0.09,t=-4.30,P<0.05)、15 d(1.04±0.06,t=-15.08,P<0.01)均有明显增加,癫痫慢性期6周(1.30±0.16,t=-10.40,P<0.01)依然保持明显的高表达。(2)检测原代细胞培养上清液剩余的谷氨酸含量,发现NDRG2-/-组星形胶质细胞对谷氨酸的摄取相对于NDRG2+/+组明显减少[(689.03±101.78)μmol/L,(113.67±37.35)μmol/L;t=9.19,P<0.01]。(3)Western blot分析NDRG2-/-组原代星形胶质细胞中EAAT1蛋白的表达显著低于NDRG2+/+组[(0.34±0.03),(1.16±0.21)],差异有统计学意义(t=-6.59,P<0.01)。(4)流式细胞术检测发现,NDRG2-/-组细胞的阳性率明显低于NDRG2+/+组细胞阳性率[(17.60±5.72)%,(72.22±8.35)%],差异有统计学意义(t=-13.22,P<0.01)。结论:NDGR2与癫痫疾病的发生发展密切相关。NDRG2的表达有利于EAAT1发挥其生理功能,促进星形胶质细胞对谷氨酸和葡萄糖的摄取,可能是一种潜在细胞保护因子,促进神经保护和修复。

慢病毒介导NCL基因沉默的胃癌细胞系的建立及对细胞增殖影响的研究

目的:本研究通过建立慢病毒介导的NCL基因沉默的胃癌细胞系,研究NCL沉默对胃癌细胞增殖能力的影响,为深入探究胃癌发生发展的分子机制提供理论基础。方法:利用小发卡RNA(shRNA)介导的慢病毒系统沉默胃癌细胞中的NCL,并利用RT-qPCR和免疫印迹检测基因沉默效果;并利用CCK-8实验和平板克隆形成实验检测胃癌细胞的增殖能力的改变。结果:琼脂糖凝胶电泳实验检测经酶切鉴定的pKLO.1-NCL载体,显示5000 bp和2000 bp两条带,测序峰图显示与设计序列一致;利用HEK293T包装病毒,感染胃癌细胞SGC-7901,免疫印迹结果显示sh NCL组NCL蛋白水平显著低于对照组,RT-qPCR结果显示,sh NCL组NCL表达量显著降低,为对照组的0.4209±0.087倍(P<0.001);CCK-8实验结果显示,sh NCL组在第5天的吸光值较对照组显著降低(P<0.001),平板克隆形成实验结果显示,sh NCL组克隆形成能力较对照组显著降低,克隆形成数量显著低于对照组(P<0.01)。结论:建立了慢病毒介导的NCL基因沉默的胃癌细胞系SGC-7901,并利用此系统研究了NCL基因对胃癌细胞增殖能力的影响,证明了NCL基因能够促进胃癌细胞的增殖,为后续研究NCL基因在胃癌细胞中的作用提供基础。